彭金菊,梁淑鋆,馬 驛,曾 丹,梁景新,安守文,曾令軍

(廣東海洋大學(xué)動物醫(yī)學(xué)系,廣東湛江524088)

嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)普遍存在于淡水、污水、淤泥、土壤和人類糞便中,對水產(chǎn)動物、畜禽和人類均有致病性,是一種典型的人、獸、魚共患病病原菌,人感染后可導(dǎo)致腹瀉[1]。嗜水氣單胞菌病是羅非魚最常見細菌性疾病之一。目前,治療細菌性疾病的最常用藥物是抗生素和合成抗菌藥,但具有產(chǎn)生耐藥性、導(dǎo)致藥物殘留等缺點。我國傳統(tǒng)中藥除可克服前述缺點外,還可增強水產(chǎn)養(yǎng)殖動物免疫力,因此,使用中藥或中藥的有效活性成分,以取代部分高殘留藥物的研究尤為重要[2]。試驗表明,中藥及中藥復(fù)方對嗜水氣單胞菌有較好的體外抑制效果[3-5]。本試驗選取體外抑菌效果較好的幾種中藥組成4種復(fù)方,通過給羅非魚感染嗜水氣單胞菌后,觀察中藥復(fù)方對其防治效果,為使用中藥防治水產(chǎn)動物疾病提供理論依據(jù)和參考。

1 材料與方法

1.1 材料 中藥材五倍子、訶子、黃芩等均購自湛江市藥材市場。嗜水氣單胞菌由廣東省微生物研究所菌種保藏中心提供,編號：AS1.1801。羅非魚體重8～10 g,由湛江某魚苗養(yǎng)殖場提供,試驗前在22℃±2℃水族箱中馴養(yǎng)15 d,定時定量喂食和換水。

1.2 方法

1.2.1 試驗分組 試驗設(shè)陰性對照組、陽性感染對照組、不同方劑試驗組。Ⅰ組為不感染細菌陰性對照組,Ⅱ組為感染細菌陽性對照組,不同方劑組餌料中添加的藥物分別為：Ⅲ組為花椒和五倍子、Ⅳ組為夏枯草和五倍子、Ⅴ組為黃芩和五倍子、Ⅵ組為訶子和五倍子。分別進行治療試驗和預(yù)防試驗,治療試驗每組80尾羅非魚,預(yù)防試驗每組75尾羅非魚。

各組均設(shè)一個重復(fù)組。

1.2.2 餌料配制及投喂方法 各種復(fù)方均由兩種中藥組成,將兩種中藥按1∶1等量混合,加工成粉末狀,按餌料的3%和2%定量添加。中藥粉末加水煮沸30 min后,將藥渣藥水與餌料混合拌勻,制成1.0 mm粒徑的顆粒餌料,晾干備用。每天按魚體重的2%分2次定時投喂餌料。

1.2.3 嗜水氣單胞菌菌液的制備及人工感染試驗將嗜水氣單胞菌接種于普通肉湯中,30℃恒溫培養(yǎng)8～12 h,采用平板計數(shù)法計數(shù),用肉湯稀釋至所需濃度。通過預(yù)試驗篩選能引起羅非魚死亡的嗜水氣單胞菌的數(shù)量,每尾腹腔注射濃度為1010CFU/mL的細菌混懸液0.1 mL,陰性對照組每尾腹腔注射生理鹽水0.1 mL。治療試驗：攻毒當(dāng)天投喂添加3%中藥的藥餌,連續(xù)給藥觀察15 d;預(yù)防試驗：連續(xù)投喂添加2%中藥的藥餌15 d后注射細菌,自攻毒之日開始連續(xù)觀察15 d。統(tǒng)計各組死亡魚數(shù)量,按魚病常規(guī)檢驗方法剖檢、分離體液及組織中細菌鏡檢,確定死亡原因。

1.2.4 防治效果評價用保護率進行評價,保護率(%)=(陽性感染對照組的死亡數(shù)-藥物試驗組死亡數(shù))/陽性感染對照組的死亡數(shù)×100。

2 結(jié)果

2.1 病死魚的剖檢結(jié)果及細菌形態(tài)特征 羅非魚攻毒后食欲減退,部分試驗魚體色開始變黑,3 d后開始出現(xiàn)死亡,第6天至第10天死亡數(shù)較多,第12天后未見死亡。死魚呈典型的出血性敗血癥,體色黑,體表有潰瘍,胸鰭、腹鰭基部及眼眶出血,肝呈灰白色、腫脹,腸管出血,腹腔內(nèi)有淡紅色腹水,嚴(yán)重者內(nèi)臟出現(xiàn)出血性壞死。分離體液及組織中細菌進行培養(yǎng)鑒定,每個平板菌落形態(tài)相似,為圓形、大小一致、菌落表面光滑、邊緣整齊、微凸、呈乳白色。鏡檢為革蘭陰性、兩端鈍圓、散在或個別成雙排列、無芽孢的桿菌,與試驗前感染的嗜水氣單胞菌的形態(tài)特征相同。

2.2 不同中藥復(fù)方對羅非魚感染嗜水氣單胞菌的治療效果 治療試驗結(jié)果見表1,攻毒后陽性對照組羅非魚死亡24尾,存活率僅為70%。投喂藥餌組的羅非魚死亡率與陽性對照組比較均差異顯著(P＜0.05),投喂藥餌組的存活率均高于陽性對照組,4種中藥復(fù)方對羅非魚的保護率分別為83.33%、66.67%、58.33%和 62.50%,花椒/五倍子組成復(fù)方的保護率最高,對羅非魚嗜水氣單胞菌病的治療效果最佳。

2.3 不同中藥復(fù)方對羅非魚感染嗜水氣單胞菌的預(yù)防效果 預(yù)防試驗結(jié)果見表2,攻毒后陽性對照組羅非魚死亡18尾,存活率為76%。投喂藥餌組的羅非魚死亡率與陽性對照組比較均差異顯著(P＜0.05),投喂藥餌組的存活率均高于陽性對照組,4種中藥復(fù)方對羅非魚的保護率分別為72.22%、88.89%、94.44%和94.44%,黃芩/五倍子組成復(fù)方以及訶子/五倍子組成復(fù)方的保護率均很高,對羅非魚感染嗜水氣單胞菌的有很好的預(yù)防效果。

表1 不同中藥復(fù)方對羅非魚感染嗜水氣單胞菌的治療效果

表2 不同中藥復(fù)方對羅非魚感染嗜水氣單胞菌的預(yù)防效果

3 討論

3.1 中藥復(fù)方對羅非魚嗜水氣單胞菌病的防治效果 五倍子含鞣酸,有收斂作用,能使皮膚黏膜、潰瘍等局部蛋白質(zhì)凝固,能加速血液凝固而達到止血效果;能沉淀生物堿,對生物堿中毒有解毒作用[6]。試驗中采用五倍子與其他中藥組成復(fù)方,治療和預(yù)防羅非魚感染嗜水氣單胞菌的作用明顯,治療組和預(yù)防組的死亡率較對照組顯著降低,且預(yù)防組的死亡率明顯低于治療組。其中將花椒/五倍子組成的復(fù)方按 3%拌餌飼喂,治療效果最佳,存活率達95%;將黃芩/五倍子組成復(fù)方以及訶子/五倍子組成復(fù)方按2%拌餌飼喂,預(yù)防效果最好,存活率均為98.67%。姜蕾等[7]報道五倍子對溫和氣單胞菌所致鯉魚細菌性敗血癥有很好的防治效果,1.0%和0.5%藥餌預(yù)防組死亡率比對照組降低了33%,差異極顯著(P＜0.01);1.0%與0.5%藥餌治療組死亡率分別為17.0%和21.0%,較對照組極顯著降低(P＜0.01)。由此可見,五倍子及五倍子與其他中藥組成復(fù)方在防治水產(chǎn)動物細菌性疾病方面有很好的應(yīng)用價值。

3.2 中藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的作用 中藥在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的主要作用有：防治疾病、增強免疫力;促進生長,提高飼料報酬;提高存活率,促進繁殖;作誘食劑;改善水產(chǎn)品;減少應(yīng)激作用,增加動物的耐受力;防霉防腐等作用[8-10]。不同中藥對嗜水氣單胞菌的體外抑制試驗結(jié)果表明[5],五倍子、花椒、夏枯草、黃芩、訶子對嗜水氣單胞菌的 MIC分別為 1.563 mg/mL、6.25 mg/mL、6.25 mg/mL、12.5 mg/mL、6.25 mg/mL,與恩諾沙星(MIC 為0.0625μg/mL)相比,抑菌效果相差較大,但將中藥組成復(fù)方后,對嗜水氣單胞菌病的治療和預(yù)防效果較好,這充分證明中藥標(biāo)本兼治的優(yōu)越性,體現(xiàn)了中醫(yī)所說“藥有個性之特長,方有合群之妙用”的精妙之處。同時,中藥治療水產(chǎn)動物疾病能有效防止藥物殘留和耐藥菌株出現(xiàn),值得應(yīng)用推廣。但無論是單味藥還是聯(lián)合用藥,其抑菌的具體成分、作用方式和機理如何,仍需要今后作進一步的深入研究。

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