馬文杰 魏得良 黃志芳 黃志紅 胡吉林 劉大鵬

土牛膝，別名倒扣草，《中國(guó)藥典匯編》對(duì)土牛膝有如下記載：藥性：苦、涼。歸肺、脾、肝、膀胱經(jīng)。藥效：敗毒抗癌、逐淤除痹，消炎利尿?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，土牛膝具有改善機(jī)體微循環(huán)，調(diào)整新陳代謝，改善免疫功能等作用，具有明顯的抗炎抗菌作用、鎮(zhèn)痛作用、抗衰老作用等[1-3]。近年來(lái)有研究表明牛膝含有的成分齊墩果酸、牛膝多糖具有治療糖尿病的功效[4-6]，但土牛膝提取物在治療糖尿病方面的研究尚無(wú)報(bào)道。本研究以本地野生土牛膝為原料，經(jīng)過(guò)提取、分離、過(guò)濾、干燥得到土牛膝提取物齊墩果酸、牛膝多糖，觀察土牛膝提取物對(duì)正常小鼠以及四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖的影響，如果能確定土牛膝提取物齊墩果酸、牛膝多糖也具有降糖作用，將對(duì)糖尿病的治療具有重要意義。

1 材料

1.1 土牛膝提取物齊墩果酸、牛膝多糖 取干燥土牛膝(湖南郴州郊外野生)150g，制成細(xì)塊狀藥材，用冷水浸泡20min后取出，置煎鍋中，加6倍量的水，大火加熱水煮，經(jīng)濃縮、過(guò)濾、干燥，得齊墩果酸精品[7]。另取一份同樣藥材，用75%乙醇回流提取，經(jīng)過(guò)抽濾、洗滌、低溫干燥得到牛膝多糖精品[8]。臨用前用生理鹽水配成所需濃度。

1.2 動(dòng)物 昆明種小鼠，體重20～25g，雄性，湘南學(xué)院醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.3 試劑和儀器 四氧嘧啶(Alloxan)北京恒業(yè)中遠(yuǎn)化工有限公司；生理鹽水(自制)；肝素鈉，天津藥業(yè)焦作有限公司；降糖靈25mg/片，山東仁和堂藥業(yè)有限公司，批號(hào)：080612；鄰甲苯胺，海寧市通元化工廠；吐溫-80，樂(lè)山科立鑫化工有限責(zé)任公司；其余試劑均為市售分析純。電子天平,上海精密儀器儀表有限公司；離心機(jī)，江蘇牡丹離心機(jī)制造有限公司；722型分光光度計(jì)，上海天翔光學(xué)儀器有限公司；小鼠用灌胃針頭。

表1 齊墩果酸(OA)對(duì)高血糖小鼠的作用(n=10,±s，mmol·L-1)

表1 齊墩果酸(OA)對(duì)高血糖小鼠的作用(n=10,±s，mmol·L-1)

注：a.與模型小鼠對(duì)照組比較，P＜0.001。

組別 給藥前平均血糖濃度 給藥后平均血糖濃度空白對(duì)照組 5.36±0.40 5.55±0.38模型對(duì)照組 18.7±30.57 19.00±0.60 OA低劑量組 18.62±0.67 14.41±0.57a OA中劑量組 19.11±0.52 13.66±0.40a OA高劑量組 19.05±0.68 12.28±0.50a陽(yáng)性對(duì)照組 18.33±0.36 14.34±0.42

2 方法與結(jié)果

2.1 有效劑量的換算 參考徐叔云教授主編的《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》[9]，通過(guò)人和動(dòng)物間按體表面積折算的等效劑量比值來(lái)進(jìn)行換算，通過(guò)計(jì)算，每只小鼠的保守有效劑量是1.82g·kg-1。

2.2 土牛膝提取物齊墩果酸、牛膝多糖劑量組配制 精確稱(chēng)取齊墩果酸(OA)，加入2%的土溫-80助溶；另精確稱(chēng)取牛膝多糖(ABPS)，用生理鹽水稀釋至100ml，配制成高、中、低劑量組；待用。

2.3 實(shí)驗(yàn)性糖尿病模型的制作 將四氧嘧啶用生理鹽水配成濃度為0.7%的溶液。取昆明種小鼠，試驗(yàn)前禁食12h,腹腔注射四氧嘧啶0.12g·kg-1,第2天同樣在禁食12h后腹腔注射四氧嘧啶0.1g·kg-1，72h后從小鼠眼眶或尾靜脈取血，用鄰甲苯胺法測(cè)血糖，選給藥后血糖值＞13.8mmol·L-1者作為糖尿病小鼠。

2.4 齊墩果酸(OA)對(duì)小鼠血糖的影響 將糖尿病模型鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為模型對(duì)照組(生理鹽水)，土牛膝提取物齊墩果酸3個(gè)劑量組(4、8、12g·kg-1)，陽(yáng)性對(duì)照組(降糖靈10g·kg-1)；另設(shè)空白對(duì)照組(OA12g·kg-1)，均按20ml·kg-1·d-1體積灌胃給藥，連續(xù)給藥14d。在末次給藥前12h禁食，給藥1h后眼眶或尾靜脈取血，用鄰甲苯胺法測(cè)定血糖值，所得數(shù)據(jù)進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。由表1可見(jiàn)，齊墩果酸灌胃的正常和生理鹽水的小鼠,血糖無(wú)明顯影響，與糖尿病模型對(duì)照組比較，高、中、低劑量組能顯著降低四氧嘧啶模型小鼠的血糖(P＜0.001)，與對(duì)照組(降糖靈)有相似的降糖效果。

2.5 牛膝多糖(ABPS)對(duì)小鼠血糖的影響 將糖尿病模型鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為模型對(duì)照組(生理鹽水)，土牛膝提取物牛膝多糖3個(gè)劑量組(2、4、8g·kg-1)，陽(yáng)性對(duì)照組(降糖靈0.1g·kg-1)；另設(shè)空白對(duì)照組(ABPS12g·kg-1)，同上方法給藥，測(cè)定血糖值，所得數(shù)據(jù)進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。由表2可見(jiàn)，灌胃的正常和生理鹽水的小鼠，血糖無(wú)明顯影響，與糖尿病模型對(duì)照組比較，高、中、低劑量組能顯著降低四氧嘧啶模型小鼠的血糖(P＜0.001)，與對(duì)照組(降糖靈)具相似降糖效果。

表2 牛膝多糖(ABPS)對(duì)高血糖小鼠的作用(n=10,±s，mmol·L-1)

表2 牛膝多糖(ABPS)對(duì)高血糖小鼠的作用(n=10,±s，mmol·L-1)

注：a.與模型小鼠對(duì)照組比較，P＜0.001。

組別 給藥前平均血糖濃度 給藥后平均血糖濃度空白對(duì)照組 5.40±0.34 5.54±0.37模型對(duì)照組 18.83±0.74 19.01±0.74 ABPS低劑量組 18.90±0.76 16.73±0.6a ABPS中劑量組 18.72±0.75 15.15±0.65a ABPS高劑量組 19.03±0.70 14.28±0.85a陽(yáng)性對(duì)照組 18.33±0.36 14.34±0.42

3 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明土牛膝提取物齊墩果酸、牛膝多糖能夠降低四氧嘧啶糖尿病模型小鼠血糖水平，對(duì)糖尿病小鼠有較好的治療作用，降血糖作用和劑量相關(guān)。另外，對(duì)正常動(dòng)物血糖影響較小，有利于今后開(kāi)發(fā)成為低毒的降糖中藥制劑。但其降糖機(jī)理還有待于進(jìn)一步的深入研究。

[1]史玉芬,鄭延彬.牛膝抗炎、抗菌作用的研究[J].中藥通報(bào),1988,13(7):44-47.

[2]陸兔林,毛春芹,張麗.牛膝不同炮制品鎮(zhèn)痛抗炎作用研究[J].中藥材,1997,20(10):507-509.

[3]馬愛(ài)蓮,郭煥.懷牛膝抗衰老作用研究[J].中藥材,1998,21(7):360-362.

[4]唐黎明,呂志鈞,張小萍,等.牛膝多糖藥效學(xué)研究[J].中成藥,1996,18(5):31-33.

[5]郝志奇,王瑛.齊墩果酸對(duì)小鼠的降血糖作用[J].中國(guó)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),1991,22(4):210.

[6]李海泉.牛膝多糖降糖作用實(shí)驗(yàn)研究[J].安徽醫(yī)藥,2004,8(5):326-327.

[7]歐艷,徐耀華.牛膝中齊墩果酸的提取工藝[J],2003,14(3):65-69.

[8]陳曉明，徐愿堅(jiān)，田庚元,等.牛膝多糖的理化性質(zhì)研究及結(jié)構(gòu)確證[J].藥學(xué)學(xué)報(bào),2005,40(l):32-35.

[9]徐叔云,卞如濂,陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:202-204.