王 寧 左 堅(jiān) 安徽中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校（241000）

不同產(chǎn)地白術(shù)中主要化學(xué)成分的含量比較

王 寧 左 堅(jiān) 安徽中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校（241000）

白術(shù)；指紋圖譜；毛細(xì)管電泳；產(chǎn)地

白術(shù)（Rhizoma atractylodis macrocepephaleae）為菊科植物白術(shù)（Atractylodes macrocephala koedz.）的干燥根莖。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，在我國有著悠久的使用歷史，具有補(bǔ)脾、益胃、燥濕、和中的功效。傳統(tǒng)主產(chǎn)于浙江盤安、新昌、嵊縣，安徽歙縣、黃山、寧國一帶。全國20多個(gè)省(自治區(qū))有栽培、少有野生[1]。目前，對于白術(shù)的成分研究證實(shí)，其主要含有親脂性的萜類成分，其中蒼術(shù)酮含量最高，而白術(shù)內(nèi)酯活性較高，作為白術(shù)品質(zhì)比較的主要客觀條件?，F(xiàn)針對主要白術(shù)產(chǎn)區(qū)的樣品中的蒼術(shù)酮和白術(shù)內(nèi)酯I的含量進(jìn)行測定比較，以期對于不同產(chǎn)地的白術(shù)品質(zhì)差異作出初步判斷[2]。

1 儀器和材料

彩陸高效毛細(xì)管電泳色譜儀（北京彩陸科學(xué)儀器公司），開口50μm內(nèi)徑石英毛細(xì)管（河北永年），760CRT紫外可見紫外分光光度計(jì)（上海分析儀器公司），HW2000雙通道色譜工作站（上海千譜公司），超聲淸洗儀（昆山），電子分析天平。

硼砂（國產(chǎn)分析純），重蒸餾水（自制），蒼術(shù)酮及白術(shù)內(nèi)酯標(biāo)準(zhǔn)品（自制，經(jīng)HPLC按面積歸一化法分析，純度達(dá)99%），白術(shù)樣品（產(chǎn)地自采，經(jīng)安徽中醫(yī)藥高等專科學(xué)校王寧副教授鑒定為菊科植物白術(shù)（Rhizoma atractylodis macrocepephaleae）的干燥根莖，具體來源見表1）。

表1 白術(shù)樣品來源

2 實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果

2.1 色譜條件 采用區(qū)帶電泳的方式進(jìn)行分離，選用開口無涂層石英管，分離長度40cm，以50mmol/l的硼酸水溶液為緩沖溶液，分離電壓22KV，分離時(shí)間10min，每兩次進(jìn)樣間隔以緩沖溶液沖洗2min。進(jìn)樣高度15cm，進(jìn)樣時(shí)間5S。

2.2 樣品液制備方法的確定 毛細(xì)管電泳的基本基質(zhì)為水溶液，故提取溶液以水為主。為防止揮發(fā)性成分的過分散失，提取過程選擇在常溫條件下進(jìn)行。通過對比，發(fā)現(xiàn)超聲提取效率高于冷浸法。提取20min后，提取液的干燥殘留物和紫外吸光度不再變化。最終確定制備方法為：白術(shù)樣品打成粗粉，取1g，以重蒸餾水10ml浸泡30min，后超聲20min，過濾得濾液，再通過微孔濾膜，得樣品液。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)品及對照溶液的制備 將白術(shù)粉碎后，過20目篩，取4kg，用70%乙醇滲漉，合并乙醇滲漉液，減壓回收乙醇，乙醇浸膏以醋酸乙酯。水處理，棄去水層，經(jīng)硅膠柱層所，以石油醚(30～60℃)、醋酸乙酯梯度洗脫，反復(fù)薄層精制，共得到七個(gè)單體化合物。根據(jù)熔點(diǎn)和紅外光譜特征，確定蒼術(shù)酮及白術(shù)內(nèi)酯I的標(biāo)準(zhǔn)品，分別以HPLC分析，面積積分百分比大于99%。將以上兩種對照品，分別以重蒸餾水，超聲輔助溶解，配制成濃度為0.0514mg/mL和0.0412mg/mL的對照溶液儲備液待用。

2.3 測定波長的確定 將上述樣品濾液及對照品，在190～800nm波長范圍內(nèi)做全波長掃描，發(fā)現(xiàn)樣品最大吸收波長在200nm附近。而蒼術(shù)酮及白術(shù)內(nèi)酯I的紫外最大吸收峰均于220nm處，但在附近波長范圍內(nèi)均有明顯吸收。考慮到分離度對于測定結(jié)果的影響，最終確定以分離良好，信號強(qiáng)度適中的200nm為檢測波長。

2.4 色譜條件的確定 首先嘗試磷酸氫鈉，硼酸水溶液作為緩沖溶液，發(fā)現(xiàn)前者出峰數(shù)目少，且不能很好分開，以氫氧化鈉調(diào)節(jié)無明顯改善。然后分別采用25mmol/l，50mmol/l，75mmol/l，100mmol/l的硼酸水溶液作為緩沖溶液，以50mmol/l濃度分離效果較好。分離電壓較高時(shí)，分離效果較好，但峰過于集中，且電流較大，引起明顯干擾，最后確定22KV為分離電壓。以上述條件分離一個(gè)樣品，記錄色譜信息30min，發(fā)現(xiàn)10min內(nèi)出峰基本完全。采用常規(guī)的高度進(jìn)樣方式。為減小進(jìn)樣引起峰形展寬，在保證進(jìn)樣量的情況下，盡量減少進(jìn)樣時(shí)間，選擇5S。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 穩(wěn)定性試驗(yàn) 選擇上述蒼術(shù)酮及白術(shù)內(nèi)酯I的對照溶液。分別于0，2，4，8，12，24h后測定。以峰的保留時(shí)間和積分面積為評價(jià)對象，發(fā)現(xiàn)保留時(shí)間和積分面積的RSD均不超過3%，平均值分別為1.11%和1.02%。

2.5.2 精密性試驗(yàn) 選擇蒼術(shù)酮及白術(shù)內(nèi)酯I的對照溶液，連續(xù)測定5次，對主要峰面積和保留時(shí)間進(jìn)行計(jì)算，發(fā)現(xiàn)RSD值分別介于0.87%～2.03%和1.32%～2.33%之間。

2.5.3 重現(xiàn)性試驗(yàn) 取5批樣品一，分別制備樣品液并測定，對主要的四個(gè)吸收峰的峰面積和保留時(shí)間進(jìn)行計(jì)算比較，所得RSD0.55%～2.54%和1.02%～2.31%之間。

2.5.4 線性關(guān)系考察 以上述蒼術(shù)酮及白術(shù)內(nèi)酯I的對照溶液儲備液，分別稀釋2～5倍，測定5次，以結(jié)果獲得線性曲線：蒼術(shù)酮Y=32153X+1432.9 r=0.9991,說明蒼術(shù)酮測定濃度在0.0123mg/mL～0.0514mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；白術(shù)內(nèi)酯I Y=41455X-1246.7 r=0.9993,說明白術(shù)內(nèi)酯I測定濃度在0.0082 mg/mL～0.0412 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5.5 加樣回收率試驗(yàn) 取5批樣品一，分別加入稀釋5倍的蒼術(shù)酮和白術(shù)內(nèi)酯I的對照品儲備液，測定，并計(jì)算回收率，結(jié)果均介于97%～102%之間。

2.6 色譜圖的獲得和含量測定 將上述各批次樣品及蒼術(shù)酮和白術(shù)內(nèi)酯I等量混合的對照品儲備液，利用上述色譜條件分離，并記錄色譜曲線。

件分離，并記錄色譜曲線。

利用標(biāo)準(zhǔn)曲線法（曲線方程見2.5.4），結(jié)合色譜數(shù)據(jù)，計(jì)算得出各產(chǎn)地中蒼術(shù)酮和白術(shù)內(nèi)酯的含量，見表2。

表2 各產(chǎn)地白術(shù)中主要化學(xué)成分含量

3 討論

3.1 過比較發(fā)現(xiàn)，皖南地區(qū)品種成分含量均較高，符合傳統(tǒng)道地產(chǎn)區(qū)的地位，與鄰近的浙江地區(qū)品質(zhì)相近，而略有優(yōu)勢。但仍可看出該地區(qū)具體產(chǎn)地間差異仍較大，且不穩(wěn)定，這主要與當(dāng)?shù)匾吧h(huán)境等不確定性因素有關(guān)。相比而言，皖北地區(qū)的亳州產(chǎn)白術(shù)雖然品質(zhì)相對較差，但比較均一，質(zhì)量穩(wěn)定。這主要是因?yàn)楫?dāng)?shù)氐陌仔g(shù)均為人工種植。從外觀看，亳州產(chǎn)白術(shù)粗大，產(chǎn)量較高。故認(rèn)為，人工種植可以提高白術(shù)的產(chǎn)量，并獲得較為穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量。應(yīng)加強(qiáng)在優(yōu)質(zhì)種質(zhì)產(chǎn)地的研究，推廣優(yōu)良品種的人工栽培種植。

3.2 白術(shù)中的生理活性物質(zhì)目前認(rèn)為主要是親脂性成分，但單純以個(gè)別萜類物質(zhì)的含量評價(jià)品質(zhì)優(yōu)劣尚不全面，因?yàn)閭鹘y(tǒng)應(yīng)用中大多為水煎，親脂性成分溶出有限，故下最后論斷還需要進(jìn)一步深入研究。

3.3 高效毛細(xì)管電泳色譜法操作簡便，快速，不需要大量色譜純?nèi)軇?。且由于樣品液沒有經(jīng)過預(yù)處理，最大限度地節(jié)省了人力和財(cái)力成本，值得推廣應(yīng)用。

[1] 肖培根.新編中藥志(第一卷)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2002:323.

[2] 周克瑜,許長照.白術(shù)地道藥材和栽培品的化學(xué)成分對比研究[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2000,16(2):109-110.

10.3969/j.issn.1672-2779.2010.18.175

1672-2779（2010）-18-0239-02

安徽省教育廳自然科學(xué)研究項(xiàng)目。

2010-06-15）