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        高效液相色譜法測定維生素C注射劑的含量

        2010-06-19 03:58:22胡付華
        中國民族民間醫(yī)藥 2010年4期
        關(guān)鍵詞:亞硫酸鈉純水批號

        趙 敏 胡付華

        邵陽市第一人民醫(yī)院藥劑科,湖南 邵陽 422000

        維生素C又名抗壞血酸,參與氨基酸代謝、神經(jīng)遞質(zhì)的合成、膠原蛋白和組織細(xì)胞間質(zhì)的合成,可降低毛細(xì)血管的通透性,加速血液的凝固,刺激凝血功能,促進(jìn)鐵在腸內(nèi)吸收,促使血脂下降,增加對感染的抵抗力,參與解毒功能,且有抗組胺的作用及阻止致癌物質(zhì)(亞硝胺)生成的作用,其臨床用途廣泛。維生素C還具有重要的生化作用,在醫(yī)藥、日用化工、食品、生物等領(lǐng)域有重要的應(yīng)用價值。維生素C是烯醇化合物,在水中極易氧化,見光加速分解。維生素C注射液pH值為5.5~7.0,具有極強(qiáng)的還原性,在堿性溶液中易氧化失效,氧化劑、光、熱及金屬離子能加速其失效[1]。因此,溫度過高或過低均可加快維生素C的分解,抗氧化劑、溫度25℃、pH為5.6~6.0時維生素C注射液最為穩(wěn)定[2]。

        維生素C注射劑含量的測定方法很多,各種方法各有其特點(diǎn),《中國藥典》2005年版二部采用碘量法測含量[3],此法雖然操作簡單,但因制劑中常有還原性物質(zhì)存在,對此法干擾明顯,且由于碘具有揮發(fā)性,碘離子易被空氣所氧化而使滴定產(chǎn)生誤差。常見的其他滴定法存在滴定終點(diǎn)難以準(zhǔn)確判斷,分光光度法操作費(fèi)時,而高效液相色譜法是目前發(fā)展較為迅速的一種方法,靈敏度高,選擇性好,本試驗(yàn)的目的在于尋找一個準(zhǔn)確高效的測定維生素C含量的方法。

        1 儀器與試劑

        1.1 儀器:美國Waters 公司的高效液相色譜儀(包括600泵、2996可變波長紫外檢測器),奧立龍868型pH酸堿計(jì)上海熱電儀器有限公司。

        1.2 試劑:維生素C對照品:中國藥品生物制品檢定所,批號:2139C,規(guī)格:100mg/瓶;維生素C注射液:山東新華制藥股份有限公司,批號:0807122,規(guī)格:5mL(1.0g)/支;5%葡萄糖注射液:上海百特醫(yī)療用品有限公司,批號:GS0809048,規(guī)格:250mL/袋;焦亞硫酸鈉(Na2S2O5):分析純,上海試四赫維化工有限公司,批號:060512,含量比重≥96.0%;其余試劑均為分析純。

        2 方法與結(jié)果

        2.1 色譜條件:色譜柱:Xterra RP C18(150mm×4.6mm,5μm),以0.01mol·L-1(pH為3.5)的磷酸二氫鈉水溶液為流動相,柱溫為25℃,系統(tǒng)流速為0.6mL·min-1,檢測波長為265nm。色譜圖見圖1。

        2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:準(zhǔn)確稱取維生素C對照品10.0mg,0.02mol·L-1焦亞硫酸鈉溶液溶解并定容到25mL的容量瓶中[2],搖勻,得貯備液,并予避光保存。

        準(zhǔn)確量取維生素C貯備液6mL和純水4mL,得對照品A液;取A液5mL和1mL純水,得對照品B液;取B液4mL和1mL純水,得對照品C液;取A液2mL和2mL純水,得對照品D液;取B液1mL和1mL純水,得對照品E液,從而得5個高中低不同濃度的對照品溶液。取20μL進(jìn)樣測定。按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣,測定對照品的峰面積,以濃度(X)為橫坐標(biāo),峰面積(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,進(jìn)行線性回歸,求得維生素C的回歸方程為:

        圖1 維生素C高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatogram of vitamin C

        維生素C:Y=8.95×103X+7.36×105(r=0.9992,n=5);

        結(jié)果,維生素C在50~120μg·mL-1濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

        2.3 精密度試驗(yàn):按“2.1”項(xiàng)下色譜條件,取“2.2”項(xiàng)下對照品溶液,低(維生素C濃度為60μg·mL-1)、中(維生素C濃度為80μg·mL-1)、高(維生素C濃度為100μg·mL-1)系列濃度分別重復(fù)進(jìn)樣3次,于第1d、3d、5d分別考察其日內(nèi)及日間精密度,測定峰面積。結(jié)果維生素C的日內(nèi)RSD%為0.87%,其日間RSD%為1.03%。

        2.4 回收率試驗(yàn):分別取低(維生素C濃度為80μg·mL-1)、中(維生素C濃度為100μg·mL-1)、高(維生素C濃度為120μg·mL-1)系列濃度的對照品溶液0.5mL(每個濃度取3份),分別準(zhǔn)確加入維生素含量為100μg.mL-1的樣品溶液0.5mL中,搖勻,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定,計(jì)算加樣回收率。結(jié)果,維生素C的加樣回收率為100.36%。

        2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn):將“2.2”項(xiàng)下100μg·mL-1維生素C溶液20μL,分別以0、1、2、4、6、8h進(jìn)樣,記錄色譜圖,峰面積RSD為0.68%,結(jié)果表明,供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

        2.6 重復(fù)性試驗(yàn):取批號為0807122的樣品,按含量測定方法配制6份供試品溶液,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣,記錄峰面積,其RSD為0.33%。

        2.7 樣品測定:按“2.1”項(xiàng)下色譜條件,進(jìn)樣3個不同批次的樣品含量,結(jié)果以標(biāo)示量計(jì),3批樣品批示量含量分別為:100.67%、98.37%、101.01%,均在95%~110%之間。

        3 討論

        根據(jù)維生素C的理化性質(zhì)和特點(diǎn),本實(shí)驗(yàn)考察了不同流動相的組成及不同濃度,不同PH值及溫度等對分離效果的影響。結(jié)果確定柱溫為25℃,以0.01mol·L-1(pH為3.5)磷酸二氫鈉為為流動相,流速為0.6mL·min-1。但因維生素C極易氧化,故筆者選取0.02mol·L-1的焦亞硫酸鈉水溶液稀釋配備維生素C對照品溶液維持其穩(wěn)定性。另外,維生素C對光不穩(wěn)定,在儲存中應(yīng)注意避光。

        該方法具有靈敏,準(zhǔn)確,高效的特點(diǎn),適合維生素C注射液的檢測。

        [1]陳新謙,金有豫,湯光.新編藥物學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社,2003.(15):630.

        [2]郝志耘.維生素C穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)研究[J].牡丹江醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào),1997,18(1):13-4.

        [3]國家藥典委員會編.《中國藥典》[S].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

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