蘇景深 孫增濤 劉恩順 劉 偉 關(guān) 鵬 天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院（300150）

不同治法對ALI/ARDS大鼠炎性相關(guān)因子作用的影響

蘇景深 孫增濤 劉恩順 劉 偉 關(guān) 鵬 天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院（300150）

目的 觀察瀉肺法、通腑法、通腑瀉肺法對實(shí)驗(yàn)性大鼠ALI/ARDS炎性細(xì)胞因子干預(yù)作用。方法 采用油酸加內(nèi)毒素方法復(fù)制大鼠ALI/ARDS模型，分別采用瀉肺方、通腑方、通腑瀉肺方灌胃。結(jié)果 第三天時(shí)，治肺組、治腸組及肺腸同治組大鼠血清TNF-α較模型組明顯降低（P＜0.01）；治腸組與肺腸同治組較模型組IL-1β明顯降低（P＜0.01）；治肺組和治腸組較模型組IL-6含量降低（P＜0.05）；第七天時(shí)，治肺組、治腸組及肺腸同治組大鼠血清TNF-α較模型組明顯降低（P＜0.01）；治腸組與肺腸同治組IL-1β明顯降低（P＜0.01）；治肺組IL-6含量降低（P＜0.05）。對腫瘤壞死因子三者都改善明顯，且三組之間無明顯差異；對IL-1β改善水平治腸組和肺腸同治組明顯優(yōu)于治肺組；對IL-6改善水平治肺組要優(yōu)于治腸組和肺腸同治組。結(jié)論 瀉肺法、通腑法和通腑瀉肺法均可以降低大鼠血清中炎性細(xì)胞因子水平，改善動(dòng)物的生存狀態(tài)，通過降低血清細(xì)胞因子水平，減輕肺組織和全身的炎癥損傷。三組對血清炎性細(xì)胞因子水平均有改善效果，但他們作用靶點(diǎn)不同，存在不同的作用機(jī)制。

通腑瀉肺法；急性肺損傷；急性呼吸窘迫綜合征；炎性細(xì)胞因子

ALI/ARDS是一種常見危重癥，幾乎涉及各個(gè)臨床學(xué)科，發(fā)病率居高不下，最近的資料[1,2]顯示，ALI/ARDS的發(fā)病率為79/10萬和59/10萬人，病死率高達(dá)50%～60%[3]，嚴(yán)重威脅著患病人群的生命安全。中醫(yī)文獻(xiàn)中雖無ALI/ARDS的病名，但根據(jù)其臨床所表現(xiàn)的呼吸窘迫、發(fā)紺、便秘、腹?jié)M等特點(diǎn)，一般將之歸屬于“暴喘”、“結(jié)胸”、“腑實(shí)”等范疇。針對其臨床表現(xiàn)，中醫(yī)從“肺與大腸相表里”這一體現(xiàn)臟腑相關(guān)的整體觀的理論出發(fā)，將其病機(jī)特點(diǎn)概括為肺腸同病?，F(xiàn)分別用瀉肺法、通腑法、通腑瀉肺法干預(yù)實(shí)驗(yàn)性ALI/ARDS大鼠，觀察各組大鼠血?dú)馑?、炎癥細(xì)胞因子變化，探討其干預(yù)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康wistar大鼠100只，雄性、體重200± 20g，購自天津市山川紅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技有限公司（許可證號：SCXk（津）2009—0001），購入后置天津中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心常規(guī)飼養(yǎng)。

1.1.2 藥物及試劑 通腑瀉肺方（葶藶子20g，丹參30g，桑白皮20g，大黃30g，枳實(shí)10g，厚樸10g）、通腑方（大黃30g，枳實(shí)10g，厚樸10g）、瀉肺方（葶藶子20g，丹參30g，桑白皮20g）中藥顆粒劑，購自天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥房。生藥劑量，依照人體單位體重生藥量求得大鼠單位體重生藥量。用蒸餾水配置通腑瀉肺方（生藥濃度1.08g/ml），通腑方（生藥濃度0.45 g/ml）、瀉肺方（生藥濃度0.63 g/ml），4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

大腸桿菌內(nèi)毒素脂多糖（LPS），SIGMA，美國（編號：L2880 血清型055:B5）。油酸（分析純），天津運(yùn)盛化學(xué)品有限公司.。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組 按體重將大鼠隨機(jī)分為五組：正常對照組、模型組、治肺組、治腸組和肺腸同治組，每組20只。

1.2.2 模型建立 動(dòng)物購入后適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，參照文獻(xiàn)[4]的造模方法并加以改進(jìn)。正常對照組大鼠于左側(cè)尾靜脈注射生理鹽水0.12ml/kg，2h后于右側(cè)尾靜脈再次注射生理鹽水1ml/kg；其他各組于左側(cè)尾靜脈注射油酸0.12ml/kg，間隔2h后選右側(cè)尾靜脈注射內(nèi)毒素1mg/kg復(fù)制ARDS模型。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥 空白組與模型組在造模完成后即用生理鹽水灌服，每次0.01ml/g。治肺組、治腸組、肺腸同治組在造模完成后即用分別采用治肺方、治腸方、通腑瀉肺方灌胃，每次0.01ml/g。

1.2.4 采樣和制備 分別在造模第三天和第七天于各組隨機(jī)抽取10只大鼠，水合氯醛 350mg/kg腹腔麻醉，仰臥固定。打開胸腹腔，行支氣管肺泡灌洗、腹主動(dòng)脈取血并取肺腸組織。

1.2.5 血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量的含量測定 ELISA法檢測，操作流程依照試劑盒說明書。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包，各項(xiàng)指標(biāo)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差()，計(jì)量資料進(jìn)行ANOVA單因素方差分析，LSD法作兩兩比較；以P＜0.05表示差異顯著意義，P＜0.01表示差異有非常顯著意義。

2 結(jié)果

2.1 第三天 大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10結(jié)果 與正常組相比，模型組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量均明顯升高（P＜0.01）治肺組、治腸組及肺腸同治組大鼠血清TNF-α較模型組明顯降低（P＜0.01）；治腸組與肺腸同治組較模型組IL-1β明顯降低（P＜0.01）；治肺組和治腸組較模型組IL-6含量降低（P＜0.05）；治腸組、治肺組及肺腸同治組IL-10含量較模型組無明顯降低（P＞0.05）。

2.2 第七天 大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10結(jié)果 與正常組相比，模型組大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10含量均明顯升高（P＜0.01）；治肺組、治腸組及肺腸同治組大鼠血清TNF-α明顯降低（P＜0.01）；治腸組與肺腸同治組IL-1β明顯降低（P＜0.01）；治肺組IL-6含量降低（P＜0.05）；治腸組、治肺組及肺腸同治組IL-10含量無明顯降低（P＞0.05）。

3 討論

目前認(rèn)為，參與ALI/ARDS的炎癥介質(zhì)超過40種，其中最重要的也是研究最多的包括促炎細(xì)胞因子和抗炎細(xì)胞因子，而又以TNF-、IL-6、IL-1和IL-10為最，它們與ALI的發(fā)病及死亡關(guān)系密切[5]。

多種炎性細(xì)胞因子與ALI/ARDS的發(fā)病有關(guān)，TNF-α、IL-1β具有進(jìn)一步觸發(fā)炎癥反應(yīng)的作用，被稱為“早期反應(yīng)細(xì)胞因子”。TNF是細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的關(guān)鍵部分，TNF-α對肺有強(qiáng)烈的毒性，能誘導(dǎo)肺內(nèi)皮細(xì)胞活化、白細(xì)胞遷移、粒細(xì)胞脫顆粒和毛細(xì)血管滲漏，積聚的水腫液進(jìn)一步阻礙了肺泡細(xì)胞的灌流和氧氣交換，引起ARDS。TNF-α小量時(shí)作為旁分泌在局部發(fā)揮作用，大量時(shí)入血作用于全身。IL-1β主要活化巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞，可導(dǎo)致白細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞上的胞間黏附分子(ICAM)上調(diào)，并且導(dǎo)致動(dòng)物模型的類休克狀態(tài)[6,7,8]。治肺組、治腸組和肺腸同治組在改善血清TNF-α水平均有明顯效果但三者之間無明顯差異。在改善IL-1β水平方面，治腸組與肺腸同治組均可改善血清中IL-1β水平，但二者之間無明顯差異；治肺組沒有出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的改善。IL-6，主要由TNF-α、IL-1β刺激AM分泌，其在ALI/ARDS患者BAL中濃度很高并能促進(jìn)急性期反應(yīng)。對IL-6轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)機(jī)制的研究發(fā)現(xiàn)，在機(jī)體對抗敗血癥的反應(yīng)中IL-6 mRNA的產(chǎn)生與NF-κB、IL-6活化有關(guān)。在改善血清IL-6水平方面，治肺組有明顯效果；治腸組僅在第三天時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義改善；肺腸同治組無明顯效果。IL-10作為一種抗炎因子，能有效抑制AM釋放前炎性介質(zhì)，但是由于其表達(dá)量極低，其抗炎效應(yīng)常不明顯。三組對IL-10水平改善未出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明運(yùn)用瀉肺法、通腑法和通腑瀉肺法均可以降低大鼠血清中炎性細(xì)胞因子水平，改善動(dòng)物的生存狀態(tài)；通過降低血清和肺部炎癥細(xì)胞因子水平，減輕肺組織和全身的炎癥損傷。對腫瘤壞死因子都三組改善明顯，且三組之間無明顯差異；對IL-1β改善水平治腸組和肺腸同治組明顯優(yōu)于治肺組；對IL-6改善水平治肺組要優(yōu)于治腸組和肺腸同治組。對血清炎癥細(xì)胞因子的干預(yù)效果，治肺組、治腸組、肺腸同治組均有效果，但可以看出他們作用靶點(diǎn)不同，提示他們對炎性細(xì)胞因子的作用存在不同的機(jī)制。

中國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)理論體系對疾病的認(rèn)識從整體出發(fā)，臟腑表里相合是其中重要內(nèi)容，肺與大腸相表里是其代表。肺與大腸通過升降出入的氣化功能和津液的敷布，使兩者保持著正常的功能。正如唐宗海在《醫(yī)精經(jīng)義》中所說：“肺合大腸，大腸者，傳導(dǎo)之腑……謂傳導(dǎo)肺氣，使不逆也”，“大腸之所以能傳導(dǎo)者，以其為肺之腑。肺氣下達(dá)，故能傳導(dǎo)”。肺氣肅降功能與大腸傳導(dǎo)功能生理上互為動(dòng)力，病理上相互影響，治療上相互為用。瀉肺方用葶藶子，性大寒，味辛、苦，歸肺、膀胱經(jīng)，功能瀉肺平喘，行水消腫；桑白皮，甘寒入肺，功能瀉肺平喘，利水消腫；丹參，味苦微寒，功能活血化瘀，改善肺微循環(huán)，增加肺血流量及增強(qiáng)肺泡通氣功能。通腑方用小承氣湯，方中大黃瀉熱通便，厚樸行氣散滿，枳實(shí)破氣消痞，諸藥合用，可以輕下熱結(jié)，除滿消痞。通腑瀉肺方二者合用，既可瀉肺平喘，又能通腑瀉熱，肺腸同治。

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