張勝輝，王軼靈，王明松，曹 佳，費 苛，校宏兵

（同濟大學附屬上海市第十人民醫(yī)院：1.胸心外科；2.普外科 200072）

目前肺癌被認為是世界上最常見的惡性腫瘤之一，通常的治療方式有手術(shù)、化療、放療、中醫(yī)中藥輔助治療等，然而肺癌患者的預后往往較差。隨著分子生物學的發(fā)展和人類基因組學的重大突破，人們已注意到腫瘤組織細胞某些基因結(jié)構(gòu)的改變、表達的改變以及蛋白功能的改變是影響其生物學活性的最根本因素。血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）作為一種高度特異和高效的血管調(diào)控因子，目前已在多種腫瘤組織中被證實呈高表達，并被證實與腫瘤的生長密切相關(guān)［1］。為此作者應用免疫組化技術(shù)對78例肺癌組織中VEGF表達進行檢測，探討其表達水平與增殖細胞核抗原（PCNA）、p53表達、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和患者預后的關(guān)系。

1 臨床資料

1.1一般資料 選取2001年1月至2004年12月在本院確診為原發(fā)性肺癌進行手術(shù)切除并得到隨訪的78例患者。其中男56例，女22例；年齡45～71歲，平均58歲。鱗癌24例，腺癌38例，大細胞癌11例，腺鱗癌5例。按1997年UICC的肺癌TNM分期，78例患者術(shù)后病理分期為Ⅰ期18例，Ⅱa期及Ⅱb期27例，Ⅲa期33例。患者術(shù)后均行GP化療方案化療4個療程，并隨訪5年。

1.2試劑 鼠抗人VEGF、p53、PCNA單抗和相應的二抗、三抗均為丹麥DAKO公司產(chǎn)品，一抗按1∶100稀釋。免疫組化染色采用鏈霉卵白素－辣根過氧化酶法。

1.3實驗方法 腫瘤組織常規(guī)用10%甲醛固定，石蠟包埋，切片厚5μm。以PBS代替一抗作陰性對照，以已知陽性肺癌組織為陽性對照。觀察5個視野（×400），計算細胞陽性率。陽性細胞數(shù)小于10%為陰性，陽性細胞數(shù)大于或等于10%為陽性。其中陽性細胞數(shù)小于50%為低表達，≥50%為高表達。全部病例隨訪5年，統(tǒng)計生存期。

1.4統(tǒng)計學方法 兩樣本率比較用χ2檢驗。VEGF和PCNA、p53表達作等級相關(guān)分析。用Cox模型作多因素分析。生存期用時序檢驗。

2 結(jié) 果

2.1VEGF、PCNA和p53表達 VEGF陽性信號為棕黃色，定位于細胞質(zhì)（插頁Ⅱ圖1、2）。78例肺癌中VEGF總表達陽性率為94.87%（74/78），VEGF高表達者為48.72%（38/78）、低表達者為51.28%（40/78）。不同組織學類型肺癌組織中VEGF表達陽性率比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。PCNA和p53陽性反應于細胞核內(nèi)，為紅棕色顆粒。78例肺癌組織中p53表達陽性率為44.87%（35/78），PCNA表達陽性率為96.15%（75/78）。

圖1 PVL組與SO組腸系膜組織學改變（HE染色，×100）

圖2 PVL組與SO組VEGF免疫組化染色（×400）

2.2VEGF表達與PCNA和p53的關(guān)系 VEGF表達陽性肺癌組織中98.65%PCNA陽性（73/74），VEGF表達陰性肺癌組織中50.00%PCNA陽性（2/4），兩組比較，差異有統(tǒng)計學意義（χ2＝24.955，P＜0.005）。VEGF高表達肺癌組織中p53表達陽性率為47.37%（18/38），VEGF低表達肺癌組織中p53表達陽性率為42.50%（17/40），兩組比較，差異無統(tǒng)計學意義。等級相關(guān)分析顯示，VEGF表達水平與PCNA呈明顯正相關(guān)（rs＝0.568，P＜0.001），與p53表達零相關(guān)（rs＝0.217，P＞0.05）。

2.3VEGF表達與腫瘤TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系 在78例患者中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移53例，其中VEGF高表達32例，占60.38%（32/53）；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移25例，其中高表達6例，占24.00%（6/25），差異有統(tǒng)計學意義（χ2＝8.997，P＜0.005）。T1＋T2共32例，其中 VEGF高表達10例，占31.25%（10/32）；T346例，高表達28例，占60.87%（28/46），差異有統(tǒng)計學意義（χ2＝6.627，P＜0.05）。表明 VEGF與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤體積密切相關(guān)。隨肺癌組織VEGF表達增加，肺癌瘤體的體積明顯增大，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯增多。

2.4VEGF表達與肺癌患者生存率的關(guān)系 本組78例患者5年生存率為20.5%，VEGF高表達38例中5年生存率為5.3%；VEGF低表達40例中5年生存率為35.0%。VEGF高表達患者生存率比低表達者明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（χ2＝10.569，P＜0.005）。

2.5Cox回歸分析 對患者性別、年齡、瘤體大?。ā?cm、＞3cm）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（N0、N1、N2）、TNM 分期（1997年 UICC分期法）、PCNA和VEGF表達的Cox比例風險模型分析（后退法），VEGF和PCNA可作為獨立判斷患者預后的指標。

3 討 論

本研究結(jié)果顯示，肺癌組織中VEGF表達總陽性率為94.87%，其中高表達者占48.72%；VEGF表達水平與PCNA表達呈明顯正相關(guān)，提示VEGF可能作為肺癌的一種“自分泌”生長因子直接促進腫瘤細胞的增殖。

生存期隨訪結(jié)果表明，VEGF低表達的肺癌患者總生存期明顯優(yōu)于VEGF高表達患者；VEGF表達水平越高，患者預后越差。VEGF的過度表達提示肺癌患者的預后較差［2－3］。因此VEGF表達水平可作為評判肺癌預后的指標之一。目前有研究表明，肺癌患者外周血清中VEGF表達水平明顯高于正?；颊?，因此外周血清VEGF表達水平有助于判斷肺癌患者預后［4］。有研究表明，不僅VEGF過度表達與肺癌預后密切相關(guān)，VEGF受體也對肺癌預后起重要作用［5－6］，說明 VEGF在促進腫瘤血管生成和PCNA時可能還存在“外分泌”等其他調(diào)控機制，提示VEGF可能成為肺癌治療的新的生物靶點［7］。

本研究結(jié)果亦證實，VEGF高表達患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯增加。有研究表明，在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的癌組織中VEGF表達水平明顯高于原發(fā)灶；在對肺癌組織切片進行免疫組化染色時也見VEGF的表達在整個病灶并不均一［8］。提示在肺癌組織中可能存在VEGF表達水平不同的細胞亞群，VEGF表達水平高的細胞亞群具有更大的侵襲力和轉(zhuǎn)移傾向，可以發(fā)生選擇性轉(zhuǎn)移，使得淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶更多是由VEGF表達水平高的癌細胞構(gòu)成，因此轉(zhuǎn)移灶中VEGF表達水平比原發(fā)灶高。此外VEGF促進腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移還可能存在著不依賴于腫瘤血管形成的其他機制［9］。

總之，本研究結(jié)果顯示，VEGF能促進肺癌生長和轉(zhuǎn)移，VEGF表達水平可以作為判斷肺癌預后指標之一。

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