趙 敏 胡付華

邵陽市第一人民醫(yī)院藥劑科，湖南 邵陽 422000

維生素C又名抗壞血酸，參與氨基酸代謝、神經(jīng)遞質(zhì)的合成、膠原蛋白和組織細胞間質(zhì)的合成，可降低毛細血管的通透性，加速血液的凝固，刺激凝血功能，促進鐵在腸內(nèi)吸收，促使血脂下降，增加對感染的抵抗力，參與解毒功能，且有抗組胺的作用及阻止致癌物質(zhì)(亞硝胺)生成的作用，其臨床用途廣泛。維生素C還具有重要的生化作用，在醫(yī)藥、日用化工、食品、生物等領(lǐng)域有重要的應(yīng)用價值。維生素C是烯醇化合物，在水中極易氧化，見光加速分解。維生素C注射液pH值為5.5～7.0，具有極強的還原性，在堿性溶液中易氧化失效，氧化劑、光、熱及金屬離子能加速其失效[1]。因此，溫度過高或過低均可加快維生素C的分解，抗氧化劑、溫度25℃、pH為5.6～6.0時維生素C注射液最為穩(wěn)定[2]。

維生素C注射劑含量的測定方法很多，各種方法各有其特點，《中國藥典》2005年版二部采用碘量法測含量[3]，此法雖然操作簡單，但因制劑中常有還原性物質(zhì)存在，對此法干擾明顯，且由于碘具有揮發(fā)性，碘離子易被空氣所氧化而使滴定產(chǎn)生誤差。常見的其他滴定法存在滴定終點難以準確判斷，分光光度法操作費時，而高效液相色譜法是目前發(fā)展較為迅速的一種方法，靈敏度高，選擇性好，本試驗的目的在于尋找一個準確高效的測定維生素C含量的方法。

1 儀器與試劑

1.1 儀器：美國Waters 公司的高效液相色譜儀（包括600泵、2996可變波長紫外檢測器），奧立龍868型pH酸堿計上海熱電儀器有限公司。

1.2 試劑：維生素C對照品：中國藥品生物制品檢定所，批號：2139C，規(guī)格：100mg/瓶；維生素C注射液：山東新華制藥股份有限公司，批號：0807122，規(guī)格：5mL(1.0g)/支；5%葡萄糖注射液：上海百特醫(yī)療用品有限公司，批號：GS0809048，規(guī)格：250mL/袋；焦亞硫酸鈉（Na2S2O5）：分析純，上海試四赫維化工有限公司，批號：060512，含量比重≥96.0%；其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：色譜柱：Xterra RP C18(150mm×4.6mm，5μm)，以0.01mol·L-1（pH為3.5）的磷酸二氫鈉水溶液為流動相，柱溫為25℃，系統(tǒng)流速為0.6mL·min-1，檢測波長為265nm。色譜圖見圖1。

2.2 標準曲線的制備：準確稱取維生素C對照品10.0mg，0.02mol·L-1焦亞硫酸鈉溶液溶解并定容到25mL的容量瓶中[2]，搖勻，得貯備液，并予避光保存。

準確量取維生素C貯備液6mL和純水4mL，得對照品A液；取A液5mL和1mL純水，得對照品B液；取B液4mL和1mL純水，得對照品C液；取A液2mL和2mL純水，得對照品D液；取B液1mL和1mL純水，得對照品E液，從而得5個高中低不同濃度的對照品溶液。取20μL進樣測定。按“2.1”項下色譜條件進樣，測定對照品的峰面積，以濃度（X）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標繪制標準曲線，進行線性回歸，求得維生素C的回歸方程為：

圖1 維生素C高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatogram of vitamin C

維生素C：Y=8.95×103X+7.36×105(r=0.9992，n=5)；

結(jié)果，維生素C在50～120μg·mL-1濃度范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3 精密度試驗：按“2.1”項下色譜條件，取“2.2”項下對照品溶液，低（維生素C濃度為60μg·mL-1）、中（維生素C濃度為80μg·mL-1）、高（維生素C濃度為100μg·mL-1）系列濃度分別重復(fù)進樣3次，于第1d、3d、5d分別考察其日內(nèi)及日間精密度，測定峰面積。結(jié)果維生素C的日內(nèi)RSD%為0.87%，其日間RSD%為1.03%。

2.4 回收率試驗：分別取低（維生素C濃度為80μg·mL-1）、中（維生素C濃度為100μg·mL-1）、高（維生素C濃度為120μg·mL-1）系列濃度的對照品溶液0.5mL（每個濃度取3份），分別準確加入維生素含量為100μg.mL-1的樣品溶液0.5mL中，搖勻，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，計算加樣回收率。結(jié)果，維生素C的加樣回收率為100.36%。

2.5 穩(wěn)定性試驗：將“2.2”項下100μg·mL-1維生素C溶液20μL，分別以0、1、2、4、6、8h進樣，記錄色譜圖，峰面積RSD為0.68%，結(jié)果表明，供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗：取批號為0807122的樣品，按含量測定方法配制6份供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣，記錄峰面積，其RSD為0.33%。

2.7 樣品測定：按“2.1”項下色譜條件，進樣3個不同批次的樣品含量，結(jié)果以標示量計，3批樣品批示量含量分別為：100.67%、98.37%、101.01%，均在95%～110%之間。

3 討論

根據(jù)維生素C的理化性質(zhì)和特點，本實驗考察了不同流動相的組成及不同濃度，不同PH值及溫度等對分離效果的影響。結(jié)果確定柱溫為25℃，以0.01mol·L-1（pH為3.5）磷酸二氫鈉為為流動相，流速為0.6mL·min-1。但因維生素C極易氧化，故筆者選取0.02mol·L-1的焦亞硫酸鈉水溶液稀釋配備維生素C對照品溶液維持其穩(wěn)定性。另外，維生素C對光不穩(wěn)定，在儲存中應(yīng)注意避光。

該方法具有靈敏，準確，高效的特點，適合維生素C注射液的檢測。

[1]陳新謙，金有豫，湯光.新編藥物學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，2003.(15)：630.

[2]郝志耘.維生素C穩(wěn)定性實驗研究[J].牡丹江醫(yī)學(xué)學(xué)報，1997，18（1）：13-4.

[3]國家藥典委員會編.《中國藥典》[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.