王 新，崔一喆，黃寶明

（黑龍江省八一農(nóng)墾大學動物科技學院，黑龍江 大慶 163319）

抗生素后效應（PAE）是指細菌與抗生素短暫接觸，當藥物清除或藥物濃度低于最小抑菌濃度時細菌生長仍受到持續(xù)抑制的效應。在獸醫(yī)領域中，對抗菌藥物PAE的研究較少，尤其是安普霉素對金黃色葡萄球菌PAE的研究少見報道。因此，開展此項研究可以為獸醫(yī)臨床上更加合理地應用安普霉素、有效控制疾病提供參考。

1 試驗材料

1.1 試驗藥品 安普霉素標準品（K0230811），購于中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所；阿莫西林標準品（130409）與氨芐西林標準品（130410），均購于中國藥品生物制品檢定所。

1.2 試驗菌株 金黃色葡萄球菌（ATCC25923），購于中國藥品生物制品檢定所。

2 試驗方法

2.1 菌種的活化與計數(shù) 取凍干標準菌株，接種于營養(yǎng)肉湯中，37℃孵育18h后，進行平板劃線，觀察菌落形態(tài)。挑取2～4個單菌落接種于2mL營養(yǎng)肉湯中，37℃培養(yǎng)過夜。用營養(yǎng)瓊脂平板進行菌落計數(shù)后，將菌液稀釋至濁度為1×108CFU·mL-1，4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 藥物溶液的制備 精確稱取各種藥物，用無菌蒸餾水配制成濃度為1280μg·mL-1的藥液100mL，均為使用前配制。

2.3 藥物體外抗菌活性測定 采用試管二倍稀釋法和平板菌落計數(shù)法，分別測定安普霉素、阿莫西林和氨芐西林對濁度為1×105CFU·mL-1金黃色葡萄球菌的最小抑制濃度（MIC）和最小殺菌濃度（MBC），試驗重復3次。

2.4 體外PAE的測定

2.4.1 藥物單獨應用PAE的誘導 用已滅菌的營養(yǎng)肉湯分別將受試藥物配成濃度為20×MIC、40×MIC和80×MIC的藥液。取各濃度的藥液0.5mL分別加入含4.0mL營養(yǎng)肉湯的試管中，每管再加入0.5mL濁度為1×108CFU·mL-1的菌液，使混合藥物最終濃度分別為2×MIC、4×MIC 和 8×MIC，此為試驗管（T）；同時設 C1、C2兩只對照管，均由4.5mL營養(yǎng)肉湯與0.5mL菌液混合，其中C2作為抗菌藥持續(xù)作用的對照，各管旋渦混勻后，放入37℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)1h。

2.4.2 藥物聯(lián)合應用PAE的誘導 藥物聯(lián)用時按簡易棋盤法混合，將同濃度的安普霉素0.5mL與阿莫西林或氨芐西林0.5mL加入含3.5mL營養(yǎng)肉湯的試管中，再加入0.5mL濁度為108CFU·mL-1的菌液，其他程序同2.4.1。

2.4.3 藥物的去除及重建 采用800倍稀釋除藥法。藥物誘導1 h后，取T、C1和C2管中菌液0.1mL，分別加入含1.9mL 37℃預溫的營養(yǎng)肉湯試管中，充分混勻后再吸取0.1mL菌液，分別加入另外含3.9mL 37℃預溫的營養(yǎng)肉湯試管中重建，并在C2管的重建管中加入一定量藥物，使其中藥物濃度相當于8MIC試驗管中被800倍稀釋后的抗菌藥物濃度，以此作為殘留藥物造成PAE的對照。以上各重建管立即置37℃恒溫箱中孵育，此時為重建后的零時。

2.4.4 細菌生長動力學曲線建立 重建后0、1、2、3、4、6、8h分別取菌液0.1mL作系列稀釋，于瓊脂平板上進行菌落計數(shù)，得出CFU·mL-1值。試驗重復3次，取平均值繪制細菌重建后恢復生長的曲線，以CFU·mL-1對數(shù)值為縱坐標，以孵育時間（h）為橫坐標作圖。

2.4.5 體外PAE的計算 按公式PAE=T-C計算。其中T、C分別為試驗管與對照管細菌CFU·mL-1值高于重建后零時10倍所需要的時間（h）。

2.4.6 藥物聯(lián)用PAE的判斷標準 藥物聯(lián)用的PAE與兩種藥物單用的PAE比較，長于藥物單用之和1h以上為協(xié)同作用，與藥物單用之和接近為相加作用，與藥物單用最大值相近為無關作用，小于藥物單用最小值為拮抗作用。

3 試驗結果

3.1 藥物的體外抗菌活性 安普霉素對金黃色葡萄球菌的MIC 和 MBC 分別為 0.63μg·mL-1和 1.25μg·mL-1，阿莫西林對金黃色葡萄球菌的MIC和MBC分別為0.16μg·mL-1和 0.31μg·mL-1，氨芐西林對金黃色葡萄球菌的 MIC 和 MBC 分別為 0.63μg·mL-1和 1.25μg·mL-1。

3.2 安普霉素及其與阿莫西林或氨芐西林聯(lián)用的體外PAE 試驗結果見表1、圖1、圖2和圖3。由表1可知，安普霉素、阿莫西林及氨芐西林對金黃色葡萄球菌均具有較長的體外PAE，且隨藥物濃度的升高其體外PAE也相應地延長。安普霉素與阿莫西林或氨芐西林聯(lián)用后對金黃色葡萄球菌的體外PAE呈相加或協(xié)同作用。由圖1、圖2、圖3可見，PAE測定過程中所設的細菌對照管與殘留藥物對照管的細菌生長基本一致，說明各試驗管中細菌生長所受到的抑制是PAE造成的，而不是殘留藥物的作用，同時說明800倍稀釋基本上可以去除藥物。此外，隨著濃度的增高，藥物對細菌生長繁殖的抑制作用越強，在藥物去除后，細菌恢復正常生長所需的時間也越長。

表1 藥物單用及聯(lián)用對金黃色葡萄球菌的體外PAE h

圖1 安普霉素PAE期金黃色葡萄球菌的生長曲線

圖2 安普霉素與阿莫西林聯(lián)用PAE期金黃色葡萄球菌的生長曲線

圖3 安普霉素與氨芐西林聯(lián)用PAE期金黃色葡萄球菌的生長曲線

4 討論與小結

本試驗采用稀釋法去除抗生素，用菌落計數(shù)測定細菌生長曲線的方法，進行了安普霉素及其與阿莫西林或氨芐西林聯(lián)用對金黃色葡萄球菌體外PAE的研究。結果證實了安普霉素對金黃色葡萄球菌具有較強的抗菌活性和較長的體外PAE，且呈現(xiàn)出高度的濃度依賴性；安普霉素與阿莫西林或氨芐西林聯(lián)用對金黃色葡萄球菌的體外PAE也表現(xiàn)為相加或協(xié)同作用。因此，臨床應用安普霉素治療金黃色葡萄球菌引起的感染時，建議采用大劑量間斷給藥或與β-內(nèi)酰胺類藥物聯(lián)用的給藥方案，所獲得的治療效果會更好。

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