谷胱甘肽(GSH)是細(xì)胞內(nèi)最豐富的低分子量巰基化合物，在人體代謝中發(fā)揮重要的作用，包括外源化學(xué)物質(zhì)解毒作用、細(xì)胞穩(wěn)態(tài)的維持、輻射防護(hù)和抗氧化等[1]；且GSH的消除與人體多種疾病密切相關(guān)，如糖尿病、艾滋病和神經(jīng)退行性疾病等[2～4]?，F(xiàn)已發(fā)展了多種GSH分析檢測方法，如酶法[5,6]、熒光測定法[7]、高效液相色譜法等。但這些方法存在靈敏度和選擇性較低、需要大型儀器及復(fù)雜耗時的柱前或柱后衍生[8～10]等缺陷；而電化學(xué)方法靈敏、簡便、快速。

作者在此研究了銅(Ⅱ)和鉻(Ⅵ)兩種金屬離子在金電極上的電化學(xué)響應(yīng)與GSH濃度的關(guān)系，由此建立了一種靈敏、簡便的GSH電化學(xué)檢測方法。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 試劑及儀器

GSH，Sigma公司；其它試劑均為分析純；實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸餾水。

CHI760c型電化學(xué)工作站，上海辰華儀器公司；Mettler-Toledo DELTA 320型pH計，Mettler-Toledo Instruments(上海)Co.,Ltd.；三電極體系：裸金電極為工作電極，鉑絲電極為對電極，飽和甘汞電極為參比電極。文中所有電位均相對于參比電極而言。

1.2 方法

在循環(huán)伏安(CV)法掃描前，溶液均通N2除氧15 min。將金電極先用Al2O3粉末拋光，再依次用Piranha溶液[V(濃H2SO4)∶V(30% H2O2)=1∶1]、丙酮水溶液[V(丙酮)∶V(水)=1∶1]、二次蒸餾水超聲振蕩清洗，放干待用。所有測定均在室溫下進(jìn)行。

1.3 GSH對銅(Ⅱ)在金電極上的電化學(xué)行為的影響

在+0.6～-0.5 V電位范圍內(nèi)，對硫酸銅濃度為2.0×10-4mol·L-1的磷酸緩沖溶液(0.1 mol·L-1,pH=5.6，NaH2PO4-Na2HPO4緩沖溶液)以100 mV·s-1的掃描速度進(jìn)行CV掃描，記錄CV曲線。再加入不同濃度的GSH溶液在同等條件下進(jìn)行CV掃描。

1.4 GSH對鉻(Ⅵ)在金電極上的電化學(xué)行為的影響

參照文獻(xiàn)[11]，分別配制0.02 mol·L-1、0.01 mol·L-1的K2Cr2O7標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確量取K2Cr2O7標(biāo)準(zhǔn)溶液0.05 mL于5 mL量瓶中，用含0.001 mol·L-1H2SO4的0.1 mol·L-1NaNO3溶液加至刻度，搖勻，倒入10 mL燒杯中通N215 min，即為2.0×10-4mol·L-1和1.0×10-4mol·L-1的鉻(Ⅵ)溶液。將鉻(Ⅵ)溶液分別在三電極體系中掃描，記錄CV曲線，電位范圍為+0.8～-0.2 V,掃描速度為200 mV·s-1。再加入不同濃度的GSH溶液在同等條件下進(jìn)行CV掃描。

2 結(jié)果與討論

2.1 GSH對銅(Ⅱ)在金電極上的電化學(xué)行為的影響(圖1)

1.2.0×10-4 mol·L-1銅(Ⅱ) 2.2.0×10-4 mol·L-1銅(Ⅱ)+1.0×10-9 mol·L-1 GSH

由圖1可以看出，2.0×10-4mol·L-1銅(Ⅱ)在約0.28 V處出現(xiàn)了一個還原峰，當(dāng)加入GSH溶液后，峰電流下降,見表1。

表1 不同濃度GSH對銅(Ⅱ)在金電極上峰電流的抑制

銅(Ⅱ)峰電流與1.0×10-8～8.0×10-8mol·L-1范圍內(nèi)的GSH濃度呈線性相關(guān),見圖2。

圖2 GSH濃度與2.0×10-4 mol·L-1銅(Ⅱ)在金電極上的還原峰電流的線性關(guān)系圖

其線性回歸方程為y=-0.1321x+3.4262，R=0.9822，檢測限為1.0×10-9mol·L-1。

隨掃描速度(10 mV·s-1、20 mV·s-1、50 mV·s-1、100 mV·s-1、200 mV·s-1)的加快，2.0×10-4mol·L-1銅(Ⅱ)+7.0×10-4mol·L-1GSH溶液還原峰電流呈線性增加(圖3)。表明銅(Ⅱ)在GSH存在下的電化學(xué)行為是一個受吸附控制的過程。

圖3 2.0×10-4 mol·L-1銅(Ⅱ)+7.0×10-4 mol·L-1 GSH溶液在金電極上的還原峰電流與掃描速度的線性關(guān)系圖

2.2 GSH對鉻(Ⅵ)在金電極上的電化學(xué)行為的影響(圖4)

1.2.0×10-4 mol·L-1鉻(Ⅵ) 2.2.0×10-4 mol·L-1鉻(Ⅵ)+1.0×10-11 mol·L-1 GSH

由圖4可以看出，2.0×10-4mol·L-1鉻(Ⅵ)在約0.25 V處出現(xiàn)了一個還原峰，當(dāng)加入GSH溶液后，峰電流下降，見表2。

鉻(Ⅵ)峰電流與1.0×10-11～7.0×10-11mol·L-1范圍內(nèi)的GSH濃度呈線性相關(guān)，見圖5。

表2 不同濃度GSH對鉻(Ⅵ)在金電極上的峰電流的抑制

圖5 GSH濃度與2.0×10-4 mol·L-1鉻(Ⅵ)在金電極上的還原峰電流的線性關(guān)系

其線性回歸方程為y=-0.969x+8.357，R=0.9813，檢測限為1.0×10-11mol·L-1。楊培慧等[11]報道在1.0×10-4mol·L-1的鉻(Ⅵ)溶液中加入不同濃度GSH進(jìn)行CV掃描，GSH檢測限為1.0×10-9mol·L-1，線性范圍為7.0×10-8～1.0×10-9mol·L-1，線性回歸方程為y=-55.063x+5.216，R=0.9526?？梢?，加大鉻(Ⅵ)的濃度，可顯著提高GSH的檢測限。

隨掃描速度(200～1000 mV·s-1)的加快，1.0×10-4mol·L-1鉻(Ⅵ)+2.0×10-5mol·L-1GSH溶液還原峰電流呈線性增加(圖6)。表明鉻(Ⅵ)在GSH存在下的電化學(xué)行為是一個受吸附控制的過程，與文獻(xiàn)[11]報道結(jié)果一致。

3 結(jié)論

首次以銅(Ⅱ)的還原峰為信號，建立了GSH的間接檢測方法;并通過增大鉻(Ⅵ)的濃度，極大地提高了以鉻(Ⅵ)的還原峰為信號的GSH間接檢測方法的檢測限。從而建立了一種靈敏、簡便的GSH電化學(xué)檢測方法。

圖6 1.0×10-4 mol·L-1 鉻(Ⅵ)+2.0×10-5 mol·L-1 GSH溶液在金電極上的還原峰電流與掃描速度的線性關(guān)系

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