陳惠紅，呂建偉，廖玉香（.柳州市中醫(yī)院藥劑科，廣西 柳州 54500； .江西中醫(yī)學(xué)院，江西 南昌 330004）

婦科泡騰栓是醫(yī)院傳統(tǒng)經(jīng)驗方婦科洗劑改進的制劑，由黃柏、苦參、蛇床子、魚腥草、野菊花、忍冬藤等中藥組成，具有清熱燥濕、瀉火解毒、殺蟲止癢等功效，臨床用于治療婦科各種陰道炎。原制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)已研究了薄層色譜定性鑒別和黃柏中鹽酸小檗堿的含量測定方法[1]，為進一步控制該制劑質(zhì)量，對方中另一主藥蛇床子的主要有效成分蛇床子素進行含量測定研究。目前蛇床子素的含量測定方法有分光光度法[2]、薄層掃描法[3]、氣相色譜法[4]和高效液相色譜法[5]等。本文采用高效液相色譜法測定蛇床子素的含量。

1 儀器與試藥

LC-20A高效液相色譜儀（日本島津公司），包括SPD-20A紫外檢測器、LC-20AT輸液泵、LCsolution工作站；AL204電子天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）；雙頻數(shù)控超聲清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；UV-1601紫外可見分光光度計（日本島津公司）。

婦科泡騰栓（規(guī)格：每粒2.7 g，柳州市中醫(yī)院制劑室制備）；蛇床子素對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號110822-200305）；乙腈為色譜純；水為純化水；其他試劑均為分析純 。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Shimpack VP-ODS C18柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm)；流動相為乙腈-水（60∶40）；流速為1.0 mL·min-1；柱溫為30 ℃；檢測波長為323 nm。理論塔板數(shù)按蛇床子素峰計算應(yīng)不低于3000。

2.2 測定波長選擇

取蛇床子素對照品適量，加乙醇使溶解，用紫外分光光度計于200～400 nm范圍內(nèi)掃描，結(jié)果表明，蛇床子素對照品在323 nm波長處有最大吸收峰，因此選擇323 nm作為測定波長。

2.3 溶液的制備

2.3.1 對照品溶液的制備 取蛇床子素對照品適量，精密稱定，加乙醇制成每1 mL含0.072 mg的溶液，即得。

2.3.2 供試品溶液的制備 取本品10粒，稱定重量，切碎，混勻，取約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加乙醇20 mL，精密稱定重量，超聲提取15 min，再精密稱定重量，用乙醇補足減失的重量，搖勻，置0 ℃以下放置30 min，取出，微溶后迅速濾取上清液，放至室溫，即得。

2.3.3 陰性對照溶液的制備 取不含蛇床子的處方藥材，按婦科泡騰栓的制備方法制備陰性樣品，取陰性樣品10粒，照供試品溶液的制備方法，制備陰性對照溶液。

2.4 陰性干擾試驗

按“2.1”項下的色譜條件，分別取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各20 μL進樣測定，結(jié)果供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上有一相同保留時間的色譜峰，而陰性對照溶液無干擾，見圖1。

圖1 典型的高效液相色譜圖A-蛇床子素對照品；B-樣品；C-陰性對照； 1-蛇床子素Fig 1 Typical HPLC chromatogramsA-reference substance of osthole; B-sample; C-negative control;1-osthole

2.5 線性關(guān)系考察

精密吸取對照品溶液0.50，1.00，2.00，4.00，6.00 mL于10 mL容量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取20 μL進樣，按“2.1”項下的色譜條件，以濃度C（μg·mL-1）為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)進行線性回歸分析，得回歸方程：A= 84 987C+ 5276，r= 0.999 9，結(jié)果表明：蛇床子素在3.6～43.2 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗

取同一濃度對照品溶液20 μL，按“2.1”項下的色譜條件，重復(fù)進樣6次，測得峰面積的RSD為1.20%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液，分別在放置0，0.5，1，2，4，8 h后，依法測定，結(jié)果RSD為0.78%，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗

取同一批樣品10粒，切碎，混勻，精密稱定6份，按“2.3.2”項下方法制備6份供試品溶液，按“2.1”項下的色譜條件測定，計算含量，RSD為1.06%。

2.9 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品6份，每份約0.25 g，各精密加入蛇床子素對照品，按“2.3.2”項下方法處理后，再按“2.1”項下色譜條件進樣測定，各進樣20 μL，測得蛇床子素峰面積，計算回收率，結(jié)果平均回收率為98.20%，RSD = 1.42%，詳見表1。

表1 蛇床子素回收率試驗結(jié)果Tab 1 Recovery test of osthole

2.10 樣品含量測定

分別精密稱取3批樣品，按“2.3.2”項下方法制備供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，按“2.1”項下的色譜條件測定。按外標(biāo)法計算蛇床子素含量，結(jié)果見表2。

3 討論

3.1 提取時間的選擇

本試驗參考有關(guān)資料[6-7]，樣品采用乙醇超聲提取，方法簡便。同時考察了超聲提取時間對樣品中蛇床子素提取的影響,結(jié)果用乙醇超聲處理10，20，30 min測定結(jié)果相近，為確保提取完全,故選擇超聲處理15 min。

3.2 流動相的選擇

曾參考相關(guān)文獻[5-8]，分別選用不同比例的甲醇-水、乙腈-水作為流動相進行試驗，根據(jù)分離情況，甲醇-水作為流動相雖然經(jīng)濟實惠，但分離效果不甚理想，最后選擇乙腈-水（60∶40）為流動相，可以使蛇床子素與其他成分很好地分離，峰形理想，且陰性對照無干擾。

本試驗采用HPLC法測定婦科泡騰栓中主要有效成分蛇床子素的含量，方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，能有效地用于婦科泡騰栓的質(zhì)量控制。

[1] 陳惠紅，楊曉敏，李茵，等.婦科泡騰栓的制備及質(zhì)量控制[J].中成藥，2008，30（10）：附26-附28.

[2] 史家明，張根元.紫外分光光度法測定蛇床子酊劑的含量[J].江蘇藥學(xué)與臨床研究，2001，9（2）：14-16.

[3] 魏桂林，劉大偉，羅添，等.薄層掃描法測定復(fù)方蛇床子洗劑中蛇床子素的含量[J].時珍國醫(yī)國藥，2006，17（4）：562-563.

[4] 張曉霞，周卯星，張高勇，等.氣相色譜法測定蛇床子提取物中蛇床子素的含量[J].時珍國醫(yī)國藥，2006，17（8）：1384-1385.

[5] 陳艷平，霍明，陳艷明，等.HPLC法測定蛇床子和婦炎靈膠囊中蛇床子素的含量[J].中成藥，2003，25（3）：196-198.

[6] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].2005版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：219-220.

[7] 黃輝，林輝.HPLC法測定婦炎靈膠囊中蛇床子素的含量[J].海峽藥學(xué)，2007，19（9）：59-60.

[8] 周靜安，徐玲笑.HPLC法測定金歸洗液中蛇床子素的含量[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2006，7（2）：15-17.