馬育華

(臨沂市人民醫(yī)院,山東 臨沂 276003)

CEA蛋白、CEAmRNA的檢測在大腸癌、胃癌早期診斷中的應(yīng)用價值

馬育華

(臨沂市人民醫(yī)院,山東 臨沂 276003)

目的研究CEA蛋白、CEAmRNA在大腸癌、胃癌患者血清、癌組織中的表達,為大腸癌、胃癌的早期診斷提供理論依據(jù)。方法選取21例大腸腺癌、20例胃腺癌住院患者和40例胃腸道良性疾病患者,檢測其術(shù)前血清CEA蛋白表達;用免疫組織化學(xué)法和實時熒光定量RT-PCR法檢測癌組織、癌旁組織及良性胃腸道疾病組織中CEA蛋白和CEA mRNA表達。結(jié)果大腸癌、胃癌癌組織CEA蛋白及CEA mRNA的表達均高于癌旁組織及良性胃腸道疾病組織(P＜0.01,P＜0.05),胃癌組織CEA mRNA表達與血清及組織中CEA表達比較有統(tǒng)計學(xué)顯著差異(P＜0.05);大腸癌組織CEA mRNA表達與血清CEA表達比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。CEA和CEA mRNA在癌旁組織和良性胃腸道組織中表達率低。結(jié)論應(yīng)用實時熒光定量RT-PCR法檢測組織CEA mRNA在大腸癌和胃癌早期診斷中有重要價值。

大腸癌;胃癌;組織;CEA;CEA mRNA;免疫組化

大腸癌和胃癌是源于胃腸黏膜上皮細胞的惡性腫瘤,其發(fā)生與環(huán)境、遺傳、免疫尤其是飲食習(xí)慣有關(guān),且有逐年增多傾向。癌胚抗原(CEA)蛋白、CEA mRNA在腫瘤轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及判斷方面應(yīng)用廣泛,但在胃腸道腫瘤診斷方面應(yīng)用較少。2007年 10月～2008年6月,我們檢測了胃腸道腫瘤患者血清、癌及其癌旁組織中CEA蛋白及CEA mRNA的表達,以探討其在胃腸道腫瘤早期診斷中的臨床價值。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選擇大腸腺癌21例,男16例、女5例,年齡50～77歲,平均59.3歲;胃癌患者20例,男14例、女6例,年齡50～83歲,平均62.9歲;良性胃腸道疾病患者40例,男28例、女 12例,年齡 29～60歲,平均50.4歲,其中慢性淺表性胃炎8例、萎縮性胃炎10例、結(jié)腸息肉10例、潰瘍性結(jié)腸炎12例。均經(jīng)病理檢查確診,排除腫瘤性疾病。三組年齡、性別有可比性。

1.2 方法

1.2.1 血清CEA蛋白的檢測 術(shù)前采集患者肘部靜脈血3ml,3000r/min離心10min,取上層血清,應(yīng)用放射免疫檢測試劑盒(羅氏公司),放免法檢測CEA蛋白(CEA＞8ng/ml為陽性)。

1.2.2 免疫組化法檢測組織CEA蛋白 手術(shù)中或者活檢取患者癌及癌旁(距離癌組織3cm處)取胃黏膜組織和腸壁組織(直徑0.3cm),經(jīng)甲醛固定,石蠟包埋,切片,厚 4um,應(yīng)用免疫組化試劑盒(美國Zymed公司)、免疫組化法檢測組織CEA表達。顯微鏡下觀察檢測結(jié)果。

判斷標(biāo)準(zhǔn):強陽性(++):60%以上強陽性;陽性(++):30%～60%強陽性或60%以上弱陽性;弱陽性(+):10%～30%強陽性或(和)30%～60%弱陽性;陰性(-):＜10%強陽性或30%以下弱陽性。

1.2.3 實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RTPCR)法檢測組織CEA mRNA,應(yīng)用TRIZOL試劑盒(上海水源生物科技有限公司)提取總RNA,儲存于-70℃,作為RT-PCR反應(yīng)模板。上游引物5′-AGTGAGTGCAAACCGCAGTGAC-3′,下游引物 5′-T TGAGGTTCGCTCCCGAAAG-3′,片段長度 108bp。熒光探針由水源生物科技公司提供,并組成反應(yīng)試劑A(10×Buffer、dNTP、Hot Start Taq DNA 聚合酶、MgCl2、上流引物、下流引物、熒光探針溶液混合物)和試劑B(尿嘧啶DNA糖基化酶、10×Buffer)。PCR 反應(yīng)體系 :反應(yīng)試劑 A 15μ l、反應(yīng)試劑 B 12μ l、反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物(cDNA)3μ l,組成30μ l反應(yīng)體系。反應(yīng)條件:50℃1min、95℃3min各1個循環(huán);然后94℃30s、55℃30s、72℃30s,進行 40個循環(huán);最后儀器40℃10s冷卻。結(jié)果判斷:CEA mRNA陰性:拷貝數(shù)≤500/ml;陽性:108/ml＜拷貝數(shù)≤108/ml。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件。數(shù)據(jù)以±s表示,率的比較用 χ2檢驗。P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 三種患者血清CEA比較 大腸癌、胃癌、良性胃腸道疾病患者血清CEA分別為(16.8±14.1)、(13.2±8.67)、(2.26±2.13)ng/ml。見表1。

2.2 癌組織、癌旁組織、良性疾病組織CEA表達光鏡下觀察,CEA陽性物質(zhì)存在于胞質(zhì)和胞膜上,呈棕黃色顆粒,在多數(shù)組織中分布失去極性,見表1。

2.3 癌組織、癌旁組織、良性疾病組織CEA mRNA的表達 大腸癌及胃癌組織CEA mRNA為105Copy～108(106Copy)/ml;癌旁組織為 103～104(103Copy)/ml,良性胃腸道疾病為102～104(103Copy)/ml。見表1。

表1 腫瘤及良性胃腸道疾病患者血清、組織CEA和組織CEA mRNA及病理類型(例)

3 討論

CEA是一種分子量為1.8kD的糖蛋白分子,胚胎時正常分泌,出生后迅速下降,在組織癌變過程中CEA基因可重新激活表達。1965年Gold等首先在胎兒和人大腸癌中發(fā)現(xiàn)CEA[1],以后研究發(fā)現(xiàn),肺癌、乳腺癌、肝癌等患者中也有CEA表達。本研究結(jié)果顯示,大腸癌及胃癌癌組織CEA及CEAmRNA的表達均高于癌旁組織及胃腸道良性疾病。CEA mRNA在部分癌旁組織中也有較高表達。大腸癌、胃癌和良性胃腸道疾病患者血清CEA的表達無統(tǒng)計學(xué)差異。因CEA缺乏特異性和敏感性,患者血清CEA水平升高并不能完全作為惡性腫瘤早期發(fā)現(xiàn)的標(biāo)志。

研究發(fā)現(xiàn),CEA廣泛存在于上皮性腫瘤,尤其是腺癌組織中[3-6]。本研究中的大腸癌、胃癌均經(jīng)病理HE染色證實為中或低分化腺癌,多數(shù)浸潤達漿膜層。良性胃腸道疾病經(jīng)病理診斷未發(fā)現(xiàn)腫瘤,部分病例僅表現(xiàn)為不典型增生。有文獻報道,胃癌組織CEA陽性率30%～90%,而正常胃黏膜含量很少或無[3];Suwanagool等用免疫組化的方法研究了55例大腸癌患者,發(fā)現(xiàn)在CEA＞5ng/ml的35例患者中,33例腫瘤組織CEA染色陽性;在CEA＜5ng/ml的20例患者中,17例腫瘤組織CEA染色陽性[7]。本研究中大腸癌21例、CEA陽性20例,胃癌20例、CEA陽性16例,敏感性分別為95.2%(20/21)、80%(16/20),與文獻報道結(jié)果相似,提示檢測癌組織CEA的敏感性和特異性均高于血清CEA的檢測。

20 世紀(jì)80年代后期出現(xiàn)了一種全新的診斷大腸癌微轉(zhuǎn)移的方法,高靈敏度的實時熒光定量RTPCR,使得檢測循環(huán)血癌細胞和微小殘余病灶成為可能[8]。本研究應(yīng)用實時熒光定量RT-PCR法檢測大腸癌、胃癌組織的CEA mRNA,陽性率均為100%。大腸癌組織CEA mRNA陽性率與組織CEA比較無統(tǒng)計學(xué)差異,而胃癌組織CEA mRNA陽性率高于組織CEA陽性率。40例良性胃腸道疾病中有12例CEA mRNA陽性,其中6例組織CEA為陽性。癌旁組織CEA mRNA表達,明顯高于組織CEA的表達,提示癌旁組織部分細胞存在CEA mRNA表達,且這一改變出現(xiàn)在臨床病理異常之前,說明實時熒光定量RT-PCR的敏感性和特異性高于免疫組化法。本研究中CEAmRNA在大腸癌、胃癌中的表達為(105～108)copies/ml,癌旁組織中為(103～104)copies/ml,良性胃腸道疾病不典型增生中為(102～104)copies/ml。在良性胃腸道疾病無不典型增生組織CEAmRNA表達＜500copies/ml。實時熒光定量RT-PCR的檢測范圍為(2×105～2×108)copies/ml,＜500copies/ml定為陰性,這種設(shè)計可以排除假陽性的可能。因此,我們認(rèn)為應(yīng)用熒光定量 RTPCR法檢測組織CEAmRNA對于大腸癌、胃癌早期診斷具有重要的臨床價值。

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The applying value of CEA,CEA mRNAdetection in early diagnosis of colorectal cancer and gastric carcinoma

MA Yu-hua(Linyi people's hospital Shan Dong Linyi,276003China)

ObjectiveTo explore the epression of CEA,CEA mRNA in colorectal cancer,gastric carcinoma tissues,In order to provide the theory of early diagnosis of colorectal cancer and gastric carcinoma.MethodsThe serum CEA levels were estimated in 21patients with colorectal cancer,20patients with gastric carcinoma and 40patients with optimum gastrointestinal disease before being operated.And expression rates of CEA,CEA mRNA in carcinoma tissues,adjacent tissues of carcinoma and optimum gastrointestinal disease tissues were estimated by immunohistochemical method and real time fluorescent quantitative RT-PCR method.ResultsThe Expression rates of CEA and CEA mRNA in colorectal cancer and gastric carcinoma tissueswere higher than that of adjacent tissues of carcinoma and optimum gastrointestinal disease tissues(P＜0.01,P＜0.05).The Expression rates of CEA mRNA in gastric carcinoma tissues differed statisticly from which of CEA in serum(P＜0.05).And the expression rates of CEA and CEA mRNA in adjacent tissues of carcinoma and optimum gastrointestinal disease were low.ConclusionThe utilizing value of CEA mRNA detection in early diagnosis of colorectal cancer and gastric carcinoma was great.

Colorectalcancer;Gastric carcinoma;tissue;CEA;CEA mRNA/exprression

Q51;R735.3+4

A

1008-4118(2010)02-0003-03

10.3969/j.issn.1008-4118.2010.02.04

2009-12-01