753000 石嘴山市老年病康復(fù)醫(yī)院 宋潔

753000 石嘴山市煤炭總院 高愛玲

初步藥效學(xué)研究表明，知母總皂苷具有確切的防治缺血性腦卒中活性，將其制備成薄膜衣片劑具有良好的臨床應(yīng)用前景。為便于質(zhì)量控制對其進(jìn)行了HPLC法測定知母總皂苷片中的知母皂苷B-Ⅱ含量的研究。

1 知母總皂苷片制備

1.1 概述 知母總皂苷是從知母中提取的總皂苷，初步藥效學(xué)研究表明，本品具有確切的防治缺血性腦卒中活性。知母總皂苷為淡黃色粉末，無臭，味微苦，有一定吸濕性。片劑為常用口服劑型，且具有分劑量準(zhǔn)確，穩(wěn)定性好，易于工業(yè)化生產(chǎn)等優(yōu)勢，考慮到知母總皂苷具有一定的吸濕性，為增加片劑穩(wěn)定性，故采用薄膜包衣技術(shù)將其制成薄膜包衣片。

1.2 規(guī)格以及片重 根據(jù)相關(guān)藥效研究資料，推薦人每天服用劑量為知母總皂苷300 mg，為方便臨床分劑量服用(每天服用3次，1片/次)，確定本品的規(guī)格為每片含知母總皂苷100 mg，設(shè)計片重為300 mg。

1.3 輔料選擇[1]通常片劑制備中輔料的選用應(yīng)遵循穩(wěn)定、價廉的原則，針對知母總皂苷的理化性質(zhì)，同時結(jié)合片劑生產(chǎn)工藝及工業(yè)化大生產(chǎn)的要求，篩選處方輔料。根據(jù)知母總皂苷具有良好的水溶性，粉末流動性較差等特點，為保證壓片時有較好的流動性、較大的片劑硬度和較快的溶出速度，經(jīng)過試驗選用可壓性好的微晶纖維素、預(yù)膠化淀粉和乳糖為稀釋劑，為減少粘性，方便制軟材，采用5%PVP無水乙醇溶液作粘合劑，預(yù)膠化淀粉兼作崩解劑，硬脂酸鎂為潤滑劑。采用濕法制粒法壓片，平均裸片重約300 mg。考慮到知母總皂苷具有一定的吸濕性，為增加片劑穩(wěn)定性，故采用薄膜包衣技術(shù)將其制成薄膜包衣片。

2 儀器和試劑、試藥

2.1 主要儀器 色譜儀：Waters高效液相色譜儀，510泵；檢測器：SEDEX 75型蒸發(fā)光散射檢測器 (ELSD)，迪馬公司；工作站：SR2000(上海軍銳科技有限公司)；色譜柱：大連依利特hypersil ODS柱(4.6 mm×250 mm，10 μm)；流動相：乙腈∶水(25∶75)；流速為0.8 mL/min，載氣壓力3.5 bar，漂移管溫度40℃，GAIN=7。

2.2 試劑 乙腈為色譜純，水為重蒸水。

2.3 對照品 知母皂苷B-Ⅱ，來自陜西天森藥物研究開發(fā)有限公司。

3 方法與結(jié)果

3.1 線性范圍考察 對照品儲備液的制備：精密稱取知母皂苷B-Ⅱ?qū)φ掌?00.12 mg置100 mL量瓶內(nèi)，以流動相：乙腈∶水(25∶75)溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為知母皂苷B-Ⅱ?qū)φ掌穬湟骸?/p>

知母皂苷工作曲線的繪制：取知母皂苷B-Ⅱ?qū)φ掌穬湟?.1、0.2、0.3、0.5、1.0 mL，置10 mL量瓶中，以流動相稀釋至刻度，配制成濃度為10、20、30、50、100 μg/mL的溶液，作為知母皂苷B-Ⅱ?qū)φ掌啡芤?。分別取20 μL注入液相色譜儀，記錄峰面積，并求對數(shù)，結(jié)果(圖1)。

圖1知母皂苷B-Ⅱ濃度與峰面積的線性關(guān)系

X為知母皂苷B-Ⅱ?qū)φ掌返臐舛?，Y為峰面積。結(jié)果表明知母皂苷B-Ⅱ?qū)φ掌吩?0～100 μg/mL范圍內(nèi)濃度與峰面積成良好的線性關(guān)系。

3.2 重復(fù)性 取濃度為300 μg/mL知母皂苷B-Ⅱ?qū)φ掌啡芤?，照上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣5次，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，考查日內(nèi)精密度，結(jié)果(表1)。

表1 日內(nèi)精密度試驗結(jié)果(峰面積)

取濃度為400 μg/mL知母皂苷B-Ⅱ?qū)φ掌啡芤?，照上述色譜條件，連續(xù)3 d，每天進(jìn)樣1次，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，考查日間精密度，結(jié)果(表2)。

表2 日間精密度試驗結(jié)果(峰面積)

3.3 穩(wěn)定性 取濃度為250 μg/mL知母皂苷B-Ⅱ?qū)φ掌啡芤海丈鲜錾V條件，每隔2 h進(jìn)樣1次，共進(jìn)樣5次，計算相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，結(jié)果(表3)。

表3 穩(wěn)定性試驗結(jié)果(峰面積)

3.4 回收率 稱取輔料適量，按80%、100%和120%的比例，分別加入知母皂苷B-Ⅱ?qū)φ掌愤m量，按片劑含量測定項下的條件和方法測定，計算回收率，結(jié)果(表4)。

表4 知母總皂苷加樣回收率試驗測定結(jié)果(n=3)

試驗結(jié)果表明，知母皂苷B-Ⅱ3種不同濃度測定的回收率分別為96.3%、96.4%、96.1%，平均回收率為96.27%；日內(nèi)和日間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.8%和0.75%。上述測定方法專屬性強。

3.5 含量測定方法

3.5.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 用碳十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈∶水(25∶75)為流動相；載氣壓力3.5 bar，漂移管溫度40℃，GAIN=7。理論板數(shù)按知母皂苷B-Ⅱ峰計算，應(yīng)不低于2 000。

3.5.2 對照品溶液的制備 精密稱取知母皂苷B-Ⅱ?qū)φ掌?00.12 mg，置100 mL量瓶內(nèi)，以流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為知母皂苷B-Ⅱ?qū)φ掌穬湟?。精密量取知母皂苷B-Ⅱ?qū)φ掌穬湟? mL，置10 mL量瓶中以流動相稀釋至刻度，即為300 μg/mL的知母皂苷B-Ⅱ?qū)φ掌啡芤骸?/p>

3.5.3 測定法 取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于知母總皂苷100 mg)，置100 mL量瓶中，加流動相適量，震搖使溶解，加流動相至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 mL，置10 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

分別取20 μL注入液相色譜儀，記錄峰面積，計算結(jié)果。3批結(jié)果分別為60.9 mg、61.5 mg、61.2 mg，測定結(jié)果良好。

4 結(jié)論

通過上述HPLC法測定本人制備的知母總皂苷片中知母皂苷B-Ⅱ含量的研究，證實方法專屬性強、簡便，可用于產(chǎn)品大生產(chǎn)的質(zhì)量控制。

[1]畢殿洲.藥劑學(xué)[M].4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1997：317-322.