鄒 靜 劉 斌 陳雪華 李寧麗 王 利

(上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟醫(yī)院呼吸科,上海200127)

肺癌發(fā)病率高,預(yù)后差。肺癌的發(fā)病率在我國居于各惡性腫瘤之首位,達38.46/10萬,現(xiàn)有的特別針對晚期肺癌的治療效果欠佳,總體5年生存僅8%～14%。故探討肺癌的免疫機制,以助改善預(yù)后有必要性。免疫監(jiān)視是機體免疫系統(tǒng)的功能之一,即指在生理狀態(tài)下免疫系統(tǒng)能夠清除出現(xiàn)的突變細(xì)胞及早中期腫瘤細(xì)胞,在防止腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。另一方面,腫瘤負(fù)荷使宿主免疫系統(tǒng)的功能失衡。肺癌患者的免疫狀態(tài)與患者的腫瘤臨床病理學(xué)特征以及與預(yù)后的關(guān)系成為近年來的腫瘤研究焦點之一。T細(xì)胞分為CD4+、CD8+T細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞表面分子又分為幾大亞類,在維持機體免疫平衡中均起著各自的作用。近年來研究發(fā)現(xiàn),調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg,CD4+CD25+Foxp3+)是一類具有免疫調(diào)節(jié)功能的T細(xì)胞亞群,在維持機體免疫自穩(wěn)、調(diào)控免疫應(yīng)答方面起重要作用。在抗腫瘤免疫中,Treg發(fā)揮抑制效應(yīng)[1],主要表現(xiàn)在Treg占全T細(xì)胞的比例上升;Treg與CD8+T細(xì)胞相互接觸作用后抑制了CD8+T細(xì)胞的殺傷效應(yīng)[2]。同時,Treg可增加抑制性細(xì)胞因子的分泌;去除Treg可以抑制腫瘤生長等。CD3+γδT細(xì)胞是體內(nèi)固有免疫中的一個重要T細(xì)胞群,它廣泛分布于消化系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)上皮組織內(nèi),末梢血中也有一定數(shù)量的γδT細(xì)胞。隨著對γδT細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能研究的不斷深入,人們發(fā)現(xiàn)γδT細(xì)胞除了有與αβT細(xì)胞類似的一些功能特征外,還有其他的一些獨特的功能,如識別抗原不需要MHC分子提呈,直接識別蛋白質(zhì)和肽類抗原以及非肽類抗原,具有抗原提呈細(xì)胞的一些特征,并能通過細(xì)胞接觸和分泌的細(xì)胞因子起免疫調(diào)節(jié)作用。近年來,應(yīng)用γδT細(xì)胞基因敲除的小鼠證明,CD3+γδT細(xì)胞在腫瘤免疫監(jiān)視中具有重要的作用[3,4]。本研究采用流式細(xì)胞術(shù)檢測技術(shù)檢測肺癌患者外周血單個核細(xì)胞(PBMC)中各亞類T細(xì)胞:總T細(xì)胞、Th細(xì)胞(CD3+CD4+)、Tc細(xì)胞(CD3+CD8+)、NKT 細(xì)胞(CD3+CD16+CD56+)、調(diào)節(jié)性 T 細(xì)胞、CD3+γδT 細(xì)胞和NK細(xì)胞(CD3-CD16+CD56+)水平的變化,探討其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 收集上海交通大學(xué)附屬仁濟醫(yī)院呼吸科2008年～2009年間肺癌患者外周血,共56例,年齡46～84平均 66.3歲,其中,男 41例、女 15例,早中期(Ⅰ～Ⅲa)20例,晚期(Ⅲb～Ⅳ)36例。健康組為18例正常健康志愿者,年齡33～70平均58.3歲,其中男10例、女8例。

1.2 直接免疫熒光標(biāo)記法 分別抽取56名患者和18例正常健康志愿者外周抗凝血2 ml,采用直接免疫熒光標(biāo)記法進行抗體標(biāo)記實驗。簡述之:取上述抗凝血100μl,于每一管中,并分別直接加入10μl PreCP標(biāo)記鼠抗人CD3、FITC標(biāo)記鼠抗人CD4、PE標(biāo)記鼠抗人CD8、PE-Cy5標(biāo)記鼠抗人 CD25、PE標(biāo)記鼠抗人 CD127和PE標(biāo)記鼠抗人TCRγδ(BD Pharmingen,San Diego,California,USA),連接有熒光素的抗體進行免疫標(biāo)記反應(yīng),同時加入FITC標(biāo)記小鼠IgG、PE標(biāo)記小鼠IgG、PreCP標(biāo)記小鼠IgG和 PE-cy5標(biāo)記小鼠IgG作為同型對照(BD Pharmingen),并充分混勻,避光,于室溫中孵育30分鐘后,加入4 ml紅細(xì)胞裂解液,室溫中繼續(xù)孵育30分鐘裂解紅細(xì)胞,離心1 500 r/min 5分鐘,用PBS(pH 7.2～7.4)洗1～2次,加入0.4%多聚甲醛-PBS緩沖液重懸細(xì)胞,上FACS流式細(xì)胞儀(BD FACSCalibur)檢測后,用CELL Quest軟件進行數(shù)據(jù)分析。

1.3 流式細(xì)胞儀檢測 FACS流式細(xì)胞儀檢測CD3+占淋巴細(xì)胞比例,CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+δT+、CD16+CD25+細(xì)胞占CD3+T細(xì)胞比例,CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(以檢測CD4+CD25+CD 127dim作為表達Foxp3+的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞)占CD4+T細(xì)胞比例。

1.4 數(shù)據(jù)處理 研究資料用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行t檢驗及單因素方差分析,P＜0.05為有顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 肺癌患者組與健康組T細(xì)胞亞群的統(tǒng)計分析

肺癌患者組與健康組在性別、年齡比較差異無顯著性(P＞0.05)。本文分析了56例早中期(Ⅰ～Ⅲa)20例(年齡53～77平均66.3歲,男14例、女6例)和晚期(Ⅲb～Ⅳ)36例肺癌患者(年齡46～84平均66.6歲,男27例、女9例)。表 1所示,56例肺癌患者總T細(xì)胞(CD3+)比例明顯低于健康組 61.41%±7.88%vs 71.63%±5.59%(P＜0.001),肺癌患者CD3+CD8+(Tc)細(xì)胞比例明顯低于健康組23.58%±7.18%vs 28.44%±5.20%(P＜0.05),而CD3+CD4+(Th)細(xì)胞、NKT細(xì)胞都有所降低,但差異尚不具統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。數(shù)據(jù)提示,肺癌患者的CD3+T細(xì)胞和CD3+CD8+(Tc)細(xì)胞的數(shù)量較健康對照組存在顯著差異,而這些亞群細(xì)胞的數(shù)量和功能缺陷與肺癌患者的疾病進程和轉(zhuǎn)歸有關(guān),見表1。

2.2 健康組、早中期肺癌組患者與晚期組肺癌患者T細(xì)胞亞群的比較 分析肺癌組56例患者,其中早中期(Ⅰ～ Ⅲa)20例(年齡53～77平均66.3歲,男14例、女6例)和晚期(Ⅲb～Ⅳ)36例肺癌患者(年齡46～84平均66.6歲,男27例、女9例),健康組、早中期組和晚期組在性別、年齡比較無顯著差異(P＞0.05)。

2.2.1 健康組、早中期肺癌組患者與晚期組肺癌患者CD3+、Tc、Th細(xì)胞亞群的比較 早中期肺癌組患者與晚期組肺癌患者與健康組比較外周血CD3+比例同樣顯著降低64.28%±5.56%vs 71.63%±5.59%,60.25%±8.25%vs 71.63%±5.59%(P＜0.001);CD3+CD8+(Tc)比例低于健康組23.39%±7.22%vs 28.44%±5.20%,23.70%±7.30%vs 28.44%±5.20%(P＜0.05);CD16+CD56+比例低于健康組 14.13%±7.28%vs 18.74%±6.39%,15.53%±5.04%vs 18.74%±6.39%(P＜0.05);CD 3+CD4+(Th)細(xì)胞有所降低,但差異尚不具統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05),詳見表2,圖1。

表1 健康組與肺癌患者T細(xì)胞亞群與臨床病程關(guān)聯(lián)性分析(±s)Tab.1 Correlation analysis of T lymphocyte subsets between health group and lung cancer group( ±s)

表1 健康組與肺癌患者T細(xì)胞亞群與臨床病程關(guān)聯(lián)性分析(±s)Tab.1 Correlation analysis of T lymphocyte subsets between health group and lung cancer group( ±s)

Note:Health group vs lung cancer 1)P＜0.05,2)P＜0.01,3)P＜0.001.

T lymphocyte subsets Health(n=18)Lung cancer(n=56)CD3+ 71.63±5.593) 61.41±7.883)CD3+CD4+(Th) 38.60±6.05 34.79±7.18 CD3+CD8+(Tc) 28.44±5.201) 23.58±7.181)CD3-CD16+CD56+(NK) 18.74±6.391) 15.02±7.611)CD3+CD16+CD56+(NKT) 2.53±1.52 1.80±1.36 Treg cell 3.65±2.003) 6.20±1.633)CD3+γδT cell 5.53±1.872) 3.35±1.412)

表2 健康組、早中期肺癌組患者與晚期組肺癌患者CD3+、Tc、Th 細(xì)胞亞群的比較(±s)Tab.2 Correlation analysis of CD3+,Tc,Th lymphocyte subsets among health group,early-middle stage and later stage of lung cancer group(±s)

表2 健康組、早中期肺癌組患者與晚期組肺癌患者CD3+、Tc、Th 細(xì)胞亞群的比較(±s)Tab.2 Correlation analysis of CD3+,Tc,Th lymphocyte subsets among health group,early-middle stage and later stage of lung cancer group(±s)

Note:Health groups vs early-middle stage,1)P＜0.01;Health groups vs later stage,2)P＜0.001;Health groups vs early-middle stage,3)P＜0.05;Health groups vs later stage,4)P＜0.05.

T lymphocyte subsets Health(n=18)Early-middle stage(n=20)Later stage(n=36)CD3+ 71.63±5.591)2) 64.28±5.56 60.25±8.25 CD3+CD4+(Th)38.60±6.05 37.17±7.03 34.42±7.20 CD3+CD8+(Tc)28.44±5.203)4) 23.39±7.22 23.70±7.30

2.2.2 健康組、早中期肺癌組與晚期組肺癌組患者CD3+γδT細(xì)胞表達分析 CD3+γδT 細(xì)胞具有拮抗腫瘤的重要臨床意義,而以腹腔腫瘤和結(jié)直腸癌更具關(guān)聯(lián)性。雖然肺癌早中期和肺癌晚期組外周血CD3+γδT細(xì)胞比例與健康組比較顯著降低2.64%±1.41%vs 5.53%±1.87%(P＜0.01),3.70%±1.89%vs 5.53%±1.87%(P＜0.01),重要的意義在于早中期肺癌組與晚期肺癌組間的CD3+γδT細(xì)胞比例的統(tǒng)計具有統(tǒng)計學(xué)差別(P＜0.05)。結(jié)果見表3,圖2的FACS圖示。

圖1 健康組、早中期肺癌組患者與晚期組肺癌患者CD3+、Tc、Th細(xì)胞亞群的比較Fig.1 Comparison of CD3+,Tc,Th lymphocyte subsets between patients of early-middle stage and that of later stage

表3 健康組、早中期肺癌組患者與晚期組肺癌患者CD3+γδT細(xì)胞亞群的比較(±s)Tab.3 Correlation analysis of CD3+γδT lymphocyte subsets among health group,early-middlestage and later stage of lung cancer group(±s)

表3 健康組、早中期肺癌組患者與晚期組肺癌患者CD3+γδT細(xì)胞亞群的比較(±s)Tab.3 Correlation analysis of CD3+γδT lymphocyte subsets among health group,early-middlestage and later stage of lung cancer group(±s)

Note:Health groups vs early stage,health groups vs later stage,1)P＜0.01,2)P＜0.01;Early and middle stage vs later stage,3)P＜0.05.

T lymphocyte subsets Health(n=18)Early-middle stage(n=20)Later stage(n=36)CD3+γδT cell 5.53±1.871)2)2.64±1.413) 3.70±1.89

圖2 早中期肺癌組與晚期組肺癌組患者CD3+γδT細(xì)胞表達分析Fig.2 Theexpression of CD3+γδT cells in PBMC of lung cancer patients in early-middlestageand later stage

表4 健康組、早中期肺癌組患者與晚期組肺癌患者Treg細(xì)胞亞群的比較(±s)Tab.4 Correlation analysis of Treg lymphocyte subsets among health group,early-middlestage and later stageof lung cancer group(±s)

表4 健康組、早中期肺癌組患者與晚期組肺癌患者Treg細(xì)胞亞群的比較(±s)Tab.4 Correlation analysis of Treg lymphocyte subsets among health group,early-middlestage and later stageof lung cancer group(±s)

Note:Health group vsearly-middle stage,1)P＜0.001;Health group vslater stage,2)P＜0.01;Early-middle stage vs later stage,3)P＜0.05.

T lymphocyte subsets Health(n=18)Early-middle stage(n=20)Later stage(n=36)Treg cell 3.65±2.001) 5.06±1.22 6.78±2.64

圖3 健康組早中期肺癌組患者與晚期肺癌組患者Treg細(xì)胞的統(tǒng)計分析Fig.3 The analysis of Treg cell in health group and lung cancer patients with early-middle stage and later stage

表5 健康組、早中期肺癌組患者與晚期組肺癌患者CD16+CD56+細(xì)胞亞群的比較(±s)Tab.5 Correlation analysis of CD16+CD56+lymphocyte subsets among health group,early-middle stage and later stage of lung cancer group( ±s)

表5 健康組、早中期肺癌組患者與晚期組肺癌患者CD16+CD56+細(xì)胞亞群的比較(±s)Tab.5 Correlation analysis of CD16+CD56+lymphocyte subsets among health group,early-middle stage and later stage of lung cancer group( ±s)

Note:Health group vs early-middle stage,1)P＜0.05;Health groups vs later stage,2)P＜0.05.

T lymphocyte subsets Health(n=18)Early-middle stage(n=20)Later stage(n=36)CD3-CD16+CD56+(NK)18.74±6.391)2)14.13±7.28 15.53±5.04

圖4 肺癌早中期與肺癌晚期組CD16+CD56+細(xì)胞的比較Fig.4 The comparison of CD16+CD56+in lung cancer patients with early-middle stageand later stage

2.2.3 健康組、早中期肺癌組患者與晚期肺癌組患者Treg細(xì)胞的統(tǒng)計分析 通過分析肺癌患者早中期組和晚期組Treg細(xì)胞發(fā)現(xiàn):其比例較健康對照組顯著增高5.06%±1.22%vs 3.65%±2.00%(P＜0.001),6.78%±2.64%vs 3.65%±2.00%(P＜0.001),而有別于上述T細(xì)胞亞群在肺癌不同臨床期的表現(xiàn)。且晚期肺癌組Treg細(xì)胞較早中期肺癌組明顯提高并具有統(tǒng)計學(xué)差別(P＜0.05)。見表4,圖3所示。

2.2.4 健康組、肺癌早中期與肺癌晚期組CD16+CD56+細(xì)胞的比較 CD16+CD56+細(xì)胞(NK)在拮抗腫瘤中具有重要意義,目前認(rèn)為NK細(xì)胞的數(shù)量和功能表現(xiàn)與腫瘤的發(fā)生發(fā)展具有密切關(guān)聯(lián)。本實驗研究發(fā)現(xiàn)肺癌早中期和肺癌晚期組外周血CD16+CD56+細(xì)胞比例較健康組降低14.13%±7.28%vs 18.74%±6.39%,15.53%±5.04%vs 18.74%±6.39%(P＜0.05),而早中期肺癌組與晚期組肺癌組之間CD16+CD56+細(xì)胞未見統(tǒng)計學(xué)差別(P＞0.05),見表5,圖4。

3 討論

在生理狀態(tài)下機體免疫系統(tǒng)的免疫監(jiān)視的作用是清除出現(xiàn)的突變細(xì)胞及早中期腫瘤細(xì)胞,具有防止腫瘤發(fā)生的作用。許多研究表明,多種淋巴細(xì)胞如CD8+細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)、NK細(xì)胞等均參與腫瘤免疫。腫瘤的發(fā)生是腫瘤細(xì)胞逃避機體免疫監(jiān)視的結(jié)果,導(dǎo)致腫瘤宿主免疫功能紊亂,其可能的逃避機制:①腫瘤可能通過不表達MHCⅠ類分子,下調(diào)T細(xì)胞的激活表位;腫瘤分泌的免疫抑制因子,如IL-10、TGF-β可誘導(dǎo)針對腫瘤特異性抗原的免疫耐受[5,6]。②腫瘤細(xì)胞分泌趨化因子CCL22趨化調(diào)節(jié)性T細(xì)胞至腫瘤局部,發(fā)揮免疫抑制效應(yīng)[7]。

機體抗腫瘤免疫的主要方式是細(xì)胞免疫,T細(xì)胞、NK細(xì)胞和巨噬細(xì)胞是最主要的效應(yīng)細(xì)胞,MHCⅠ類分子限制的CTL和MHCⅡ類分子限制的CD4+輔助性T細(xì)胞(helper T cell,Th)可分別識別腫瘤抗原肽,它們在一系列輔助信號的參與下,被誘導(dǎo)激活并介導(dǎo)抗腫瘤免疫反應(yīng)。自然殺傷T細(xì)胞(Nature killer T cells,NKT)既具有T細(xì)胞表面標(biāo)志,同時也表達NK細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記如CD16CD56或CD161(人NKR.P1A、小鼠NK1.1抗原)。

本實驗使用流式細(xì)胞術(shù)檢測法分析了來自于肺癌早中期和晚期的58例患者的外周血的CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD16+CD56+、CD3-CD16+CD56+T細(xì)胞的比例,結(jié)果顯示各組:健康組,腫瘤組(早中期組、晚期組)經(jīng)統(tǒng)計分析,肺癌患者外周血總 T細(xì)胞 CD3+、CD3+CD8+、CD3-CD16+CD56+(NK)、Treg細(xì)胞、CD3+γδT 細(xì)胞數(shù)量較健康組明顯下降,差異具有顯著性(P＜0.05);而CD3+CD4+(Th)和CD3+CD16+CD56+(NKT)細(xì)胞在兩組間無明顯差異(P＞0.05)。惡性腫瘤患者CD4+T細(xì)胞亞群的改變情況報道不一,但是多數(shù)研究顯示:CD4+T細(xì)胞亞群在惡性腫瘤患者中是表現(xiàn)為減少的[9-11]。但數(shù)據(jù)呈現(xiàn)出隨著疾病進展,晚期組患者Th、NK、NKT較健康組、早中期組呈下降趨勢。

CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞是新近鑒定的一群免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞,于1995年由Sakaguchi等[12]首先報道的,該細(xì)胞亞群在胸腺中分化成熟,是一組具有免疫調(diào)節(jié)(或免疫抑制)作用的細(xì)胞群,是健康個體T細(xì)胞庫的組成成份,占CD4+T細(xì)胞的5%～15%。深入研究發(fā)現(xiàn)具有免疫調(diào)節(jié)潛力的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞就是限制自身免疫反應(yīng)的重要因素之一[13]。

本實驗是直接通過流式細(xì)胞儀技術(shù)(FCM)檢測肺癌患者和健康對照人群組外周血CD4+CD25+Foxp3+T細(xì)胞和γδT細(xì)胞的分布情況。結(jié)果顯示①肺癌患者到晚期,其外周血中Treg細(xì)胞分別與健康對照組和肺癌早中期組比較均明顯升高,提示宿主腫瘤免疫處于免疫抑制狀態(tài)。②Treg細(xì)胞數(shù)量隨著腫瘤的進展而有上升趨勢,這與既往Sasada等[14]對149例胃癌患者及7例出現(xiàn)腹膜轉(zhuǎn)移的胃癌患者外周血中檢測Treg細(xì)胞數(shù)量實驗顯示,其數(shù)量越高,患者預(yù)后越差的結(jié)果是相一致的;提示可能Treg細(xì)胞比例越高,宿主預(yù)后越差。

γδT細(xì)胞從肺癌腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞(TIL)中分離獲得,并發(fā)現(xiàn)這些細(xì)胞對新鮮自體腫瘤細(xì)胞和K562細(xì)胞具有高效殺傷活性,許多作者證實了在直腸癌、腎癌、肝癌和乳腺癌等實體瘤的TIL中存在γδT細(xì)胞,并具有抗腫瘤作用[15-18]。本實驗發(fā)現(xiàn)腫瘤組外周血CD3+γδT細(xì)胞比例(3.35%±1.41%)顯著低于健康組(5.53%±1.87%)。這與國內(nèi)學(xué)者發(fā)現(xiàn)食管癌患者外周血γδT細(xì)胞水平顯著低于正常人群的結(jié)果相似[19]。但實驗同時發(fā)現(xiàn)一個有趣的現(xiàn)象,即肺癌患者晚期組與肺癌早中期組比較外周血CD3+γδT細(xì)胞比例顯著增高,(3.70%±1.89%vs 2.64%±1.41%,P＜0.05)。人們對腫瘤免疫學(xué)認(rèn)識不斷深入的基礎(chǔ)上提出了“腫瘤免疫編輯”,即是指機體免疫系統(tǒng)殺傷腫瘤的同時,腫瘤的惡性程度逐漸增加,導(dǎo)致免疫系統(tǒng)和腫瘤的力量對比失衡,最終可導(dǎo)致機體死亡的過程。腫瘤免疫編輯是一個動態(tài)發(fā)展的過程,主要由3個階段組成:清除、均衡及逃逸。腫瘤晚期患者可能已經(jīng)歷免疫均衡期,機體的免疫系統(tǒng)雖能識別和殺傷腫瘤組織,但并不一定能將其完全清除。經(jīng)過免疫清除后,存活下來的弱免疫原性腫瘤細(xì)胞和免疫系統(tǒng)之間可以動態(tài)平衡的狀態(tài)共處,產(chǎn)生了對免疫攻擊具有更強耐力的腫瘤細(xì)胞。雖然晚期肺癌患者γδT細(xì)胞數(shù)量上較早中期患者顯著增高,但其真正的抗腫瘤細(xì)胞的功效卻可能并非與其細(xì)胞數(shù)量呈正比關(guān)系。本實驗結(jié)果顯示腫瘤患者T細(xì)胞數(shù)量較健康組明顯降低,CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞隨著腫瘤疾病的進展其水平呈逐漸上升的趨勢,腫瘤組外周血CD3+γδT細(xì)胞比例顯著低于健康組,提示腫瘤宿主抗腫瘤免疫水平低下,處于免疫抑制狀態(tài),而本文試圖從早中期肺癌組和晚期肺癌組患者間的比較發(fā)現(xiàn)不僅晚期肺癌組較早中期肺癌組的CD3+γδT細(xì)胞具有增高的傾向且其兩組Treg細(xì)胞也具有統(tǒng)計學(xué)差異,表明調(diào)節(jié)性T細(xì)胞和CD3+γδT細(xì)胞也與肺癌的臨床病程具有一定的關(guān)聯(lián)性。

目前國內(nèi)外關(guān)于腫瘤患者體內(nèi)亞類T細(xì)胞改變的報道是不盡相同的,提示T細(xì)胞在機體腫瘤免疫中的作用和地位不能單從T細(xì)胞數(shù)量上來判斷機體的免疫狀態(tài),還應(yīng)從T細(xì)胞功能,如分泌細(xì)胞因子、細(xì)胞毒性、細(xì)胞活性等方面綜合考慮分析,因此今后關(guān)于腫瘤患者T細(xì)胞的研究應(yīng)該從多方面,多角度來分析總結(jié),為腫瘤的免疫治療提供一些線索。

1 Jason D,Marc A,Alexander Y et al.Foxp3 programs thedevelopment and function of CD4+CD25+regulatory T cells[J].Nature Immuno,2003;4:330-336.

2 Nakamura K,Kitani A,Strober W et al.Cell contact-dependent immunosuppression by CD4+CD25+regulatory T cells is mediated by cell surface-bound transforming growth factor beta[J].J Exp Med,2001;194:629-644.

3 Born WK,Reardon CL and O'Brien R L.The function ofγδT cells in innate immunity[J].Curr Opin Immunol,2006;18:31-38.

4 Moser B,Brandes M.Gammadaelta T cells:an alternative type of profession APC[J].Trends Immunol,2006;27:112-118.

5 Staveley-O'Carroll K,Sotomayor E,Montgomery J et al.H.Induction of antigenspecific T cell anergy:An early event in the courseof tumor progression[J].Proc Natl Acad Sci USA,1998;95:1178-1183.

6 李紅霞,王春光,邵國光 et al.肺癌組織中誘導(dǎo)型一氧化氮合酶合血管內(nèi)皮生長因子的表達與血管生成的關(guān)系[J].吉林大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版,2005;31(4):592-594.

7 Curiel T J,Coukos G,Zou L et al.Specific recruitment of regulatory T cells in ovarian carcinoma fosters immune privilege and predicts reduced survival[J].Nat Med,2004;10:942-949.

8 Taniguchi M,Seino K,Nakayama T.The NKT cell system:bridging innate and acquired immunity[J].Nat Immunol,2003;4(12):1164-1165.

9 Advani S H,Kutty PM,Gopal R et al.Immunity in oesophageal carcinoma[J].JS urgO ncol,1983;24(4):268.

10 Olsen G N,Gangemi JD.Bronchoalveolar layage and the immunology of primary lung cancer[J].Chest,1985;87(5):677-683.

11 Mitropoulos D,Alamanis C,Deliveliotts C et al.T-lymphocyte subsets in the peripheral blood of patients with renal cell carcinoma[J].Arta Urol Belg,1995;63(3):21-25.

12 Sakaguchi S,Skaguchi N,Asano M et al.Immunologic self-tolerance maintained by activated T cells expressing IL-2 receptor alphachains＜CD25＞.Breakdown of a single mechanism of self-tolerance causes various autoimmune diseases[J].JImmunol,1995;155:1151-1164.

13 Sakaguchi S.Regulatory T cells:key controllers of immunologic self-tolerance[J].Cell,2000;101:455-458.

14 Sasada T,Kimura M,Yoshida Y et al.CD4+CD25+regulatory Tcells in patients withgastrointestinalmalignancies:possibleinvolvement of regulatory T cells in disease progression[J].Cancer,2004;98(5):1089-1099.

15 Zheng B J,Chan K W,Im S et al.Anti-tumor effectsof human peripheral gammadelta T cells in a mouse tumor model[J].Int JCancer,2001;92:421-425.

16 Watanabe N,Hizuta A,Tanaka N et al.Localization of T cell receptor(TCR)-gemma delta+T cellsinto human colorectal cancer:flow cytometric analysis of TCR-gammadelta expression in tumor-infiltrating lymphocytes[J].Clin Exp Immunol,1995;102:167-173.

17 Mitropoulos D,Kooi S,Rodriguez-Villanueva J,et al.Characterization of fresh(uncultured)tumor-infiltrating lymphocytes(TIL)and TIL-derived T cell lines from patients with renal cell carcinoma[J].Clin Exp Immunol,1994;97:321-327.

18 Chen J,Niu H T,He W et al.Anti-tumor activiey of expanded human tumor infiltrating γδT lymphocytes[J].Int Arch Allergy Appl Immunol,2001;125:256-263.

19 王春利,張少云,馬炎炎 et al.食管癌患者外周血γδT細(xì)胞對Th1/Th2細(xì)胞因子的影響[J].腫瘤研究與臨床,2005;2(17):3-5.