方 玲 ，朱新冰 ，尹 菊 ，郭 虹 ，高 嵐 ，張艷軍

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，天津市中藥藥理重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津 300193；2.天津市中心婦產(chǎn)科醫(yī)院，天津 300193）

原發(fā)性痛經(jīng)（PD）是一種多病因疾病，常表現(xiàn)為月經(jīng)前及行經(jīng)期間，下腹及腰部痙攣性疼痛，嚴(yán)重時(shí)伴有惡心、嘔吐、肢冷，尤其多見于未婚青年女性。中醫(yī)藥在治療和預(yù)防痛經(jīng)方面得到了越來越廣泛的認(rèn)可。經(jīng)前三劑止痛方（JQF）是臨床上治療PD的有效方藥，連續(xù)服用3個(gè)月經(jīng)周期，每個(gè)月經(jīng)期之前服用3劑，臨床原發(fā)性痛經(jīng)治愈率可達(dá)96%。子宮內(nèi)膜合成和釋放前列腺素增加，是原發(fā)性痛經(jīng)的重要原因，本研究系統(tǒng)考察了JQF對實(shí)驗(yàn)性痛經(jīng)模型大鼠子宮前列腺素和激素水平的影響，探討其治療痛經(jīng)的作用機(jī)制，為臨床上更好地使用該方提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并為進(jìn)一步研發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康SD大白鼠，雌性，30只未孕，體質(zhì)量180～220 g，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所動(dòng)物室提供（合格證號：SCXK（京）2007－0001）。天津中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心二級動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室條件下飼養(yǎng)。

1.2 藥物與試劑 經(jīng)前三劑止痛方（JQF）制劑由天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥制劑實(shí)驗(yàn)室制備（2100 g生藥材得浸膏干粉520 g，其出膏率為24.7%，本文所指中藥給藥均為浸膏干粉，灌胃給藥時(shí)用生理鹽水溶解）；苯甲酸雌二醇注射液，天津金耀氨基酸有限公司生產(chǎn)，批號0701041；縮宮素注射液，蚌埠市宏業(yè)生化制藥廠生產(chǎn)，批號070310；阿司匹林片，廣東百澳藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號20070501；大鼠前列腺素 F2α（PGF2α）酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）試劑盒，購自上海西唐生物科技有限公司。6-酮-前列腺素1α（6-keto-PGF1α）、血栓素B2（TXB2）放免藥盒和雌激素（E2）、孕激素（P）試劑盒，天津市南開醫(yī)院同位素室提供。前列腺素E2（PGE2）放免試劑盒盒，購自北京總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所。

1.3 儀器 DL28R冷凍離心機(jī)(上海離心機(jī)械研究所）；FlexStation3多功能微孔分析儀（美國Molecular Devices）；XH6020r免疫計(jì)數(shù)器（西安262廠）。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 模型復(fù)制與分組給藥 采用注射雌二醇和催產(chǎn)素的方法復(fù)制大鼠痛經(jīng)模型，連續(xù)10 d給大鼠皮下注射雌二醇[第1、10天皮下注給0.5 mg/（只·d），余日均為0.2 mg/（只·d）]，間隔40 h后，腹腔注射催產(chǎn)素2 U/只。將30只大鼠分為正常對照組、模型組、JQF高劑量組、JQF低劑量組、阿司匹林對照組，每組各6只。JQF低劑量組、JQF高劑量組每天每只大鼠分別灌胃給予JQF浸膏干粉2 kg/L，阿司匹林對照組每天每只大鼠灌胃給予阿司匹林片5 g/L，正常對照組、模型組每天灌胃等體積生理鹽水，各組均連續(xù)灌胃10 d。

2.2 子宮組織 PGF2α、PGE2、TXB2、6-keto-PGF1α含量測定 復(fù)制大鼠痛經(jīng)模型并給予藥物干預(yù)后，取各組動(dòng)物同側(cè)同位段新鮮子宮0.25 g，用生理鹽水沖洗1～2次，置微型勻漿器中勻漿，勻漿物加入子宮重 10 倍量的無水乙醇：氯化鉀溶液（1∶9），3500r/min離心20 min，取上清液,用ELISA法測定PGF2α；放免法測定 PGE2、6-keto-PGF1α、TXB2含量。

2.3 JQF對模型大鼠子宮組織雌激素、孕激素水平的影響 取子宮勻漿物上清液，放免法測定E2、P含量。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用單因素方差分析，方差齊時(shí)組間兩兩比較樣用LSD方法，方差不齊時(shí)組間兩兩比較用Dunnett T3法。P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 JQF對痛經(jīng)模型大鼠子宮組織PGF2α、PGE2含量及比值變化的影響 子宮內(nèi)膜合成和釋放前列腺素增加，是原發(fā)性痛經(jīng)的重要原因，本研究檢測了JQF對痛經(jīng)模型大鼠子宮中前列腺素的影響。結(jié)果表明，模型組大鼠子宮組織PGF2α含量明顯高于正常對照組。與模型組比較，阿司匹林陽性對照組子宮組織PGF2α含量可明顯降低，JQF不同劑量均可不同程度的降低子宮組織 PGF2α水平（P＜0.05 或 P＜0.01），其中JQF高劑量組與正常對照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；模型組大鼠子宮組織中PGE2含量與正常對照組比較明顯降低（P<0.01）；與模型組比較，大鼠子宮組織中PGE2含量JQF高劑量組、阿司匹林陽性對照組均明顯升高（P＜0.05），結(jié)果見表 1。

表1 各組動(dòng)物子宮組織中PGF2α、PGE2含量比較(±s)Tab.1 Comparison of PGF2α and PGE2 in the rats of each group(±s)μg/L

表1 各組動(dòng)物子宮組織中PGF2α、PGE2含量比較(±s)Tab.1 Comparison of PGF2α and PGE2 in the rats of each group(±s)μg/L

注：與正常對照組比較，**P<0.01；與模型組比較，##P<0.01。

組別正常對照組模型對照組JQF低劑量組JQF高劑量組阿司匹林組n66666 PGF2α 209.65±77.51802.79±153.69**505.65±98.02##221.42±140.67##488.78±134.22##PGE2 801.12±111.32594.88±137.15**619.65±187.78810.35±208.62#875.62±244.11#PGF2α/PGE2 0.27±0.111.50±0.56**0.99±0.390.27±0.16##0.59±0.12##

3.2 JQF對痛經(jīng)模型大鼠子宮TXB2、6-keto-PGF1α含量及比值變化的影響 本研究考察了JQF對痛經(jīng)模型大鼠子宮6-keto-PGF1α、TXB2含量的影響。結(jié)果表明，模型組與對照組比較，TXB2顯著升高（P<0.05），結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與模型組比較，用藥各組TXB2水平顯著降低（P<0.01或P<0.05）、6-keto-PGF1α水平 JQF 高劑量組升高 （P＜0.05），JQF低劑量組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。用藥各組T/K比值較模型組高劑量組顯著降低（P＜0.01）、西藥組有所降低（P＜0.05）。見表 2。

表2 各組動(dòng)物子宮組織中TXB2、6-keto-PGF1α含量比較±s)Tab.2 Comparison of TXB2 and 6-keto-PGF1α in the rats of each group(±s)μg/L

表2 各組動(dòng)物子宮組織中TXB2、6-keto-PGF1α含量比較±s)Tab.2 Comparison of TXB2 and 6-keto-PGF1α in the rats of each group(±s)μg/L

注：與正常對照組比較，*P<0.05,**P<0.01；與模型組比較，#P<0.05,##P<0.01。

組別正常對照組模型對照組JQF低劑量組JQF高劑量組阿司匹林組n66666 TXB2 542.73±53.01722.42±90.54*582.63±64.11#520.87±66.27#398.18±25.38##6-keto-PGF1α 914.81±100.641023.63±75.551018.74±59.791288.60±207.00#779.40±65.30##TXB2/6-keto-PGF1α 0.55±0.080.67±0.090.57±0.050.40±0.08##0.52±0.04#

3.3 JQF對痛經(jīng)模型大鼠子宮雌激素、孕激素水平的影響 本研究考察了JQF對痛經(jīng)模型大鼠子宮勻漿組織雌激素和孕激素含量的影響。結(jié)果表明，與對照組比較，模型組雌激素水平顯著升高（P<0.01），孕激素水平降低（P<0.05），結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與模型組比較，西藥組雌激素水平降低（P<0.05），孕激素水平升高（P<0.05）。JQF低劑量組、JQF高劑量組均可顯著降低模型大鼠雌激素水平（P<0.01），JQF高劑量組可升高模型大鼠孕激素水平（P<0.05）。結(jié)果見表3。

表3 JQF對痛經(jīng)模型大鼠子宮雌激素、孕激素水平的影響(±s)Tab.3 The effects of JQF on estrin and progestogen in the rats with dysmenorrhea μg/L

表3 JQF對痛經(jīng)模型大鼠子宮雌激素、孕激素水平的影響(±s)Tab.3 The effects of JQF on estrin and progestogen in the rats with dysmenorrhea μg/L

注：與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較 ＃P＜0.05，＃＃P＜0.01。

組別正常對照組模型對照組JQF低劑量組JQF高劑量組阿司匹林組n66666 E2P 19.07±3.3238.75±10.57**25.82±3.23##23.63±3.09##25.72±4.70#20.69±4.8710.44±5.37*15.54±9.1420.11±7.52#21.59±8.78#

4 討論

女性內(nèi)分泌失調(diào)引起的痛經(jīng)是當(dāng)今世界醫(yī)學(xué)尚未攻克的難題之一。據(jù)英國一家醫(yī)學(xué)權(quán)威機(jī)構(gòu)調(diào)查報(bào)告指出，全球女性中80%有不同程度的痛經(jīng)。JQF為自擬方，方中以當(dāng)歸、川芎、赤芍、益母草為主要組成，是臨床治療原發(fā)性痛經(jīng)的有效方藥，只需月經(jīng)前使用3 d，本次月經(jīng)無疼痛，連續(xù)使用3個(gè)月即可停藥，均獲滿意療效，因此，有必要對其藥效機(jī)制進(jìn)行深入探討。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)普遍認(rèn)為，原發(fā)性痛經(jīng)發(fā)生的主要原因是由于神經(jīng)內(nèi)分泌失調(diào)引起的子宮張力增加和過度痙攣性收縮，激素水平失調(diào)、催產(chǎn)素、加壓素以及某些自主神經(jīng)系統(tǒng)遞質(zhì)如內(nèi)皮素等與痛經(jīng)的發(fā)病直接相關(guān)[1-2]。

大量研究表明，痛經(jīng)患者血中 PGF2α含量及PGF2α/PGE2比值增高是造成痛經(jīng)的直接原因[3-4]，降低PGF2α水平可在一定程度上緩解疼痛。子宮內(nèi)膜細(xì)胞是合成PGs的功能細(xì)胞和靶細(xì)胞[5]，在激素和某些介質(zhì)的特定作用下，產(chǎn)生各種不同的前列腺素物質(zhì)，調(diào)節(jié)子宮肌細(xì)胞的收縮和舒張。子宮合成和釋放前列腺素的增加是原發(fā)性痛經(jīng)的重要原因，尤其是PGF2α增高，PGF2下降時(shí)會導(dǎo)致兩者比值過度升高。PGF2α作用于螺旋小動(dòng)脈壁上的PGF2α受體，引起子宮過度收縮，子宮血流不足，子宮肌肉組織缺血，刺激子宮自主神經(jīng)疼痛纖維而發(fā)生痛經(jīng)。本研究結(jié)果表明，JQF均可顯著降低實(shí)驗(yàn)性大鼠子宮組織的PGF2α的含量以及PGF2α/PGE2比值，可能是其治療痛經(jīng)作用的重要機(jī)制之一。

正常情況下，血栓素（TXA2）、前列腺環(huán)素（PGI2），TXA2/PGI2處于平衡狀態(tài)，維持適當(dāng)?shù)难軓埩把“鍍?nèi)環(huán)境穩(wěn)定，TXA2/PGI2失衡將引起血小板與血管壁相互作用即痛經(jīng)患者存在異常激活的高凝狀態(tài)，引發(fā)血管痙攣、血栓形成、缺血等,導(dǎo)致痛經(jīng)的發(fā)生和加重[6]。由于TXA2、PGI2在體內(nèi)極不穩(wěn)定，短時(shí)間內(nèi)水解成穩(wěn)定的TXB2和6-Keto-PGF1α，所以檢測TXB2、6-Keto-PGF1α的含量即可反映TXA2、PGI2的水平。本研究結(jié)果表明，JQF可顯著降低痛經(jīng)大鼠子宮組織的TXB2和升高6-Keto-PGF1α含量，調(diào)節(jié)兩者的比例，使其達(dá)到適宜的有效濃度，以抑制血小板聚集和血栓形成，改善子宮微循環(huán)，恢復(fù)子宮平滑肌的正常舒縮狀態(tài)，是治療痛經(jīng)病證的有效方劑。

參與調(diào)節(jié)月經(jīng)的卵巢激素主要是雌激素和孕激素，卵巢激素的不平衡可影響前列腺素合成與釋放，PGF2α可刺激子宮平滑肌收縮，PGE能抑制子宮收縮。E2水平升高，可以刺激PGF2α的合成、釋放，從而使子宮血管收縮，子宮缺血而發(fā)生痛經(jīng)。高孕酮水平可抑制產(chǎn)生PGF2α則不使發(fā)生痛經(jīng)。JQF能夠降低大鼠子宮中E2的水平，提高P的水平，起到抑制子宮平滑肌過度收縮的作用；從生理學(xué)角度看，β-EP（內(nèi)源性阿片肽）具有內(nèi)源性鎮(zhèn)痛作用，子宮是β-EP的靶器官。β-EP受性激素制約，孕酮能顯著提高β-EP的分泌，而雌二醇卻抑制孕酮對β-EP的作用，JQF能夠降低大鼠子宮中E2的含量，增加P的含量，從而可能提高β-EP的分泌，起到治療痛經(jīng)的作用；血液中血管加壓素水平的增高是原發(fā)性痛經(jīng)發(fā)生的重要因素[7]，雌激素能刺激垂體后葉釋放血管加壓素，此作用可被孕激素抵消。原發(fā)性痛經(jīng)婦女晚黃體期雌激素水平異常升高，在月經(jīng)期第1天血管加壓素水平高于正常人2～5倍，造成子宮過度收縮及缺血。JQF能夠降低大鼠子宮中E2的含量，增加P的含量，可能降低血管加壓素水平，緩解子宮過度收縮及缺血起到治療痛經(jīng)的作用；青春期痛經(jīng)多發(fā)，與體內(nèi)雌激素/孕激素的比值升高有關(guān)，體內(nèi)雌激素過多或相對過多，致使體內(nèi)水鈉潴留，局部出現(xiàn)水腫也是痛經(jīng)發(fā)生的原因之一。

綜上所述，JQF抗痛經(jīng)作用并非是某方面單一作用的結(jié)果，而是多方面共同作用的綜合效應(yīng)。抑制子宮 PGF2α的產(chǎn)生，降低 PGF2α/PGE2比值，穩(wěn)定實(shí)驗(yàn)性大鼠子宮組織TXB2/6-Keto-PGF1α比值，緩解縮宮反應(yīng)以及對大鼠體內(nèi)性激素（E2、P）的調(diào)節(jié)等均為JQF治療痛經(jīng)的藥理學(xué)基礎(chǔ)。

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