韋熹苑 裴剛 林藝紅 丁揚(yáng)洲 唐鑫 張軍

漢防己(Stephania tetrandra S.Moore)根所含漢防己甲素有抗炎、鎮(zhèn)痛作用［1］，臨床主要用于心律失常、肺纖維化等疾?。?］。肺癌在我國(guó)大中城市的發(fā)病率及死亡率均居癌癥首位。有報(bào)道漢防己甲素可逆轉(zhuǎn)GLC-82/ADR耐藥肺癌細(xì)胞對(duì)阿霉素的耐藥作用［3］。本實(shí)驗(yàn)研究漢防己甲素對(duì)肺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用，探討其治療肺癌的可能性。

1 材料

1.1 儀器 CO2培養(yǎng)箱;倒置相差顯微鏡;酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀。

1.2 試藥與細(xì)胞 MTT(鵬程生物公司生產(chǎn));小牛血清(杭州四季清公司生產(chǎn));細(xì)胞株購(gòu)于中南大學(xué)。

2 方法

2.1 漢防己甲素溶液的配制 按文獻(xiàn)制備漢防己甲素后［4］，精密稱取適量，DMS0溶解，無(wú)血清培養(yǎng)液稀釋，得1.25～80 ug/ml的樣品溶液，4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn) 在37℃，5%CO2的環(huán)境下，以10%小牛血清的高糖培養(yǎng)液和0.25%的胰酶消化傳代，選用生長(zhǎng)對(duì)數(shù)期的細(xì)胞做實(shí)驗(yàn)用。將細(xì)胞的濃度稀釋至5×104個(gè)/ml加入96孔計(jì)數(shù)板，置入培養(yǎng)箱培養(yǎng)4 h后，吸出孔內(nèi)培養(yǎng)液后，每孔加入200 μl不同濃度的漢防己甲素液，再培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h后，吸出漢防己甲素液，加入80 μl高糖液和20 μl MTT液，再培養(yǎng)箱內(nèi)孵育，4 h后，將MTT液棄去，PBS清洗一次，每孔加入150 μl DMSO，振搖10 min，酶標(biāo)儀于492 nm處測(cè)定吸光值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次;計(jì)算細(xì)胞抑制率，以抑制率 ＞50%為有效［5］。SPSS軟件進(jìn)行處理。并采用Bliss法，求算IC50值。

3 結(jié)果

在1.25～20 μg/ml濃度范圍內(nèi)，漢防己甲素對(duì)A549細(xì)胞的抑制率分別 11.6%、30.54%、54.94%、76.15%、98.27%，濃度大于20 μg/ml后，抑制率趨于平穩(wěn)。其IC50的值為 7.66 μg/ml。

4 討論

A549細(xì)胞系肺癌細(xì)胞是從肺癌患者癌組織中分離出來(lái)的非常小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系，與患者體內(nèi)的癌細(xì)胞具有基本相似的生物學(xué)特性。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，漢防己甲素對(duì)肝癌、白血病以及卵巢癌等均有抑制作用，但對(duì)于肺癌方面的報(bào)道較少［6］。本次結(jié)果表明漢防己甲素具有抗肺癌A549細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用，這位其治療肺癌提供了一定參考，但其作用機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

［1］Kwan CY，Achike FL．Tetrandrine and related bisbenzylisoquino-line a1kaloids from medicinal herbs:cardiovascular effects and mechanisms of action．Acta Pharmacol Sin，2002，23(12):1057．

［2］Chen L，Li Q Y，Yang Y，et al．Inhibitory effects of tetrandrine on the Na(+)channel of human atrial fibrillation myocardium．Acta Pharmacol Sin，2009，30(2):166-174．

［3］徐萌，周蓓．漢防己甲素逆轉(zhuǎn)肺癌化療耐藥和凋亡抗性的實(shí)驗(yàn)研究．新中醫(yī)，2006，38(6):90-91．

［4］冀春茹，王浴銘，劉延澤，等．中藥化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)與實(shí)驗(yàn)．河南科技出版社，1986，237．

［5］吳舟鋒．腫瘤化療藥物敏感性試驗(yàn)．國(guó)外醫(yī)學(xué):外科學(xué)分冊(cè)，1988，25(3):153-155．

［6］Ng LT，Chiang LC，Lin YT．Antiproliterative and apoptotic effects ofetrandrine 0n different human hepatoma cell lines．Am J Chinese Med，2006，34(1):125．