宋 擎， 柴秋彥，張立偉,*

(1.山西大學(xué)分子科學(xué)研究所，山西 太原 030006；2.山西省醫(yī)藥與生命科學(xué)研究院，山西 太原 030006)

當(dāng)前治療惡性腫瘤的手段主要以手術(shù)切除和化療為主，傳統(tǒng)的化療藥物如烷化劑、抗代謝類藥、鉑類化合物等由于其不良反應(yīng)過強(qiáng)，往往造成患者不耐受并增加了患者的痛苦。近幾十年的研究已將重點(diǎn)轉(zhuǎn)移到對(duì)天然抗腫瘤藥物的開發(fā)和利用。中藥的抗腫瘤療效確切，并且低不良反應(yīng)，部分中藥還有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、抑制腫瘤轉(zhuǎn)移等作用，在抗腫瘤治療中的優(yōu)點(diǎn)尤為突出。目前很多中藥已成功應(yīng)用于臨床，其療效肯定，患者容易耐受。所以，尋求更多此類新型的治療藥物已成為研究的熱點(diǎn)。

蘆筍(Asparagus officinalisL.)又名石刁柏、龍須菜，為百合科天門冬屬宿根性多年生草本植物，其營養(yǎng)價(jià)值高，《神農(nóng)本草經(jīng)》中將之列為“上品之品”。蘆筍除含有多種游離氨基酸、維生素、微量元素硒、鐵、鋅及蛋白質(zhì)、碳水化合物等營養(yǎng)成分外，還含有皂苷[1-2]、黃酮類[3-4]物質(zhì)等具有藥用價(jià)值的化學(xué)成分，因此也具有較高的藥用價(jià)值。研究表明：蘆筍提取物對(duì)腫瘤細(xì)胞的DNA 和RNA的生物合成有顯著的抑制作用[5]；體外抑瘤實(shí)驗(yàn)證明其對(duì)胃癌、白血病、肝癌均有一定抑制作用；體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)蘆筍提取物對(duì)S180小鼠肉瘤、小鼠艾氏腹水癌的生長(zhǎng)具有抑制作用[6-7]。另外，Kawano等[8]對(duì)蘆筍有效成分進(jìn)行了分離、鑒定，證實(shí)蘆筍皂苷C和D對(duì)小鼠移植性乳腺癌、胰腺癌、子宮頸癌的生長(zhǎng)具有抑制作用。上述研究結(jié)果說明蘆筍含有抗腫瘤活性的化學(xué)物質(zhì)，為進(jìn)一步闡明蘆筍抗腫瘤活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)研究蘆筍總皂苷對(duì)小鼠移植性腫瘤S180、H22的抑制作用。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

清潔級(jí)ICR小鼠，體質(zhì)量(22～25g)，雌雄各半，由北京軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SCXK—(軍)2002-001；小鼠移植性腫瘤：肉瘤(S180)、肝癌(H22)，均由山西省腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所提供；蘆筍粗總皂苷由本室自制。

注射用環(huán)磷酰胺(CY，批號(hào)：071108) 江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司；5-氟脲嘧啶(5-Fu，批號(hào)：070402) 南通精華制藥有限公司；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

DK-98-Ⅰ型數(shù)字恒溫水浴鍋 天津市泰斯特儀器有限公司；TD18單盤光學(xué)天平 湘儀天平儀器廠；OLYMPUS BH-2型光學(xué)顯微鏡 奧林巴斯光學(xué)工業(yè)株式會(huì)社；血球計(jì)數(shù)儀XB-K-25 上海醫(yī)用光學(xué)儀器廠。

1.2 方法

1.2.1 蘆筍總皂苷的制備

稱取蘆筍莖皮粉末2.0kg，依次用15倍量、10倍量70%乙醇，回流提取兩次，每次0.5h。合并兩次提取液，過濾，濾液用水飽和正丁醇萃取3～5次，合并正丁醇層，濃縮至浸膏，得到正丁醇部分。稱取D101大孔吸附樹脂1000g，裝柱，按照大孔吸附樹脂預(yù)處理方法進(jìn)行預(yù)處理。將正丁醇部分上樣，水洗至流出液無色，然后依次用20%、40%、60%、80%、95%乙醇梯度洗脫，合并40%、60%、80%洗脫液，濃縮至干，得到蘆筍粗總皂苷40.6g。用茴香醛硫酸法[9]測(cè)定其總皂苷含量為38.82%，每1g總皂苷約相當(dāng)于50g藥材。

1.2.2 總皂苷溶液配制及用量

將蘆筍總皂苷用注射用水配成溶液，高劑量組每鼠給藥1.0g/kg bw，中劑量組每鼠給藥0.5g/kg bw，低劑量組每鼠給藥0.25g/kg bw。環(huán)磷酰胺(CY)組每鼠給藥30mg/kg bw，作為S180小鼠腫瘤陽性對(duì)照；5-Fu尿嘧啶組每鼠給藥50mg/kg bw，作為H22小鼠腫瘤陽性對(duì)照。

1.2.3 抗腫瘤作用實(shí)驗(yàn)

取接種7d處于指數(shù)生長(zhǎng)期，且動(dòng)物健康狀況較好的種鼠，頸椎脫臼處死后抽取腹水3mL，用無菌生理鹽水配成1:4～1:6的腫瘤細(xì)胞懸液，腫瘤細(xì)胞計(jì)數(shù)S180為1.6×107個(gè)/mL，H22為1.85×107個(gè)/mL。在每只小鼠右前肢腋窩皮下接種0.2mL。實(shí)驗(yàn)設(shè)陰性對(duì)照組，陽性對(duì)照組，高、中、低劑量組共5組，每組1 0只，雌雄各半。給藥前稱體質(zhì)量，于接種后24h開始灌胃給藥，每天固定時(shí)間段給藥1次，陰性對(duì)照組給同等體積生理鹽水，連續(xù)10d。末次給藥后24h稱體質(zhì)量，摘取眼球取血后處死，完整剝離腫瘤、脾臟、胸腺等組織。分別稱量各組小鼠瘤重及脾臟、胸腺等器官的質(zhì)量，并計(jì)算其體質(zhì)量增長(zhǎng)率、抑瘤率和脾臟、胸腺指數(shù)。

1.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示；以Excel-2003進(jìn)行t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 蘆筍總皂苷對(duì)S180、H22荷瘤小鼠體質(zhì)量的影響

表1 蘆筍總皂苷對(duì)S180、H22荷瘤小鼠體質(zhì)量的影響(n=10)Table1 Effect of total saponins from Asparagus officinalis on body weight of tumor-bearing mice (n=10)

由表1可以看到，與陽性對(duì)照藥環(huán)磷酰胺相比，不同劑量組小鼠體質(zhì)量均有明顯的增長(zhǎng)，其中高劑量組和低劑量組小鼠體質(zhì)量增長(zhǎng)幅度均超過了陰性對(duì)照組，說明蘆筍總皂苷對(duì)小鼠的體質(zhì)量增長(zhǎng)無明顯影響。

2.2 蘆筍總皂苷對(duì)小鼠移植性腫瘤S180、H22的抑制作用

依次對(duì)不同組別小鼠剝離的腫瘤組織進(jìn)行稱量，并進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。

表2 蘆筍總皂苷對(duì)S180、H22荷瘤小鼠腫瘤的抑制作用(n=10)Table2 Inhibitory effects of total saponin from Asparagus officinalis on the growth of S180 and H22 cells (n=10)

表2結(jié)果顯示，不同劑量的蘆筍總皂苷對(duì)腫瘤生長(zhǎng)均有不同程度的抑制作用，隨給藥劑量的增加，對(duì)腫瘤的抑制作用也逐漸加強(qiáng)，呈現(xiàn)較好的量效關(guān)系。一般認(rèn)為抑瘤率達(dá)到30%以上時(shí)，藥物有效，而高劑量組S180抑瘤率達(dá)到39.53%，H22抑瘤率達(dá)到34.81%，說明蘆筍總皂苷具有抗腫瘤效果。t檢驗(yàn)結(jié)果表明，高劑量組和陽性對(duì)照組瘤重與陰性對(duì)照組存在顯著差異，說明蘆筍總皂苷對(duì)S180和H22腫瘤存在一定的抑制作用。

2.3 蘆筍總皂苷對(duì)S180、H22荷瘤小鼠主要免疫器官質(zhì)量的影響

依次對(duì)不同組別小鼠剝離的脾臟和胸腺組織進(jìn)行稱量，計(jì)算相應(yīng)指數(shù)并進(jìn)行組間t檢驗(yàn)，給藥組與陰性對(duì)照組相應(yīng)抑制率的差異見表3。

表3 蘆筍總皂苷對(duì)S180、H22荷瘤小鼠免疫器官的影響(n=10)Table3 Effect of total saponin from Asparagus officinalis on immune organs of tumor-bearing mice (n=10)

由表3可見，環(huán)磷酰胺陽性對(duì)照組小鼠給藥后，脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)均明顯下降，說明環(huán)磷酰胺對(duì)小鼠的脾臟和胸腺有較大的抑制作用；陽性對(duì)照5-氟脲嘧啶對(duì)小鼠的胸腺系數(shù)有抑制作用。而給藥組小鼠給予蘆筍總皂苷后，3個(gè)劑量總皂苷對(duì)小鼠脾臟系數(shù)和胸腺系數(shù)都具有改善作用。但從t檢驗(yàn)結(jié)果來看，3個(gè)劑量組的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)與陰性對(duì)照組相比沒有顯著差異，說明蘆筍總皂苷在發(fā)揮抗腫瘤作用的同時(shí)，對(duì)小鼠的免疫器官無明顯抑制作用。

3 討 論

近年來對(duì)蘆筍抗癌研究結(jié)果表明，蘆筍原汁[10]、提取物[11]對(duì)體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)具有抑制作用，且其抗腫瘤活性與蘆筍中的堿性糖蛋白、粗皂角苷類等物質(zhì)[7]有關(guān)。此外，也有研究表明蘆筍及其提取物具有調(diào)節(jié)免疫功能作用，可能是蘆筍抗腫瘤作用的機(jī)制之一[12]。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，蘆筍總皂苷在中、高劑量時(shí)能明顯抑制小鼠移植性腫瘤H22、S180的生長(zhǎng)，對(duì)荷瘤小鼠免疫器官的質(zhì)量則沒有明顯的影響。說明蘆筍總皂苷是蘆筍抗腫瘤的主要藥效物質(zhì)組成成分之一，且無一般抗腫瘤藥物的不良反應(yīng)；蘆筍總皂苷抑制H22、S180腫瘤生長(zhǎng)的機(jī)理一方面與總皂苷直接抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)有關(guān)，另一方面可能與其調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能有關(guān)。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果與以往報(bào)道的蘆筍皂苷抗腫瘤的有效部位基本一致，為今后從蘆筍中進(jìn)一步分離、提取抗腫瘤有效成分提供了目標(biāo)，也為今后制劑工藝的合理優(yōu)化提供了藥效學(xué)依據(jù)。

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