王 崇,姜艷芳,金清龍,?？∑?/p>

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院肝膽胰內(nèi)科,吉林長春 130021)

肝病患者血清Gc球蛋白和細胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10檢測及臨床意義

王 崇,姜艷芳,金清龍,?？∑?

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院肝膽胰內(nèi)科,吉林長春 130021)

目的分析Gc球蛋白在肝病患者,尤其是重癥肝炎患者血中的濃度改變及臨床意義;探討肝病患者血清Gc球蛋白和細胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10的關(guān)系。方法應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試劑盒體外檢測不同類型肝病患者血清中游離Gc球蛋白和細胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10的濃度。結(jié)果重癥肝炎組較急性、慢性肝炎組、肝硬化組及正常對照組相比,Gc球蛋白濃度下降得最為顯著,且有統(tǒng)計學(xué)意義;Gc球蛋白和細胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10在各種肝病中具有相關(guān)性。結(jié)論Gc球蛋白的濃度的改變和肝臟壞死程度關(guān)系密切,Gc球蛋白可以作為診斷重癥肝炎的敏感指標(biāo);Gc球蛋白和上述4種細胞因子在不同的肝病類型中具有不同的相關(guān)性。

重癥肝炎;Gc球蛋白;細胞因子

(Chin J Lab Diagn,2010,14:0870)

Gc球蛋白是一種主要由肝臟產(chǎn)生的糖蛋白,大量存在于血漿中,具有多種功能[1,2],其中一項重要的功能就是清除細胞壞死時釋放入血的肌球蛋白,以減少肌球蛋白對機體損傷,同時因不斷消耗Gc球蛋白使血中Gc球蛋白濃度降低[5-8],本研究應(yīng)用ELISA方法體外檢測各種肝臟疾病,尤其是重癥肝炎患者血清中Gc球蛋白的量,探討Gc球蛋白和各種肝臟疾病關(guān)系。機體免疫調(diào)節(jié)在肝臟損傷中具有重要的作用,細胞因子是機體免疫調(diào)節(jié)的重要元素,其在不同肝病中有不同的作用和反應(yīng),本研究應(yīng)用ELISA方法測定肝病患者血清細胞因子IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10的濃度,并探討肝病中Gc球蛋白和上述4種細胞因子的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 病例選擇

選取2006年2月-2007年2月入住吉林大學(xué)第一醫(yī)院感染科的肝病患者165人,具體如表1。

表1 各肝病組的具體人數(shù)及平均年齡

上述患者入院后,采集靜脈血2-4毫升,留取血清或血漿置于-20℃冷凍保存。診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2000年9月西安中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲學(xué)分會、肝病學(xué)分會聯(lián)合修訂的《病毒性肝炎防治方案》[3]及中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會肝衰竭與人工肝學(xué)組,中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會重型肝病與人工肝學(xué)組聯(lián)合制定的《肝衰竭診療指南》[4]。

1.2 實驗試劑、儀器和方法

酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒(KIT034),人白介素-10、人白介素-4、人干擾素-γ、人腫瘤壞死因子-α定量酶聯(lián)檢測試劑盒(96人),BIO-RAD550酶標(biāo)儀(美國)。應(yīng)用ELISA方法檢測血清中游離的Gc球蛋白和細胞因子 IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10 的濃度。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有的數(shù)據(jù)采用spss11.5軟件對數(shù)據(jù)進行分析。P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義;P＜0.01為有顯著統(tǒng)計學(xué)意義;P＜0.001為有非常顯著統(tǒng)計學(xué)意義。

2 實驗結(jié)果

2.1 重癥肝炎組Gc球蛋白濃度值最低,為157.26±79.68 mg/ml,較急性肝炎組、慢性肝炎組、肝硬化組及正常對照組相比,Gc球蛋白濃度的降低具有非常顯著的統(tǒng)計學(xué)意義。慢性乙型肝炎組、肝硬化組的Gc球蛋白濃度和正常對照組相比,未見統(tǒng)計學(xué)差別(p＞0.05),見表2和表3。

2.2 IL-4、TNF-α、IFN-γ在急性乙型肝炎、慢性乙型肝炎、乙型肝炎后肝硬化及重癥肝炎組患者外周血的濃度,較正常對照組相比,均是顯著升高的(P＜0.001-P＜0.05),而IL-10的肝病組與正常組之間、肝病組之間相比,均未有顯著差別(P＞0.05)見表2。

表2 各組肝病的Gc球蛋白和4種細胞因子的濃度(±s)

表2 各組肝病的Gc球蛋白和4種細胞因子的濃度(±s)

⑴⑵⑶①③ⅠⅢP＜0.001;②⑷ⅡⅣP＜0.01;④P＜0.05;㈠㈡㈢㈣P＞0.05

組別 例數(shù) Gc球蛋白(mg/ml) IFN-γ(ng/ml) TNF-α(ng/ml) IL-4(ng/ml) IL-10(ng/ml)重癥肝炎組 36 157.26±79.68 72.36±74.24⑴ 28.95±30.79① 31.63±14.82Ⅰ 90.08±237.55㈠乙肝肝硬化組 54 224.88±64.77 112.52±83.93⑵ 39.81±75.79② 28.82±33.39Ⅱ 59.82±204.48㈡慢性乙型肝炎組 46 249.42±28.44 68.58±53.41⑶ 29.11±45.18③ 22.99±12.55Ⅲ 24.66±37.33㈢急性乙型肝炎組 15 250.28±28.15 103.86±90.39⑷ 16.73±24.72④ 22.68±11.63Ⅳ 23.91±18.13㈣正常對照組 14 237.11±5.89 8.52±12.01 2.46±5.18 12.06±7.77 19.28±15.64

表3 各肝病組Gc球蛋白和重癥肝炎組、正常對照組之間相比的 t值和p值(上為 t值;下為 p值)

2.3 Gc球蛋白和不同肝病組中細胞因子的相關(guān)性Gc球蛋白在不同肝病組中,和細胞因子有著或正或負的相關(guān)性,見表4。

和正常對照組相比*P＜0.05,**P＜0.01。

2 討論

Gc球蛋白在機體存在嚴重損傷時,如重癥肝炎中,血中濃度是明顯降低的,Gc球蛋白是急性時相反應(yīng)蛋白,炎癥存在時,肝臟合成Gc球蛋白就會增加,Schi?dt FV等[9]研究提示,肝臟損傷時,肝臟合成Gc球蛋白的速率是增加的,暴發(fā)性肝衰竭和急、慢性肝炎,Gc球蛋白合成速率增加至4.1±1.3 mg/min,而正常對照組中其合成速率為0.6 mg/ml。不同肝病患者循環(huán)中Gc球蛋白濃度不同依賴于Gc球蛋白合成與消耗速率之間的關(guān)系。重癥肝炎時,Gc球蛋白和大量肝細胞破壞釋放入血的肌球蛋白結(jié)合并被消耗,機體合成Gc球蛋白的速率增加不能代償Gc球蛋白的迅速消耗而使Gc球蛋白顯著降低。Lee等實驗證明:暴發(fā)性肝臟衰竭患者Gc球蛋白的水平是顯著降低的,且是各種肝臟損傷中Gc球蛋白下降水平最低者[10,11]。本研究中重癥肝炎患者體內(nèi)Gc球蛋白水平亦顯著低于正常對照組和其它肝病組,其它肝臟疾病如急、慢性肝炎,肝硬化等,Gc球蛋白未見明顯降低,甚至是升高的,考慮可能是機體反應(yīng)性合成Gc球蛋白的速率升高,當(dāng)肝細胞被破壞速率較緩或反復(fù)少量破壞時,未有大量肌球蛋白短時間釋放入血,消耗大量的Gc球蛋白,血中Gc球蛋白不會減少很明顯(如肝硬化、急性乙型肝炎),甚至可能因為代償而是增高的(慢性乙型肝炎),從而體現(xiàn)機體的自我保護機制。通過重癥肝炎和其它肝病患者體內(nèi)Gc球蛋白的比較,可知Gc球蛋白濃度在重癥肝炎患者體內(nèi)的改變顯著、敏感,且可以協(xié)助診斷重癥肝炎。重癥肝炎病情重,預(yù)后差,診斷復(fù)雜,早期準(zhǔn)確診斷重癥肝炎有利于采用正確、有效、及時治療手段,從而提高患者生存率,因為Gc球蛋白檢測可以敏感反映肝臟壞死程度,所以Gc球蛋白檢測對早期、準(zhǔn)確診斷重癥肝炎具有重要意義。國外已經(jīng)應(yīng)用Gc球蛋白作為診斷重癥肝炎及評價預(yù)后的參考指標(biāo),2005年美國肝病學(xué)會發(fā)布了對急性肝衰竭處理的建議中有關(guān)于Gc球蛋白應(yīng)用情況介紹。國內(nèi)關(guān)于Gc球蛋白的研究極少,本研究是近年來首例關(guān)于Gc球蛋白研究。

乙型肝炎病毒進入機體,機體通過免疫應(yīng)答抗病毒,T淋巴細胞是病毒特異性的免疫應(yīng)答中最重要的效應(yīng)器,T淋巴細胞在受到病毒抗原刺激后,分化為殺傷性T淋巴細胞(CTL或Tc)和輔助T淋巴細胞(Th),Tc一方面通過直接溶解感染細胞來清除病毒,但更主要的是通過分泌 IFN-γ、TNF-α等細胞因子,通過非溶解細胞的途徑清除病毒[12-15]。Th細胞可以分為Th1和Th2兩個主要亞型,Th細胞中的Th1分泌TNF、IFN-γ等細胞因子,介導(dǎo)細胞免疫,Tc細胞活化就是通過Th1介導(dǎo)的,Th1反應(yīng)占優(yōu)勢時,有利于病毒的完全清除;Th2細胞主要分泌IL-4、IL-10等細胞因子,這些因子可以抑制Th1型細胞因子的作用,并且介導(dǎo)體液免疫[16],Th2免疫占優(yōu)勢時,可以導(dǎo)致病毒感染的慢性化。本研究顯示在重癥肝炎組,Gc球蛋白和IFN-γ成正相關(guān),可能為重癥肝炎時,大量肝臟細胞破壞,乙肝病毒水平下降,用于清除病毒的T細胞分泌的IFN-γ水平亦隨之相對下降;在其它肝病中,Gc球蛋白和細胞因子也存在各種相關(guān)性,從而提示,Gc球蛋白和肝損傷關(guān)系密切,水平可以隨著肝損傷程度不同而改變,機體免疫調(diào)節(jié)在不同類型、程度肝損傷中表現(xiàn)不同,肝損傷類型、程度和機體免疫調(diào)節(jié)關(guān)系密切,更加深入的了解需要進一步研究探索。

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The detection of Gc-globulin and cytokines IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10 in the serum of patients of liver disease

WANG Chong,JIANGYang-fang,JIN Qing-long,et al.(Department of Hepatobiliary andPancreaticDiseases,First Hospital ofJilinUniversity,Changchun130021,China)

ObjectiveThis study was designed to detect the concentration ofGcglobulin andassess itsclinical significance in different liver diseases.especially in severe hepatitis.and discuss the correlation between Gc globulin and cytokines.MethodsDouble sandwiches ELISA was used to detect serum Gc globulinconcentration and cytokines IFN-γ,TNF-α,IL-4,IL-10 concentration.ResultsThere is significant difference between severe hepatitis group and control group,acute HBV hepatitis group,chronic HBV hepatitis group,HBV related cirrhosis group separately(P＜0.001).In various liver diseases,Gc-globulin is correlatedwith cytokines IFN-γ,TNF-α,IL-4,IL-10.ConclusionGc globulinis closely correlatedwith liver injury.Gc globulin couldbe usedto diagnose severe hepatitis.Gc-globulin is correlated with the above 4 cytokines in different liver diseases.

severe hepatitis,Gc globulin,cytokines

R575

A

1007-4287(2010)06-0870-03

國家自然科學(xué)基金資助課題(30771912,核苷類似物治療對慢乙肝患者免疫功能重建的作用及其機制)

*通訊作者牛俊奇(E-mail:junqiniu@yahoo.com.cn)

王崇(1981-),吉林大學(xué)第一醫(yī)院肝膽胰內(nèi)科,醫(yī)師,主要研究肝膽疾病。

2009-06-12)