邱德明,張哲民,李永海

(1.西安植物園,陜西西安 710061;2.中科院西北高原生物研究所,青海西寧 610001;3.水利部水土保持植物開(kāi)發(fā)按管理中心,北京 100038)

提高惡性腫瘤的療效問(wèn)題,直到現(xiàn)在仍然是急需解決的問(wèn)題。雖然在腫瘤學(xué)中使用細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑獲得了相當(dāng)成績(jī),但現(xiàn)有化療制劑的毒性高、選擇性差和作用效果不佳,迫使研究者尋找其它藥劑和對(duì)腫瘤的控制方法。

近年來(lái),機(jī)體的生物反應(yīng)變異劑 (M B P)——制劑的異源類(lèi)引起人們興趣。制劑的主要效果是直接作用于機(jī)體體內(nèi)平衡結(jié)構(gòu),提高機(jī)體抗腫瘤免疫力。生物反應(yīng)變異劑可在合成的化合物和天然藥物中,主要是從植物源的藥物中尋找。應(yīng)當(dāng)提出,提高對(duì)作為生物反應(yīng)變異劑潛在源的植物,在很大程度上力圖尋找現(xiàn)有綜合效果和在保證最大生物有效性的劑型中有生物活性物的低毒性藥劑。

植物源制劑,很久以來(lái)在民間醫(yī)學(xué)中就用來(lái)治療惡性增生物。大多數(shù)用于腫瘤的植物藥的療效,與抑制原發(fā)性腫瘤結(jié)的生長(zhǎng)、抑制轉(zhuǎn)移、提高治療惡性增生物方法的效果和控制機(jī)體體內(nèi)的平衡系統(tǒng) (它的功能在無(wú)法補(bǔ)償?shù)纳L(zhǎng)過(guò)程中受到破壞)有關(guān)。植物制劑實(shí)現(xiàn)治療作用的主要機(jī)理之一,是其對(duì)天然免疫系統(tǒng)機(jī)能施加影響。

天然免疫系統(tǒng)在實(shí)現(xiàn)抗腫瘤保護(hù)機(jī)體中的意義,現(xiàn)在無(wú)可爭(zhēng)辮。天然殺傷細(xì)胞 (EKK)和巨噬細(xì)胞是排除異種和變換成分的天然免疫的中樞操縱環(huán)節(jié)。與細(xì)胞毒性功能一樣,天然免疫系統(tǒng)具有協(xié)調(diào)血液系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)環(huán)節(jié)各功能的明顯調(diào)節(jié)活性。在細(xì)胞、組織和系統(tǒng)水平上實(shí)施調(diào)節(jié)的主要作用屬于胞質(zhì)?，F(xiàn)在研究生物反應(yīng)變異劑,其中包括細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑的性能中,必須評(píng)價(jià)制劑不僅對(duì)天然免疫力效應(yīng)細(xì)胞毒性活性的影響,而且要評(píng)價(jià)它對(duì)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生胞質(zhì)的影響,以確定藥理動(dòng)因的陽(yáng)性效果和陰性效果。

在O?H?科諾瓦洛娃等人 (1992)的研究中,在移植腫瘤動(dòng)物體上已查明沙棘制劑——沙棘油、沙棘樹(shù)皮和樹(shù)枝乙醇提取物 (Э Κ ПО),可以抑制原發(fā)性腫瘤結(jié)的生長(zhǎng),極大地抑制腫瘤的擴(kuò)散過(guò)程和提高細(xì)胞抑制生長(zhǎng)劑的療效性能,為該植物制劑列入生物反應(yīng)變異劑提供了依據(jù)。為了闡明作為Э Κ ПО和沙棘油治療作用的分子細(xì)胞的機(jī)理,研究沙棘制劑在正常條件下和在腫瘤病理學(xué)條件下對(duì)天然免疫力效應(yīng)器的功能活性有很高價(jià)值。

本研究的目的在于研究正常條件下和在化療背景及腫瘤病理?xiàng)l件下,使用沙棘樹(shù)皮和樹(shù)枝乙醇提取液、沙棘油,對(duì)小鼠天然免疫系統(tǒng)的功能狀況的影響。

主要的研究任務(wù):一是研究健康小鼠在服用不同沙棘樹(shù)皮和樹(shù)枝乙醇提取液的方案下,其天然免疫功能狀況。二是研究小鼠Lewis肺癌在服用沙棘樹(shù)皮和樹(shù)技乙醇提取液和沙棘油時(shí),其天然免疫系統(tǒng)的功能狀況。三是研究小鼠Lewis肺癌在沙棘制劑 (沙棘樹(shù)皮和樹(shù)枝乙醇提取液和沙棘油)與環(huán)磷酰胺合用時(shí),其天然免疫系統(tǒng)的功能狀況。

科學(xué)新穎處:首次研究了沙棘樹(shù)皮和樹(shù)枝制劑和沙棘油對(duì)健康小鼠天然免疫系統(tǒng)功能狀況的影響,提出該植物制劑對(duì)天然殺傷細(xì)胞和腹膜巨噬細(xì)胞的免疫效果。使用Э Κ ПО對(duì)脾殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性有刺激作用。查明了服用Э Κ ПО對(duì)刺激天然殺傷細(xì)胞療程的適宜持續(xù)時(shí)間 (5晝夜)。

在接種 Lewis肺癌動(dòng)物的研究中,發(fā)現(xiàn)Э Κ ПО和沙棘油對(duì)天然免疫力效應(yīng)器的功能狀況有修復(fù)作用,表現(xiàn)在天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性功能的消耗癥狀減少,腫瘤剌激腹膜巨噬細(xì)胞的活性下降,巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的腫瘤壞死因子正?；?/p>

本研究結(jié)果已經(jīng)被俄羅斯衛(wèi)生部采用,作為對(duì)惡性腫瘤患者采用化療方案時(shí)提高化療療效的藥劑,以擴(kuò)大沙棘樹(shù)皮和樹(shù)枝制劑和沙棘油的臨床試驗(yàn)。在無(wú)損動(dòng)物試驗(yàn)中取得的資料,是在天然殺傷細(xì)胞受到抑制情況下將Э Κ ПО作為刺激其細(xì)胞毒性活性藥劑可能應(yīng)用的依據(jù)。

1 材料和方法

供試材料是品系F1(CBA×C57B1/6)380只兩性小鼠和品系F1(DBA×C57B1/6)90只雄小鼠。將106Lewis肺癌細(xì)胞肌肉注射于小鼠作轉(zhuǎn)移腫瘤模型。

實(shí)驗(yàn)中使用阿爾泰國(guó)立醫(yī)學(xué)院藥型工藝教研室制備的特殊制劑——沙棘油與沙棘樹(shù)皮和樹(shù)枝乙醇提取液。用探針給動(dòng)物胃灌沙棘制劑1ml/kg。

在無(wú)損動(dòng)物的實(shí)驗(yàn)中使用下述方式:1次給Э Κ ПО,在 1,2,3,5,7 晝夜內(nèi);每天給Э Κ ПО,在5晝夜內(nèi),間隔 24h。對(duì)照動(dòng)物投蒸餾水,劑量和投料方式相同。

在Lewis肺癌動(dòng)物的研究中,沙棘制劑從腫瘤移植后的第2晝夜開(kāi)始到第22晝夜止,每日服用,間隔24h;用蒸餾水植入Lewis肺癌動(dòng)物用作對(duì)照。

實(shí)驗(yàn)中使用了細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑環(huán)磷酰胺。在Lewis肺癌小鼠的實(shí)驗(yàn)中,腫瘤轉(zhuǎn)移后的第8晝夜,一次肌注125mg/kg的環(huán)磷酰胺。

在使用植物制劑第1,2,3,5晝夜,對(duì)無(wú)損小鼠一次投用Э Κ ПО療程不同時(shí)間內(nèi),對(duì)天然免疫系統(tǒng)指數(shù)的影響在1,2,3,5,7晝夜服用植物藥劑條件下進(jìn)行研究。用沙棘制劑治療療程結(jié)束后的1,3,5,7晝夜。測(cè)定在第5次服用Э Κ ПО停止后天然免疫力功能活性水平。在腫瘤抑制后的1,3,5,7,11,15,22晝夜,對(duì)Lewis肺癌小鼠在療程投用 Э Κ ПО和沙棘油時(shí)評(píng)價(jià)天然免疫力系統(tǒng)的狀況。在使用細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑后的3,7,14晝夜,對(duì)沙棘制劑和環(huán)磷酰胺合用的影響進(jìn)行評(píng)價(jià)。按 《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物操作規(guī)程》將動(dòng)物斷頭處死。

利用M?H?雷科娃等(1981)使用3H——二氧嘧啶核苷和核糖核酸梅的膜毒性方法,檢驗(yàn)脾和淋巴結(jié)中天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用。對(duì)象是保存在離體條件下的K——562有核紅細(xì)胞、得到的結(jié)果用溶解單位表示。為了評(píng)價(jià)脾的溶解點(diǎn)位將活性換算成全器官的細(xì)胞含量和10×1016的脾細(xì)胞。淋巴結(jié)和天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性換算成10×1016的細(xì)胞效應(yīng)表示。

覆膜巨噬細(xì)胞的細(xì)胞溶解活性按B.И?謝列特佐夫等人 (1987)的方法測(cè)定。用預(yù)先以3H-胸腺嘧啶核苷標(biāo)記小鼠P-815肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞作為靶細(xì)胞。

從實(shí)驗(yàn)和對(duì)照小鼠的粘連腹膜細(xì)胞中獲得的上清液白血球介素-1的活性,按 Mizel.S.(1980)添加磷酸甘油醛亞有絲分裂劑,以刺激胸腺細(xì)胞增生的方法予以評(píng)價(jià)。白血球介素-1的產(chǎn)生水平以活性的標(biāo)定單位表示,標(biāo)定單位計(jì)算為 “效果劑量”的曲線(xiàn)面積,根據(jù)所獲資料建立曲線(xiàn)。

腹膜巨噬細(xì)胞所產(chǎn)生的腫瘤壞死因子(Φ Η Ο↓)水平用離體保存的對(duì)腫瘤壞死因子敏感的L-929品系測(cè)定。腫瘤壞死因子產(chǎn)生水平用活性標(biāo)定單位表示。用非參數(shù)曲線(xiàn)ν-Vilkoksona-Manna-Uitni統(tǒng)計(jì)處理所得結(jié)果。P≤0.05時(shí)結(jié)果誤差可信。

2 研究結(jié)果和討論

在無(wú)損動(dòng)物體上的實(shí)驗(yàn)證明,沙棘油和沙棘樹(shù)皮樹(shù)枝制劑對(duì)天然免疫力效應(yīng)器的功能狀況有調(diào)節(jié)作用。

在給無(wú)損小鼠一次服量為 1ml/kg的 Э Κ ПО時(shí),脾天然殺傷細(xì)胞毒性活性在觀察的第1和第2晝夜,與背景值無(wú)區(qū)別。在第3晝夜,器官的殺傷細(xì)胞毒性增高并超過(guò)對(duì)照水平的5.3倍,溶解單位為352.81±108.90(P＜0.01),而10×106脾細(xì)胞的活性與背景指數(shù)相對(duì)增加了6.9倍(P＜0.01),溶解單位達(dá)到24.53±4.88。脾的溶解電位和10×106脾細(xì)胞的活性,在研究的第5晝夜,分別超過(guò)對(duì)照值的6.6倍和9.4倍。因?yàn)樵诖似陂g (3,5晝夜)脾細(xì)胞量仍處在對(duì)照水平,那么應(yīng)得出結(jié)論,遷移和增殖過(guò)程在提高脾細(xì)胞上沒(méi)有特殊意義。器官溶解電位的增高可能是由于成熟的天然殺傷細(xì)胞活性的提高和其循環(huán)速度的增加。看來(lái),這是由于天然殺傷細(xì)胞前體的新一代殺傷細(xì)胞的成熟在加快。

療程中投用Э Κ ПО引起了評(píng)價(jià)指標(biāo)的另一種動(dòng)態(tài)。10×106脾細(xì)胞的天然殺傷活性在服制劑所有應(yīng)用的療程中,與背景水平?jīng)]有差別,可是折算成全器官的脾的細(xì)胞毒性活性隨著細(xì)胞量增加而同步增高 (表1)。在療程中服沙棘制劑所見(jiàn)到的脾溶解電位的增強(qiáng),是由另一種機(jī)理決定的。在療程中服沙棘制劑。脾細(xì)胞毒性增加時(shí)由于導(dǎo)致脾細(xì)胞,其中包括具有殺傷活性的細(xì)胞總量增加而發(fā)生的過(guò)程。脾下細(xì)胞量的增加是沙棘制劑作用引起的細(xì)胞重新分布和遷移的結(jié)果;另一方面,大概是療程使用植物制劑,沙棘在脾細(xì)胞天然殺傷細(xì)胞前體細(xì)胞方面所增生的活性得以實(shí)現(xiàn)。在第2和第 7次服Э ΚПО時(shí),器官細(xì)胞量變化曲線(xiàn)有兩個(gè)最大值,看來(lái),這不能排除某種機(jī)理的參與 (表1)。

表1 品系 F1(CBAXC57B1/6)雌小鼠在服 Э Κ П О (Х±m(xù);Pν)療程不同時(shí)間內(nèi)脾天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性水平

在5和7晝夜期間服 Э Κ ПО,發(fā)現(xiàn)脾的溶解電位出現(xiàn)了飽和效果——而增加制劑服用次數(shù)并未引起器官功能活性的加強(qiáng)。就外表看,由研究細(xì)胞引起的所有潛在活化效應(yīng),都參與了反應(yīng),因此再增加總劑量是不適宜的。

第5次服用 Э Κ ПО停止后,脾天然殺傷細(xì)胞功能活性研究表明,觀察的第1和第3晝夜,10×106脾細(xì)胞的天然殺傷活性與背景指數(shù)。

無(wú)統(tǒng)計(jì)意義上的差別。在第5,7晝夜可靠性增高 (分別占對(duì)照水平的130%和250%),盡管在服Э Κ ПО的小鼠組中器官的細(xì)胞量與未治療的動(dòng)物值沒(méi)有差別,但是脾的溶解電位在整個(gè)觀察期間 (第3晝夜除外),仍高于背景指數(shù)。第7晝夜它的值最大,占對(duì)照的280%。脾殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性變化的波狀性質(zhì)引人注意。由效應(yīng)制劑作用活化的脾細(xì)胞毒性的降低,是殺傷細(xì)胞潛力所引起的,在停服 Э Κ ПО的第5,7晝夜,由天然殺傷細(xì)胞的功能活性的下一個(gè)峰所代替。根據(jù)文獻(xiàn)資料,第7晝夜是標(biāo)記前的天然殺傷細(xì)胞的成熟期,因此,脾細(xì)胞的細(xì)胞毒性的第二最大值與天然殺傷細(xì)胞新一代的活性相關(guān)。

在我們對(duì)脾細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性的補(bǔ)充研究中,也對(duì)淋巴結(jié)天然殺傷活性作了評(píng)價(jià)。在研究第5次停服 Э Κ ПО后,10×106脾和淋巴結(jié)細(xì)胞的天然殺傷活性動(dòng)態(tài)時(shí),獲得相反性質(zhì)的曲線(xiàn)。如果脾細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性在研究的第7晝夜增高,那么淋巴結(jié)天然殺傷細(xì)胞最高的活性集中在行服 Э Κ ПО后的第一晝夜 (占對(duì)照指數(shù)的188%),以后淋巴結(jié)天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性下降,在觀察的第7晝夜為背景水平的60%。因?yàn)榱馨徒Y(jié)的群體主要由圓形細(xì)胞組成,所以圓形細(xì)胞的細(xì)胞毒性是由免疫系統(tǒng)的中樞器官,包括脾的功能活性殺傷細(xì)胞的遷移決定的。在服Э Κ ПО的條件下,脾已被查明的變化在淋巴結(jié)中發(fā)生效應(yīng)活性相對(duì)滯后。

一次給無(wú)損動(dòng)物Э Κ ПО導(dǎo)致腹膜巨噬細(xì)胞的功能活性發(fā)生變化,類(lèi)似于脾的天然殺傷細(xì)胞的毒性動(dòng)態(tài)——巨噬細(xì)胞的毒性指數(shù)在觀察的第3,5晝夜增高,分別超過(guò)背景值1.7倍和2.0倍。療程使用沙棘制劑引起了單核吞噬細(xì)胞另一種反應(yīng)性質(zhì)。

在小鼠對(duì)照組中,細(xì)胞毒性指數(shù),在效應(yīng)與對(duì)象之比為5∶1,確實(shí)低于10∶1的毒性指數(shù)(分別為 19.51±5.22%和 30.82±4.03%)。顯然,第一種情況與第二種情況相比,是分?jǐn)偟矫總€(gè)靶細(xì)胞的細(xì)胞毒性巨噬細(xì)胞的因子量最小決定的。療程服用Э ΚПО的動(dòng)物組中并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)10∶1和5∶1之間的類(lèi)似差異。顯然,被研究制劑所起作用促成的效應(yīng)處于最大功能活性狀態(tài),且溶解了對(duì)細(xì)胞毒性作用有敏感的對(duì)象。細(xì)胞毒性指數(shù)值在該情況下不是由巨噬細(xì)胞功能活性決定,而是同腫瘤靶細(xì)胞對(duì)其作用的抗性決定的,但是在增加植物制劑服用次數(shù)時(shí),按單核吞噬細(xì)胞的細(xì)胞毒性指數(shù)判斷,靶細(xì)胞對(duì)經(jīng)過(guò)巨噬細(xì)胞加工的蛋白水解因素的敏感度,也依療程時(shí)間長(zhǎng)短而發(fā)生變化。眾所周知,單核吞噬細(xì)胞具有大量的能夠完成細(xì)胞溶解或抑制腫瘤細(xì)胞的因素,有可能是療程使用Э Κ ПО對(duì)巨噬細(xì)胞所完成的細(xì)胞毒性機(jī)理的頻譜起作用,而擴(kuò)大或縮小都決定于藥理作用的長(zhǎng)短?？挂欢ㄒ蛩氐陌屑?xì)胞對(duì)別的是敏感的,這可以在增加服用Э Κ ПО1到 3次后觀察到細(xì)胞毒性指數(shù)在增高。在第5晝,尤其是第7晝夜服用植物制劑時(shí),研究指數(shù)大大降低,后一種情況細(xì)胞毒性指數(shù)為背景水平的40%。

腹膜巨噬細(xì)胞的細(xì)胞毒性在第 5次給Э Κ ПО結(jié)束后的研究表明,盡管停服制劑,但細(xì)胞毒性指數(shù)繼續(xù)下降,至第7晝占對(duì)照指數(shù)的14%。

雖然第5次服用 Э Κ ПО和停服導(dǎo)致腹膜巨噬細(xì)胞的毒性明顯降低,但這些效應(yīng)與對(duì)照相比,表現(xiàn)出了白血球介素-1和腫瘤壞死因子產(chǎn)量水平增高。查明了在第5次服用沙棘制劑結(jié)束后第7和第3晝夜,白血球介素-1的最大值為背景指數(shù)的224%和272%。以后由巨噬細(xì)胞盛產(chǎn)的白血球介素-1下降,但仍大大高于對(duì)照水平。腫瘤壞死因子的活性水平在觀察的第1和第3晝夜,為背景值的359%和535%。到第5晝夜,腫瘤壞死因子下降,到第7晝夜重新增加,并超過(guò)對(duì)照水平的6.2倍。

在第5次停服 Э Κ ПО時(shí)揭示的白血球介素-1和腫瘤壞死因子活性高水平和脾天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性高之間的一致性。天然殺傷細(xì)胞功能活性的增強(qiáng),雖然是同白血球介素-1和腫瘤壞死因子的作用有關(guān)。因?yàn)樵谠S多靶細(xì)胞其中包括天然殺傷細(xì)胞方面的調(diào)節(jié)性能,是兩種因素所固有的、Lewis肺癌的發(fā)展引起天然免疫系統(tǒng)效益功能活性的明顯改變,影響著細(xì)胞的細(xì)胞毒性功能和分泌功能。

腹膜巨噬細(xì)胞在改日動(dòng)物接種Lewis肺癌后的第3和第5晝夜,被肥大細(xì)胞瘤P-815生長(zhǎng)的刺激作用所代替。在Lewis肺癌醫(yī)治后的第7晝夜,發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞刺激增生最大;增生指數(shù)在患腫瘤的動(dòng)物組中,占健康小鼠水平的210%(P＜0.05)。

在此期間 (Lewis肺癌醫(yī)治后的第7晝夜),發(fā)現(xiàn)腹膜巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的白血球介素-1增加(占背景水平的220%),白血球介素-1的產(chǎn)量在研究初期 (第3,第5晝夜)與健康小鼠值無(wú)差別,到第22晝夜白血球介素-1的活性水平仍很高,占無(wú)損動(dòng)物的180%。

腫瘤壞死因子最高水平在接種Lewis肺癌后的第3晝夜,為健康小鼠的250%。以后 (第5晝夜)從腫瘤小鼠的腹膜吞噬細(xì)胞所得到的上清液中的腫瘤壞死因子的活性,提高到無(wú)損動(dòng)物的水平。觀察第22晝夜,發(fā)現(xiàn)帶Lewis肺癌的小鼠效應(yīng)所產(chǎn)生的腫瘤壞死因子下降,研究指標(biāo)為背景水平的69%。

在腫瘤生長(zhǎng)初期,受到抑制的脾天然殺傷細(xì)胞到第15晝夜變?yōu)榛罨癄顟B(tài),占健康小鼠的540%。天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性功能的類(lèi)似活化,占健康小鼠值的540%。天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性功能的類(lèi)似活化,在腫瘤病發(fā)展期經(jīng)常完全可以觀察到。由于不能保證排除惡性對(duì)象,在生物學(xué)上無(wú)根據(jù)會(huì)使效應(yīng)器的功能儲(chǔ)量耗盡。在腫瘤生長(zhǎng)的第22晝夜,脾天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性降到零 (占66%),是被檢驗(yàn)的細(xì)胞群代償失調(diào)狀態(tài)的明顯證明。

淋巴結(jié)天然殺傷細(xì)胞在Lewis肺癌接種后的第3,第5晝夜處于抑制狀態(tài),然后 (7-11晝夜)細(xì)胞毒性的活性恢復(fù)到健康動(dòng)物的水平,而在15,22晝夜,研究指數(shù)增高,超過(guò)無(wú)損小鼠值的2.8和2.7倍。

在Lewis肺癌轉(zhuǎn)移后的第2晝夜至第22晝夜服用沙棘制劑 (Э Κ ПО和沙棘油),對(duì)處在相當(dāng)于腫瘤生長(zhǎng)初期的功能狀態(tài)的沒(méi)有顯示出很大的作用。但此后投用植物制劑均使天然免疫力效應(yīng)活性的某些指數(shù)得到校正,因此天然免疫力有可能被研究制劑中所發(fā)現(xiàn)的抗腫瘤和抗轉(zhuǎn)移特性所決定。

服用Э Κ ПО的小鼠脾的天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性,因?yàn)樵谟^察初期與對(duì)照值 (帶腫瘤動(dòng)物)無(wú)區(qū)別,所以一只Lewis肺癌的第15晝夜,與未治療小鼠的指數(shù)一樣提高了,但其水平低于比較組的指數(shù)。在第22晝夜,服Э Κ ПО的小鼠組的效應(yīng),同未治療的動(dòng)物組比較,顯出消耗更少的特征。實(shí)驗(yàn)組小鼠脾細(xì)胞的天然殺傷細(xì)胞活性,超過(guò)對(duì)照組水平的2.2倍。

療程使用沙棘油,也防止了在腫瘤生長(zhǎng)的第22晝夜天然殺傷細(xì)胞的功能活性損耗。

根據(jù)已獲得的結(jié)果可以得出結(jié)論:沙棘制劑在腫瘤增生期可預(yù)防脾天然殺傷細(xì)胞效應(yīng)活化在該條件下生物學(xué)上的無(wú)效活化。研究的植物制劑類(lèi)似的保護(hù)作用,防止了探究系統(tǒng)功能儲(chǔ)量的消耗,在腫瘤發(fā)展后期,亦有助于脾細(xì)胞毒性活性保持較高水平。

與對(duì)照組的情況不同,當(dāng)腫瘤細(xì)胞回避殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用時(shí),服用植物制劑,為有效的殺傷對(duì)象創(chuàng)造條件,使抑制腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移得以實(shí)現(xiàn),并減弱天然殺傷細(xì)胞系統(tǒng)的應(yīng)力反應(yīng)。

帶Lewis肺癌動(dòng)物的淋巴結(jié)天然殺傷細(xì)胞,在整個(gè)觀察期間,對(duì) Э Κ ПО和沙棘油的作用,仍然是無(wú)親合力的。

給腫瘤小鼠療程服用 Э Κ ПО, 在開(kāi)始期(3,5晝夜)沒(méi)有引起腹膜巨噬細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性在統(tǒng)計(jì)意義上的變化。第7晝夜,當(dāng)未受到治療作用的動(dòng)物的腹膜巨噬細(xì)胞具有刺激腫瘤特性時(shí),使用植物藥劑可靠地降低了效應(yīng)器這一活性。以后 (第 11,12晝夜),在效應(yīng)和對(duì)象為5:1時(shí)發(fā)現(xiàn)植物制劑具有類(lèi)似作用。這一點(diǎn)具有特別的現(xiàn)實(shí)性,因?yàn)樵诤艽蟪潭壬戏夏[瘤發(fā)展時(shí)機(jī)體中出現(xiàn)的實(shí)際情況。

在療程中使用沙棘油,查明Lewis肺癌轉(zhuǎn)移后的第7,22晝夜,腫瘤刺激腹膜巨噬細(xì)胞的活性降低;服用沙棘油動(dòng)物的增生指數(shù),比對(duì)照的增生水平分別低48%和62%。

給Lewis肺癌動(dòng)物療程服 Э Κ ПО在刺激聚多糖,腹膜巨噬細(xì)胞產(chǎn)生白血球介素一1的動(dòng)態(tài)中引起確切變化,雖然服用植物藥劑的小鼠腫瘤壞死因子水平,在整個(gè)研究期間與未治療的動(dòng)物確有區(qū)別,但接近于健康小鼠的指數(shù)。

環(huán)磷酰胺同沙棘制劑 (Э Κ ПО和沙棘油)合用,對(duì)天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性的作用,是在品系F1(DBA×C57B1/6)和F1(CBA×C5781/6)的小鼠體上進(jìn)行研究的。

品系F1(CBA×C57B1/6)的小鼠,在服用環(huán)磷酰胺后的第2晝夜,脾細(xì)胞量比未治療動(dòng)物的指數(shù)下降了28%,但是器官的溶解電位整個(gè)超過(guò)對(duì)照水平,為其值的300%。如此高的溶解電位是由10×106脾細(xì)胞的天然殺傷細(xì)胞活性的增加決定的。天然殺傷細(xì)胞殺傷活性比未受治療小鼠的指數(shù)多8.2倍,與健康動(dòng)物的值相符。這一現(xiàn)象是由于在該條件下,環(huán)磷酰胺對(duì)抑制因子群體起抑制作用占優(yōu)勢(shì),所以使天然殺傷細(xì)胞的功能活性增高。在服用細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑的第7晝夜,10×106脾細(xì)胞的活性仍處于原先的水平,但器官的溶解電位因脾細(xì)胞量的再生增加而提高。環(huán)磷酰胺的使用,阻礙了天然殺傷細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)楦呋罨癄顟B(tài),這種狀態(tài)是在這一期間 (使用細(xì)胞抑制劑后第7晝夜,腫瘤生長(zhǎng)第15晝夜)在對(duì)照組中觀察到。烷化劑對(duì)腫瘤對(duì)象的作用在于促使殺傷惡性細(xì)胞因子的有效性。但是在服用環(huán)磷酰胺后的第14晝夜,脾天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性與觀察前期相比較低。在此期間,受細(xì)胞抑制劑影響的抑制因子的功能活性得到恢復(fù)。

環(huán)磷酰胺和 Э Κ ПО合用,有助于提高脾天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性。在服用細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑后的第3晝夜,10×106脾細(xì)胞的細(xì)胞毒性超過(guò)只服環(huán)磷酰胺的動(dòng)物值的1.6倍。獲得綜合制劑治療的小鼠的研究指數(shù),在細(xì)胞毒性作用后的第7晝夜,與單獨(dú)服用環(huán)磷酰胺的動(dòng)物研究指數(shù)無(wú)實(shí)質(zhì)性差別。但是在研究的第14晝夜,在用環(huán)磷酰胺注以Э Κ ПО中發(fā)現(xiàn),脾天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性水平在所有觀察組中 (對(duì)照組,環(huán)磷酰胺組,Э Κ ПО組)為最高。脾的溶解電位占單服細(xì)胞抑制劑動(dòng)物值的350%,超過(guò)來(lái)治療帶腫瘤小鼠值的7.1倍。若 Э Κ ПО和環(huán)磷酰胺合用,最大程度地阻止了脾天然殺傷細(xì)胞功能儲(chǔ)量的消耗.并促使其保持殺傷潛力 (占健康小鼠水平的70%),這符合這些制劑綜合使用時(shí)顯示出抗腫瘤的療效。

在療程服沙棘油和服環(huán)磷酰胺的動(dòng)物10×106的脾細(xì)胞的天然殺傷細(xì)胞活性動(dòng)態(tài)有同樣效果。但是服沙棘油觀察組脾的溶解電位在細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑起作用后的第7晝夜,超過(guò)單用環(huán)磷酰胺的小鼠相應(yīng)指數(shù)的1.2倍。

肺癌發(fā)展引起脾天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性另一種動(dòng)態(tài)的品系F1(DBA×C57B1/6)小鼠,以另一種方式表達(dá)了服環(huán)磷酰胺同 Э Κ ПО組合使用效果。在使用細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑后的第3晝夜,服環(huán)磷酰胺使脾的溶解電位下降 (占對(duì)照指數(shù)的5%)。這是由器官的細(xì)胞量 (占對(duì)照水平的19%)和脾細(xì)胞的天然殺傷細(xì)胞活性 (占末受化療的帶瘤動(dòng)物值的29%)減少?zèng)Q定的。顯然,品系F1(DBA×C57B1/6)小鼠的天然殺傷細(xì)胞對(duì)環(huán)磷酰胺的細(xì)胞毒性作用比較敏感。但在使用烷化劑后的第7晝夜,服細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑的動(dòng)物脾的溶解電位大大增高,并超過(guò)對(duì)照組相應(yīng)指數(shù)的2.2倍。這與器官的細(xì)胞量再生復(fù)原和新的天然殺傷細(xì)胞再生的成熟有關(guān)。在以后(使用細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑后的第14晝夜)治療過(guò)的小鼠的脾天然殺傷細(xì)胞,比在該期間處于功能活化狀態(tài)的對(duì)照動(dòng)物的效應(yīng),具有較小的細(xì)胞毒性特點(diǎn)。

環(huán)磷酰胺起作用后的第3晝夜,療程中服Э Κ ПО,脾天然殺傷細(xì)胞的活性水平,確實(shí)比單服細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑的動(dòng)物和同未治療的小鼠指數(shù)低。顯然在該條件下,植物制劑增強(qiáng)了環(huán)磷酰胺在天然殺傷細(xì)胞方面的細(xì)胞毒性作用。但是10×106脾細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性和脾的溶解電位,在觀察的第7晝夜增高,并超過(guò)用細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑治療組的相應(yīng)指數(shù)的0.8和0.9倍。以后 (服環(huán)磷酰胺后的第14晝夜)合用制劑的小鼠的脾天然殺傷細(xì)胞,比單獨(dú)服細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑的小鼠的效應(yīng)保持了較高的細(xì)胞毒性活性水平,為比較組值的189%。

兩品系小鼠淋巴結(jié)的天然殺傷細(xì)胞,對(duì)服環(huán)磷酰胺似乎無(wú)親合力。在研究的整個(gè)期間,受化療動(dòng)物的淋巴結(jié)10×106細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性,與對(duì)照值無(wú)實(shí)質(zhì)性差別。

給品系F1(CBA×C57B1/6)小鼠合用環(huán)磷酰胺和 Э Κ ПО,也沒(méi)有使在淋巴結(jié)天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性的動(dòng)態(tài)上有顯著的統(tǒng)計(jì)變化,雖然品系F1(DBA×C57B1/6)動(dòng)物效應(yīng)器的功能活性在療程中服 Э Κ ПО背景上 (在細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑起作用后的第3晝夜)受到抑制。以后接受環(huán)磷酰胺和Э Κ ПО合用治療的小鼠的效應(yīng)的細(xì)胞毒性恢復(fù)到比較組的值 (對(duì)照組和環(huán)磷酰胺組)。

在品系 F1(CBA×C57B1/6)動(dòng)物中,環(huán)磷酰胺和沙棘油合用 (在服細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑后的第7,14晝夜),淋巴結(jié)的天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性與環(huán)磷酰胺組的相應(yīng)值降低了44%和84%。

給品系F1(CBA×C57B1/6)小鼠服劑量125mL/kg的環(huán)磷酰胺,移植Lewis肺癌后的第8晝夜,沒(méi)有使在腫瘤生長(zhǎng)過(guò)程帶來(lái)效應(yīng)的腹膜巨噬細(xì)胞刺激腫瘤的活性提高。在療程服Э Κ ПО和環(huán)磷酰胺的組合,同未治療小鼠和單獨(dú)服細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑的值比較,也未導(dǎo)致與效應(yīng)器共同釀成的靶細(xì)胞P-815增生水平起實(shí)質(zhì)性變化。

環(huán)磷酰胺和沙棘油在整個(gè)研究期間合用的比較組中的相應(yīng)指數(shù),使腫瘤刺激腹膜巨噬細(xì)胞的效果,在統(tǒng)計(jì)上顯著下降。在受環(huán)磷酰胺和沙棘油綜合作用的動(dòng)物組中,靶細(xì)胞的增生指數(shù)分別比單用化療治療小鼠的增生指數(shù)低16%,23%和28%。

因此,在帶有Lewis肺癌動(dòng)物體上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,查明了沙棘制劑 (Э Κ ПО和沙棘油)的性質(zhì)——調(diào)節(jié)天然免疫力效應(yīng)的功能活性 (天然殺傷細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)在其中存在抗腫瘤和抗轉(zhuǎn)移作用的情況下,可以把該植物制劑列為機(jī)體生物反應(yīng)變異劑。

此外,在無(wú)損小鼠研究中獲得的資料,更使我們從前景上來(lái)看到臨床應(yīng)用Э Κ ПО的可能性。無(wú)論一次服用或療程服用植物制劑或其停用后,天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性都穩(wěn)定提高。這不僅在腫瘤學(xué)上,而且在導(dǎo)致天然免疫力這一環(huán)節(jié)的功能活性受到抑制的其它病理階段,都有應(yīng)用的可能性。

3 結(jié)論

1.沙棘制劑 (沙棘樹(shù)皮和樹(shù)技混合乙醇提取液、沙棘油),在正常和腫瘤病理?xiàng)l件下,對(duì)天然免疫力機(jī)能具有免疫性能。

2.健康小鼠脾天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性,在一次或療程中服用沙棘樹(shù)皮和樹(shù)枝乙醇提取液,可使其活性大大增強(qiáng)。在停服制劑后的第7晝夜仍保持在這一水平上。服用沙棘樹(shù)皮和樹(shù)枝乙醇提取液,刺激天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性的最適宜的持續(xù)時(shí)間為5晝夜。

3.5次服沙棘樹(shù)皮和樹(shù)枝乙醇提取液,可促使由腹膜巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的白血球介素-1和腫瘤壞死因子增加。

4.在腫瘤過(guò)程一般化時(shí)期,給移植 Lewis肺癌小鼠服沙棘樹(shù)和樹(shù)枝乙醇制劑與沙棘油,引起天然免疫力系統(tǒng)功能活性修正,表現(xiàn)在天然殺傷細(xì)胞功能消耗癥狀減少,腫瘤刺激腹膜巨噬細(xì)胞的活性下降,腫瘤壞死因子的產(chǎn)量正?；?/p>

5.環(huán)磷酰胺和沙棘制劑 (沙棘樹(shù)皮和樹(shù)枝乙醇提取液、沙棘油)合用,增強(qiáng)了細(xì)胞生長(zhǎng)抑制劑對(duì)脾天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性活性的刺激影響。在化療背景上,使用沙棘樹(shù)皮和樹(shù)枝乙醇提取液,有助于在腫瘤發(fā)展晚期天然殺傷細(xì)胞的細(xì)胞毒性保持較高水平。

6.沙棘油與環(huán)磷酰胺配合使用,使巨噬細(xì)胞在腫瘤生長(zhǎng)過(guò)程中受腫瘤刺激的活性降低。