李學(xué)臣,張 濤,魏曉東

(佳木斯大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生物化學(xué)教研室,黑龍江 佳木斯 154007)

三棱是抗癌特效藥莪棱蛇草系列中主要成分之一[1],三棱具有抑制腫瘤的功能[2],在抗癌中藥的配方中起著非常重要的作用。藥理學(xué)的作用主要表現(xiàn)為增強(qiáng)機(jī)體免疫力,改善血液循環(huán),抑制癌細(xì)胞,使其不易在血液中停留、聚集,改善癥狀,緩解病情。但三棱對(duì) H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及抑制機(jī)制未見(jiàn)報(bào)道,我們用三棱的水提物作用于 H22荷瘤小鼠;通過(guò)疫器官重量法檢測(cè)胸腺指數(shù) /脾臟指數(shù);免疫組織化學(xué)方法測(cè)定血漿中細(xì)胞因子 IL-2和 TN F-α的水平,研究三棱對(duì) H22的荷瘤小鼠免疫調(diào)節(jié)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健 康 6～ 8周齡 昆明 系小鼠 40只 ,體重 18～ 22g,雌雄各半。佳木斯大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。

1.2 瘤細(xì)胞株

H22腹水瘤模型鼠購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所。

1.3 藥物及主要試劑

中藥三棱購(gòu)于佳木斯大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥店,經(jīng)鑒定為三棱的干燥根莖;5-Fu購(gòu)于佳木斯大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥店,由上海旭東海普藥業(yè)有限公司生產(chǎn);腫瘤壞死因子和白細(xì)胞介素-2放免藥盒購(gòu)于北京福瑞生物工程公司。

1.4 三棱水提物的制備

三棱粉碎后加適量水,浸泡3h,煮沸提取 60min,收集藥液,藥渣再用水煮30min,合并2次藥液,經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀50℃減壓回收得三棱水提物,真空干燥箱55℃干燥,得三棱水粗提物固體干粉。臨用前蒸餾水稀釋為含生藥濃度：小劑量組3.9g/mL,大劑量組 7.8g/mL;5-Fu 2.5mg/mL。

1.5 H22荷瘤小鼠模型的建立

無(wú)菌操作腹腔穿刺抽取 H22腹水瘤模型鼠腹水,加入適量生理鹽水 ,配成細(xì)胞懸液,細(xì)胞計(jì)數(shù)及測(cè)定細(xì)胞活力,活細(xì)胞率達(dá)95%。調(diào)整細(xì)胞密度為2×107/mL備用。用 75%乙醇對(duì)小鼠右腋下進(jìn)行消毒,每只小鼠右腋下皮下注入0.2mL(含癌細(xì)胞4×106個(gè))H22腹水瘤細(xì)胞懸液成荷瘤小鼠模型。

1.6 分組和給藥

將 40只小鼠稱重、編號(hào)隨機(jī)分為 A、B、C、D 4組,每組各10只。A組為正常對(duì)照組;B組為5-Fu對(duì)照組;C、D組為荷瘤三棱水提高劑量組和低劑量組;于24h內(nèi)開(kāi)始給藥,隔日稱量體重,按體重給藥,計(jì)量為：A組：生理鹽水0.2mL/10g/d一次灌胃;B組 5-Fu0.2mL/10g/d一次腹腔注射組;C、D組分別給三棱水提液 0.2mL/20g/d和0.1mL/20g/d一次灌胃,連續(xù)10d,停藥后第2天小鼠摘眼球取血后,斷髓處死,剝離瘤體,取出胸腺、脾臟稱重。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 三棱水提物對(duì) H22的實(shí)體瘤小鼠的抑瘤作用

見(jiàn)表 1。由表1可見(jiàn) ,各給藥組腫瘤重量明顯降低,與對(duì)照組比較均有差異 (P＜0.05),結(jié)果表明三棱水提物有抑制腫瘤生長(zhǎng)作用,且抑瘤率有隨藥物劑量增高而升高的趨勢(shì)。

2.2 三棱水提物對(duì) H22荷瘤小鼠胸腺(脾)重量指數(shù)的影響

見(jiàn)表 1。由表1可見(jiàn) ,各給藥組脾腺指數(shù)和胸腺重量指數(shù)明顯降低。

2.3 三棱水提物對(duì) H22荷瘤小鼠血清 IL-2和 TN F-α含量的影響

見(jiàn)表 1。結(jié)果血清 IL-2和 TN F-α水平隨用三棱劑量的增高而升高,各給藥組與對(duì)照組比較均有差異(P＜0.05),表明三棱水提物可以提高 H22荷瘤小鼠血清IL-2和 TN F-α水平。

表1 三棱水提物對(duì) H22荷瘤小鼠的抑瘤率、胸腺(脾)重量指數(shù)和血清 IL-2和 TNF-α含量的影響(±s,n=10)

表1 三棱水提物對(duì) H22荷瘤小鼠的抑瘤率、胸腺(脾)重量指數(shù)和血清 IL-2和 TNF-α含量的影響(±s,n=10)

與對(duì)照組比較* P＜0.05,**P＜0.05。

組別 瘤重(g)抑瘤率(%)胸腺指數(shù) (mg/10g)脾腺指數(shù) (mg/10g)IL-2(ng/mL)TN F-α(ng/mL)對(duì)照組 2.36±0.42 - 21.96±2.77 96.33±12.56 5.89±1.16 1.26±0.24小劑量組 1.49±0.25* 36.83* 19.37±1.96* 67.83±10.91* 7.66±1.50* 1.61±0.32*大劑量組 1.43±0.19** 39.27** 12.51±1.23** 51.39±9.07** 9.54±1.83** 2.17±0.41**5-Fu組 1.31±0.14** 43.21** 6.20±0.85** 40.20±6.49** 10.74±1.79** 2.51±0.37**

3 討論

中藥三棱的化學(xué)成分復(fù)雜,藥理作用和臨床應(yīng)用廣泛。目前對(duì)三棱抗腫瘤作用的報(bào)道均局限于人肝癌細(xì)胞的體外研究方面,在體內(nèi)的抗肝癌作用及機(jī)制未見(jiàn)報(bào)道,本文通過(guò)免疫機(jī)制研究三棱水提物對(duì) H22肝癌荷瘤小鼠模型癌細(xì)胞的抑制作用。證明三棱的水提物能夠提高血清中 TNF-a、IL-2水平 ,增強(qiáng)荷瘤鼠的免疫能力,從而發(fā)揮抗腫瘤作用,抑制腫瘤生長(zhǎng),抑瘤率隨藥物濃度的提高而提高。鑒于中藥三棱能夠明顯提高 H22荷瘤小鼠的免疫能力抑制腫瘤增長(zhǎng),且毒性低,副作用小,因此三棱可作為抗肝癌的備選藥。今后我們還將從誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抗氧化作用等方面對(duì)三棱的抗腫瘤作用進(jìn)一步研究,為今后三棱的研究和開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

[1]王吉吉,張瑾峰,付桂芳.莪術(shù)、三棱對(duì)人肺癌細(xì)胞凋亡的影響 [J].首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2001,22(4)：304-305

[2]李士怡,周一荻.莪術(shù)三棱白花蛇舌草對(duì)腫瘤細(xì)胞抑制作用的研究 [J].實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志,2006,20(3)：246-247