馬登斌 張文彥 王曉敏 馬 靜

邯鄲市中醫(yī)院，河北 邯鄲 056001

益母草為唇形科植物益母草Leonurus japonicus Houtt的新鮮或干燥地上部分。鮮品春季幼苗期至初夏花前期采割；干品夏季莖葉茂盛、花未開或初開采割，2005版中國藥典一部把益母草分為春季采摘的為鮮益母草，夏季采摘的為干益母草。具活血調(diào)經(jīng)，利尿消腫的功效。用于月經(jīng)不調(diào)，痛經(jīng)，經(jīng)閉，惡露不盡，水腫尿少；急性腎炎水腫等癥。近幾年來文獻中有關(guān)用HPLC法或ELSD-HPLC法測定益母草中鹽酸水蘇堿的報道也不少，但未發(fā)現(xiàn)針對益母草不同采摘期、不同部位中鹽酸水蘇堿含量測定的報道。本文就冀南地區(qū)紫花益母草在春、夏兩季采摘期及其不同部位中鹽酸水蘇堿含量進行比較，為我們合理用藥提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

日本島津LC2010AT液相色譜儀；ELDS-300S蒸發(fā)光散射檢測器；日本島津AUW120D電子天平；鹽酸水蘇堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110712-200306）；益母草樣品春（鮮益母草）、夏（干益母草）兩季山上采摘，除去泥土后，洗凈，曬干，按全草、莖、葉、根分類，并研成細(xì)粉。水為純化水，乙腈為色譜醇；乙醇為分析醇。

2 試驗方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)性試驗 色譜柱：采用Gentamysil RP18（5u，250×4.6mm），流動相：乙腈-水（90：10）為流動相，流速：0.8min/mL，Model 300S ELSD檢測器，漂移管溫度：70℃、氣體：空氣流速：1.2L/min，柱溫：室溫；進樣量：樣品溶液10μl、對照品溶液10μl、20μl。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱定鹽酸水蘇堿對照品0.01511g，置25ml容量瓶中，加乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備 取供試品細(xì)粉（過二號篩）約0.3g，精密稱定，置錐形瓶中，加乙醇50ml，加熱回流1.5小時，放冷，濾過，濾渣及容器用乙醇50ml分次洗滌，濾過，合并濾液，蒸干，殘渣加乙醇溶解，轉(zhuǎn)移置25ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液1ml，置10ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45um的微孔濾膜濾過。

2.4 線性關(guān)系考察 精密量取對照品溶液10ul、20ul、30ul、50ul注入液相色譜儀中進行測定，以峰面積對數(shù)值（Y）與進樣量ug對數(shù)值（X）線行回歸，得回歸方程為Y=2.5682X+2.9583；r=0.9994，鹽酸水蘇堿在6.04～30.02ug的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 穩(wěn)定性實驗 按“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別在0，1，2，5，10h測定，每次進樣10ul，測定鹽酸水蘇堿的峰面積，RSD值為0.69%。表明樣品溶液穩(wěn)定。

2.6 精密度試驗 按“2.3”項下方法制備供試品溶液，連續(xù)進樣5次，每次10ul，測定鹽酸水蘇堿的峰面積，RSD值為0.74%，表明儀器精密度良好。

2.7 加樣回收率實驗 取已知含量的益母草全草6份各約0.15g，精密稱定，分別加入對照品溶液2ml，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別取上述溶液10ul注入液相色譜儀，測得鹽酸水蘇堿的峰面積，計算峰面積的對數(shù)值，依據(jù)回歸方程，計算回收率。鹽酸水蘇堿平均回收率為98.27%，RSD值為1.83%，結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確度好。結(jié)果見表1。

2.8 樣品含量測定 取春（鮮益母草）、夏（干益母草）兩季益母草全草、根、葉、莖細(xì)粉，按上述供試品溶液制備方法制備，精密量取供試品溶液10μl，注入液相色譜儀測定，測得鹽酸水蘇堿的峰面積，計算峰面積的對數(shù)值，依據(jù)回歸方程，計算各樣品所含鹽酸水蘇堿的含量。結(jié)果見表2。

表1 回收率測定結(jié)果

表2 樣品測定結(jié)果

圖1

3 討論

3.1 益母草的有效活性成分之一是鹽酸水蘇堿，收載于2005年版《中國藥典》一部，其含量測定項下執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)為薄層掃描法，該法操作繁瑣，結(jié)果誤差偏大；筆者參考文獻采用高效液相色譜法測定鹽酸水蘇堿的含量，也非常不理想，實驗中發(fā)現(xiàn)鹽酸水蘇堿的紫外吸收峰處于末端吸收，用紫外檢測器根本就檢測不到峰，換了很多型號的柱子也是如此，考慮到蒸發(fā)光散射檢測器是通用型檢測器，不受波長、試劑的干擾，調(diào)整合理參數(shù)，實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)用該法測定，靈敏度高，峰形好，重現(xiàn)性好，測定結(jié)果準(zhǔn)確穩(wěn)定。見圖1。

3.2 藥典規(guī)定益母草的藥用部位是地上部分，通過對春（鮮益母草）、夏（干益母草）兩季、不同部位（全草、根、葉、莖）中鹽酸水蘇堿含量的測定，實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不論春、夏季的益母草葉中鹽酸水蘇堿的量都高于莖中鹽酸水蘇堿的量，春（鮮益母草）中各部位鹽酸水蘇堿的量都高于夏（干益母草）中各部位鹽酸水蘇堿的量，另外，夏（干益母草）根中幾乎不含鹽酸水蘇堿，而春（鮮益母草）根中含鹽酸水蘇堿的量卻很高，所以建議我們醫(yī)藥工作者在使用益母草時春（鮮益母草）全草都可用，夏（干益母草）用地上部分就可以，如果兩者比較的話，用春（鮮益母草）更好。

[1] 中華人民共和國藥典委員會編.中華人民共和國藥典[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：203.

[2] 馮旭等.HPLC-ELSD測定益母草中鹽酸水蘇堿的含量[J].廣西中醫(yī)藥雜志，2007，30（6）：54.

[3] 林冬杰，張會球.HPLC-ELSD測定益母草流浸膏中鹽酸水蘇堿的含量[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2009，5（2）：45.