張 敏,王建發(fā),林玉才,邢宇昕,孫東波,楊顆粒,武 瑞

(1.黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,黑龍江 大慶 163319;2.黑龍江省蘿北縣共青農(nóng)場(chǎng)畜牧科,黑龍江 蘿北 154213)

奶牛乳房炎是危害奶牛養(yǎng)殖業(yè)的常見疾病,根據(jù)乳房和乳汁有無(wú)肉眼可見變化可將其分為臨床型乳房炎和隱性乳房炎。臨床型乳房炎發(fā)病率較隱性乳房炎低,但引起的損失相對(duì)較嚴(yán)重。中藥以無(wú)污染、不易產(chǎn)生耐藥性等特點(diǎn)在治療奶牛臨床型乳房炎上得到了廣泛應(yīng)用。本試驗(yàn)結(jié)合臨床實(shí)踐要求,以中獸醫(yī)理論為依據(jù),選用蒲公英、金銀花、柴胡、紅花等中藥配成2個(gè)以消腫為特點(diǎn)的治療奶牛臨床型乳房炎的中藥復(fù)方(復(fù)方1、復(fù)方2),并通過(guò)藥效學(xué)方法檢測(cè)其效果,以期篩選一種治療奶牛臨床型乳房炎的新中藥制劑。

1 材料與方法

1.1 材料 SD大鼠購(gòu)自哈爾濱醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;蒲公英、金銀花、柴胡等購(gòu)自大慶福瑞邦藥材公司;金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、乳房鏈球菌分離菌株由黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)診斷研究室保存;其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 方法

1.2.1 組方及提取液的制備 復(fù)方1由適量蒲公英、金銀花 、柴胡、芍藥、枳實(shí)、甘草等組成;復(fù)方 2由適量紅花、當(dāng)歸、生地黃、川芎、金銀花、甘草等組成。采用水提醇沉法提取復(fù)方1、復(fù)方2有效成分,制備成生藥濃度為1 g/mL的藥液備用。

1.2.2 試驗(yàn)動(dòng)物分組 除急性毒性試驗(yàn)和耳廓腫脹抑制試驗(yàn)外,試驗(yàn)動(dòng)物均分為復(fù)方1組、復(fù)方2組、空白對(duì)照組、潑尼松龍對(duì)照組。

1.2.3 急性毒性試驗(yàn) 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)確定復(fù)方1、復(fù)方2的0%(Dn)和100%(Dm)動(dòng)物死亡劑量范圍分別為30.72～60.00 g/kg體重、107.52～210.00 g/kg體重。根據(jù)(Dm)/(Dn)值,確定正式試驗(yàn)分組數(shù)為4,劑量組間的比值 r=1.25[1]。隨機(jī)挑選SD大鼠40只,分成4組,分別按劑量比腹腔注射不同濃度復(fù)方1、復(fù)方2,連續(xù)給藥7 d,觀察動(dòng)物死亡情況。用改進(jìn)Karber法計(jì)算復(fù)方1、復(fù)方2的LD50和 LD50的 95%可信限。

1.2.4 抗炎試驗(yàn) 按照參考文獻(xiàn)[1]測(cè)定中藥復(fù)方對(duì)二甲苯致大鼠耳廓腫脹、羧甲基纖維素(CMC)囊中白細(xì)胞游出、棉球誘發(fā)大鼠肉芽組織增生及二甲苯致大鼠血管通透性升高的抑制情況。公式為:

腫脹抑制厚度=大鼠原始耳廓腫脹厚度-某一時(shí)間大鼠耳廓腫脹厚度

腫脹抑制率=(同一時(shí)間治療側(cè)抑制厚度-同一時(shí)間對(duì)照側(cè)抑制厚度)/同一時(shí)間治療側(cè)厚度

增生抑制率=(對(duì)照組肉芽平均重-用藥組肉芽平均重)/對(duì)照組肉芽平均重

1.2.5 體外抑菌試驗(yàn) 病原菌復(fù)蘇后將懸液稀釋至1.5×(107～108)CFU/m L。菌液均勻平鋪于瓊脂平板表面,干燥、打孔,酒精燈火焰上稍微烘烤后,每孔加滿藥液,37℃培養(yǎng)24 h。觀察并記錄抑菌環(huán)直徑的大小(mm)。

1.3 數(shù)據(jù)處理 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 急性毒性試驗(yàn)結(jié)果 復(fù)方1和復(fù)方2的LD50分別為42.92 g/kg和 146.96 g/kg;LD50的95%可信限分別為39.00～47.25 g/kg和133.26～162.07 g/kg。

2.2 抗炎試驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 中藥復(fù)方對(duì)二甲苯致大鼠耳廓腫脹抑制試驗(yàn)結(jié)果 由表1可知,24 h及48 h時(shí),復(fù)方1組、復(fù)方2組與對(duì)照組相比均差異極顯著(P＜0.01),復(fù)方1組與復(fù)方2組相比差異不顯著(P＞0.05)。復(fù)方1、復(fù)方2在24 h時(shí)腫脹抑制率分別為67.33%、63.67%,在 48 h時(shí)腫脹抑制率分別為50.50%、50.55%。

2.2.2 中藥復(fù)方對(duì)大鼠羧甲基纖維素(CMC)囊中白細(xì)胞游出抑制試驗(yàn)結(jié)果 由表2可知,3 h及7.5 h時(shí),復(fù)方1組、復(fù)方2組與對(duì)照組相比均差異極顯著(P＜0.01),復(fù)方1組與復(fù)方2組相比均差異顯著(P＜0.05)。

2.2.3 中藥復(fù)方對(duì)棉球誘發(fā)大鼠肉芽組織增生抑制試驗(yàn)結(jié)果 由表 3可知,復(fù)方1組、復(fù)方2組與對(duì)照組相比均差異極顯著(P＜0.01),復(fù)方1組與復(fù)方2組相比差異不顯著(P＞0.05)。復(fù)方1、復(fù)方2對(duì)棉球誘發(fā)大鼠肉芽組織增生抑制率分別為50.85%、45.30%。

表1 中藥復(fù)方對(duì)二甲苯致大鼠耳廓腫脹抑制厚度(mm)及腫脹抑制率(%)

表2 中藥復(fù)方對(duì)大鼠羧甲基纖維素囊中白細(xì)胞游出的影響

表3 中藥復(fù)方對(duì)棉球誘發(fā)大鼠肉芽組織增生抑制試驗(yàn)結(jié)果

2.2.4 中藥復(fù)方對(duì)二甲苯致大鼠血管通透性升高抑制試驗(yàn)結(jié)果 由表4可知,復(fù)方1組、復(fù)方2組與生理鹽水對(duì)照組相比均差異極顯著(P＜0.01);復(fù)方1組與潑尼松龍對(duì)照組相比差異極顯著(P＜0.01),復(fù)方2組與潑尼松龍對(duì)照組相比差異顯著(P＜0.05);復(fù)方1組與復(fù)方2組相比差異極顯著(P＜0.01)。

表4 中藥復(fù)方對(duì)二甲苯致大鼠毛細(xì)血管通透性升高抑制試驗(yàn)結(jié)果

2.3 體外抑菌試驗(yàn)結(jié)果 由表5可知,大腸桿菌對(duì)復(fù)方1屬中度敏感;對(duì)復(fù)方2屬低度敏感;金黃色葡萄球菌對(duì)復(fù)方1屬中度敏感;對(duì)復(fù)方2屬極度敏感;乳房鏈球菌對(duì)復(fù)方1和復(fù)方2均屬低度敏感。

表5 中藥復(fù)方對(duì)奶牛乳房炎3種主要致病菌抑菌效果 (mm)

3 討論與小結(jié)

目前,治療奶牛乳房炎多采用乳房灌注法。當(dāng)奶?；寂R床型乳房炎時(shí),乳腺腫脹,易造成乳導(dǎo)管系統(tǒng)的阻塞,影響藥物的均勻分布。本試驗(yàn)綜合考慮以上因素,根據(jù)中獸醫(yī)理論,選取蒲公英、金銀花、柴胡、芍藥、紅花、當(dāng)歸、生地黃等中藥自組復(fù)方。方中主藥蒲公英、金銀花味甘、性寒,具有清熱解毒的功效,在清解臟腑熱毒病證方面有顯著療效。方中柴胡既疏泄肝氣、又善和肝氣,芍藥滋養(yǎng)肝血又善于補(bǔ)肝體,二藥配伍,柔疏相濟(jì)、陰陽(yáng)結(jié)合,以達(dá)疏肝和脾之功[2]。諸藥配合,使組方具有清熱解毒、活血化瘀、疏肝理氣、利水消腫之功效,主要用于對(duì)臨床型奶牛乳房炎的治療。

本試驗(yàn)通過(guò)LD50法了解中藥復(fù)方的毒性程度、性質(zhì),探索發(fā)生毒性反應(yīng)的量效關(guān)系。試驗(yàn)過(guò)程中,腹腔注射給藥后,部分大鼠興奮、痙攣,出現(xiàn)縮成一團(tuán),呼吸加劇等癥狀,隨后大鼠死亡。對(duì)死亡大鼠剖檢可見,腸系膜充血,肝脾腫大、淤血,無(wú)其他異常。一般來(lái)說(shuō),LD50越大,藥物毒性越小[3],本試驗(yàn)中復(fù)方1、復(fù)方2均屬實(shí)際無(wú)毒物質(zhì)。本試驗(yàn)通過(guò)復(fù)制大鼠二甲苯性耳腫脹模型、大鼠羧甲基纖維素囊中白細(xì)胞游出模型和棉球誘發(fā)大鼠肉芽組織增生模型測(cè)定中藥復(fù)方對(duì)急慢性非特異性炎癥的抗炎作用[4]。復(fù)方1、復(fù)方2對(duì)炎癥早期的腫脹均有顯著的抑制作用,對(duì)炎癥晚期纖維結(jié)締組織增生的抑制作用相近;復(fù)方2對(duì)炎癥中期白細(xì)胞游出的抑制作用優(yōu)于復(fù)方1。奶牛發(fā)生乳房炎時(shí),炎性介質(zhì)損傷血管內(nèi)皮屏障功能,導(dǎo)致其通透性增高,血漿蛋白滲出,引起乳房腫脹[5]。復(fù)方2可明顯抑制二甲苯性大鼠腹腔血管通透性升高,減輕組織腫脹。由抑菌試驗(yàn)可知,復(fù)方1和復(fù)方2對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌均有抑制作用。

復(fù)方2有較好的抗炎、抑菌、消炎作用,其作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步深入研究。

[1] 陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2000.

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