郭洪梅

（山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院，山東濰坊 261061）

雞大腸桿菌病一直是危害養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展的主要疾病之一，該病表現(xiàn)形式復(fù)雜多變，不分年齡和季節(jié)，易成為其他疾病的并發(fā)病或繼發(fā)病，發(fā)病率均在其他禽類(lèi)疾病之首。大腸桿菌的血清型眾多，致病性菌株分布范圍較廣，且具有較強(qiáng)的地域性[1]。高崧等在國(guó)內(nèi)做了較大的一次有關(guān)禽致病性大腸桿菌的流行病學(xué)調(diào)查表明，禽病原性大腸桿菌的優(yōu)勢(shì)血清型與時(shí)間、地區(qū)及實(shí)地狀況密切相關(guān)[2]。因此開(kāi)展特定地區(qū)雞大腸桿菌的流行病學(xué)調(diào)查對(duì)摸清該病流行情況及病原的血清型，以便采取恰當(dāng)方法防制本病十分必要。

本研究結(jié)合門(mén)診三年來(lái)的診斷情況及駐場(chǎng)獸醫(yī)的問(wèn)卷調(diào)查對(duì)濰坊地區(qū)的雞大腸桿菌流行情況進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，并對(duì)某些雞場(chǎng)進(jìn)行了大腸桿菌的分離鑒定和血清型分型，為指導(dǎo)濰坊地區(qū)的大腸桿菌防治提供了重要參考依據(jù)。

1 材料

1.1 病料來(lái)源

病原學(xué)調(diào)查所用病料來(lái)源于初診患病雞群中，每個(gè)雞群取病死肉雞10只，無(wú)菌采取病料。

1.2 主要試劑

麥康凱瓊脂、普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂、微量生化發(fā)酵管等均購(gòu)自上海醫(yī)藥試劑公司。革蘭氏染色液，由山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室配制。大腸桿菌O血清型鑒定用單因子血清和多因子血清等均購(gòu)自中國(guó)獸藥監(jiān)察所。

2 方法

2.1 調(diào)查對(duì)象及調(diào)查方式

根據(jù)濰坊地區(qū)養(yǎng)殖行業(yè)的現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì)，本研究選取兩種類(lèi)型的養(yǎng)殖場(chǎng)作為研究對(duì)象，即規(guī)模化水平較高的標(biāo)準(zhǔn)化肉雞飼養(yǎng)場(chǎng)和散養(yǎng)戶(hù)為主的小型肉雞飼養(yǎng)大棚。隨機(jī)選擇24個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化肉雞飼養(yǎng)場(chǎng)118個(gè)雞群和220個(gè)肉雞散養(yǎng)戶(hù)作為本次調(diào)查的對(duì)象。標(biāo)準(zhǔn)化肉雞飼養(yǎng)場(chǎng)采用駐場(chǎng)獸醫(yī)問(wèn)卷方式，對(duì)雞群的發(fā)病情況進(jìn)行調(diào)查，對(duì)發(fā)病雞群采取病料進(jìn)行病原學(xué)調(diào)查；對(duì)大棚肉雞飼養(yǎng)場(chǎng)、戶(hù)采用門(mén)診現(xiàn)場(chǎng)詢(xún)問(wèn)，并采取病料進(jìn)行病原學(xué)調(diào)查。

同時(shí)對(duì)山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院動(dòng)物醫(yī)院禽病門(mén)診2006年1月份至2008年12月份確診為大腸桿菌病的發(fā)病及混合感染情況進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)。

2.2 大腸桿菌病病例的判定標(biāo)準(zhǔn)

臨床感染大腸桿菌病病例的判定標(biāo)準(zhǔn)如下：

10日齡以?xún)?nèi)雛雞：精神沉郁，常擁擠在一起，少食或不食，腹部大，水樣腹瀉，臍孔及其周?chē)つw發(fā)紅、水腫。病死雞剖檢后可見(jiàn)卵黃吸收不良，卵黃囊腫大，呈黃綠色，囊內(nèi)充滿(mǎn)黃綠色水樣或粘稠液體，腸道卡他性炎癥，肝臟淤血或有出血，有時(shí)可見(jiàn)散在的淡黃色壞死灶，氣囊壁混濁。

11~50日齡肉雞：病雞精神沉郁，食欲下降，羽毛松亂，下痢，往往同時(shí)兼有其他疾病癥狀。剖檢主要表現(xiàn)為纖維素性心包炎、肝周炎、腹膜炎、氣囊炎等。有的病例呈急性經(jīng)過(guò)，表現(xiàn)為突然死亡，病死雞剖檢時(shí)僅見(jiàn)肝、脾腫大、充血、腹腔液體增多。

2.3 大腸桿菌的分離鑒定

2.3.1 細(xì)菌分離與純培養(yǎng)

從上述病死禽內(nèi)臟挑取病料，在麥康凱培養(yǎng)基上進(jìn)行三區(qū)劃線(xiàn)，倒置于37℃恒溫箱培養(yǎng)18~24 h后，挑取粉紅色單個(gè)菌落，于普通瓊脂平板上三區(qū)劃線(xiàn)進(jìn)行純培養(yǎng)，倒置放于37℃恒溫箱，培養(yǎng)18~24 h后，將平板放置于4℃中保存，待用。

2.3.2 細(xì)菌的染色鏡檢

細(xì)菌染色鏡檢按常規(guī)方法進(jìn)行。

2.3.3 分離菌的生化試驗(yàn)

參照說(shuō)明書(shū)按常規(guī)方法對(duì)所分離的菌株進(jìn)行19項(xiàng)生化實(shí)驗(yàn)。

2.3.4 分離菌O血清型鑒定

所有細(xì)菌分離株均按中國(guó)獸藥監(jiān)察所提供的產(chǎn)品使用說(shuō)明書(shū)對(duì)大腸桿菌O血清型進(jìn)行鑒定。

3 結(jié)果與分析

3.1 2006—2008年門(mén)診確診大腸桿菌發(fā)病情況統(tǒng)計(jì)

對(duì)動(dòng)物醫(yī)院禽病門(mén)診近三年的病例進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，三年來(lái)共就診家禽病例10 823例，其中大腸桿菌病2008年、2007年與2006年分別占總就診病例的10.3%、10.8%和12.2%；大腸桿菌病與病毒病混感病例分別占總就診病例的 11.3%、8.8%和11.7%；大腸桿菌病與其他細(xì)菌的混感病例占總就診病例的6.7%、6.14%和 6.3%（見(jiàn)表 1）。

3.2 臨床發(fā)病情況調(diào)查

根據(jù)2.2介紹的判定標(biāo)準(zhǔn)，在調(diào)查的24個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化肉雞飼養(yǎng)場(chǎng)118個(gè)雞群中，初診有22個(gè)雞群患有大腸桿菌病，占被調(diào)查雞群的18.6%（見(jiàn)表2）。在調(diào)查的220個(gè)大棚肉雞飼養(yǎng)場(chǎng)、戶(hù)中，初診有66個(gè)雞群患有大腸桿菌病，占被調(diào)查雞群的30%（見(jiàn)表3）。不同雞場(chǎng)大腸桿菌病發(fā)病率和死亡率統(tǒng)計(jì)見(jiàn)表4。

3.3 病原學(xué)鑒定

3.3.1 革蘭氏染色鏡檢

對(duì)所有分離菌經(jīng)革蘭氏染色后，鏡下均可見(jiàn)大量散在的紅色、中等大小、兩端鈍圓的無(wú)芽孢直桿菌。

3.3.2 生化試驗(yàn)

分離菌株都發(fā)酵麥芽糖、甘露醇、阿拉伯糖、葡萄糖，大多數(shù)菌株可迅速發(fā)酵木糖、乳糖。所有菌株不產(chǎn)生H2S、不分解尿素、不利用枸櫞酸鹽、不液化明膠。V－P試驗(yàn)呈陰性，M－R試驗(yàn)和吲哚試驗(yàn)均呈陽(yáng)性。通過(guò)鑒定，88個(gè)培養(yǎng)菌中有75株分離菌株檢測(cè)結(jié)果符合大腸桿菌生化鑒定指標(biāo)，判定為大腸桿菌。

3.3.3 初診病例中大腸桿菌的分離情況統(tǒng)計(jì)

對(duì)初診病例中大腸桿菌進(jìn)行分離鑒定，從統(tǒng)計(jì)結(jié)果可以看出，細(xì)菌的分離率都較高，達(dá)到80%以上，平均分離率為85.2%。各地的細(xì)菌分離率存在一定的差距，這與細(xì)菌分離操作中的誤差以及獸醫(yī)臨床診斷的準(zhǔn)確率有關(guān)（見(jiàn)表5）。

3.3.4 分離菌的O血清型鑒定

通過(guò)玻板凝集和試管凝集試驗(yàn)，對(duì)分離鑒定的75株大腸桿菌進(jìn)行血清型測(cè)定，測(cè)出了68株大腸桿菌的血清型，定型率為90.7%。這68株大腸桿菌的O血清型覆蓋了14種血清型，其中所占菌株數(shù)最多的前4種血清型分別為：O78（17）、O2（10）、O15（8）、O11（7），共包含42株分離菌，占定型菌株總數(shù)的61.8%，但血清型種類(lèi)僅占總血清型種類(lèi)的28.6%。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以確定 O78、O2、O15、O11為本地區(qū)大腸桿菌病的優(yōu)勢(shì)血清型。分離菌株的血清型分布如表6所示。

3.4 大腸桿菌病雞群中混合感染或繼發(fā)感染調(diào)查結(jié)果

對(duì)上述鑒定為大腸桿菌病的病例同時(shí)進(jìn)行其它病原的統(tǒng)計(jì)。結(jié)果顯示，大腸桿菌與病毒性疾病或其他細(xì)菌性疾病混感后引起的發(fā)病率和死亡率顯著高于單純大腸桿菌感染發(fā)病（見(jiàn)表7）。

4 討論

雞大腸桿菌病是危害養(yǎng)雞業(yè)發(fā)展的重要疾病之一，發(fā)病率一直較高。造成這種現(xiàn)象的原因主要是大腸桿菌的血清型眾多，致病性菌株分布范圍較廣，具有較強(qiáng)的地域性，現(xiàn)有的疫苗不能有效防治。高崧[2]等關(guān)于禽致病性大腸桿菌的流行病學(xué)調(diào)查表明，禽病原性大腸桿菌的優(yōu)勢(shì)血清型與時(shí)間、地區(qū)及實(shí)地狀況密切相關(guān)。因此開(kāi)展特定地區(qū)雞大腸桿菌的流行病學(xué)調(diào)查成為大腸桿菌病防治的重要基礎(chǔ)。

針對(duì)不同地區(qū)雞大腸桿菌病的流行病學(xué)調(diào)查已有不少的報(bào)道，這些報(bào)道顯示了不同地區(qū)大腸桿菌優(yōu)勢(shì)血清型的差異[3-5]。如彭孝先等對(duì)某大型雞場(chǎng)大腸桿菌病的流行病學(xué)調(diào)查顯示該雞場(chǎng)的優(yōu)勢(shì)血清型為O78、O2和O1等，盧曉輝等對(duì)河南省部分地區(qū)雞源大腸桿菌的調(diào)查顯示O141、O88和O78為該地區(qū)的優(yōu)勢(shì)血清型。在本研究中，我們對(duì)濰坊地區(qū)不同雞場(chǎng)進(jìn)行了大腸桿菌的調(diào)查統(tǒng)計(jì)，對(duì)表現(xiàn)為大腸桿菌的病例進(jìn)行了病原的分離鑒定和血清型分型，結(jié)果表明濰坊地區(qū)存在著多種血清型的流行，但優(yōu)勢(shì)血清型為O78、O2、O15。結(jié)合其他報(bào)道可以看出，常見(jiàn)血清型O78和O2始終是危害雞的主要大腸桿菌血清型。

在很多的報(bào)道中，與大腸桿菌伴發(fā)的細(xì)菌性和病毒性疾病也存在較高的比例，如柴同杰等報(bào)道了在山東櫻桃谷鴨群鴨圓環(huán)病毒與大腸桿菌的混合感染[6]；姬香梅等報(bào)道了在蛋雞中新城疫與大腸桿菌的混合感染[7]。此外，大腸桿菌病與禽流感的混合感染也曾多次報(bào)道[8-9]。本次調(diào)查顯示，濰坊地區(qū)大腸桿菌病例同樣伴發(fā)有一些細(xì)菌或病毒的混合感染（表1、表7），相對(duì)于大腸桿菌的單獨(dú)感染，混合感染導(dǎo)致的發(fā)病率和死亡率明顯升高。從表2和表3也可以看出，大棚飼養(yǎng)場(chǎng)/戶(hù)大腸桿菌病的發(fā)病率比標(biāo)準(zhǔn)化飼養(yǎng)場(chǎng)明顯要高，這間接證明了大腸桿菌病是一種典型的條件性致病菌，其發(fā)病與雞群的管理，雞舍環(huán)境條件如衛(wèi)生、通風(fēng)、溫度、濕度等因素有著密切的關(guān)系。我們推測(cè)大腸桿菌單獨(dú)存在時(shí)發(fā)病輕微甚至不發(fā)病，當(dāng)其他因素特別是細(xì)菌或病毒與其混合感染后降低了機(jī)體的免疫能力，大腸桿菌的復(fù)制及致病性得到增強(qiáng)，導(dǎo)致發(fā)病率和死亡率顯著升高。這一結(jié)果提示我們?cè)谧龊么竽c桿菌防治的同時(shí)，也要做好其他病原的防治工作。

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