梁建平 黃磊 林志立 莊慶

變形鏈球菌群是人和動物的主要致齲菌，但從人類口腔中檢出的主要是變形鏈球菌(血清型c、e、f)和遠緣鏈球菌(血清型 d、g)［1，2］，尤其是血清型 c 變鏈菌檢出率最高，可達80%。本研究擬從正常人群和頭頸腫瘤放療后患者中分離、鑒定變形鏈球菌，尤其是血清型c變鏈菌，分析血清型c變鏈菌與頭頸腫瘤放療后患者齲病發(fā)生的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料 MSA培養(yǎng)基，MSBA培養(yǎng)基 ，TPY培養(yǎng)基，50%甘油TPY培養(yǎng)基，微量生化反應(yīng)試劑，生化鑒定管，兔抗變鏈菌血清型c全菌血清。

1.2 病例選擇 年齡40～60歲受試者共20人，分為無齲組(DMFT=0)10人，頭頸腫瘤放療后患者組(DMFT≥6)10人;無齲組近3個月內(nèi)未服用抗生素，口腔衛(wèi)生良好，無全身系統(tǒng)性疾病，無牙齒結(jié)構(gòu)異常，取樣牙無冠及固定橋等修復(fù)體，無根面暴露及根面齲。頭頸腫瘤放療后患者組放療結(jié)束5年以上，無腫瘤復(fù)發(fā)，近3個月內(nèi)未服用抗生素。

1.3 方法

1.3.1 菌斑收集及處理 清洗受試者唇或頰側(cè)釉質(zhì)區(qū)，隔濕，干燥，用無菌刮匙刮取釉質(zhì)光滑面菌斑，立即置于預(yù)先消毒滅菌，盛有1 ml硫乙醇鹽轉(zhuǎn)送液和玻珠，上覆液體石蠟的離心管中密封，經(jīng)旋渦混勻儀振蕩1 min，用滅菌生理鹽水作10倍系列稀釋。

1.3.2 細菌培養(yǎng) 取原液、10-1、10-2、10-3稀釋液各50 μl分別接種于 MSBA 培養(yǎng)平板，80%N2、10%H2、10%CO2，37℃培養(yǎng)48 h，進行菌落檢測和鏡檢細菌形態(tài)學(xué)鑒定。

1.3.3 細菌生化反應(yīng) 將甘油保種變鏈菌臨床分離株分別接種于TPY培養(yǎng)平板內(nèi)，培養(yǎng)條件同細菌培養(yǎng)。收集部分菌落用微量生化板法作生化鑒定。

1.3.4 細菌血清學(xué)鑒定 轉(zhuǎn)種部分復(fù)蘇菌落于50 mlTPY液體培養(yǎng)基，增菌24 h，收集菌落細胞制備全細胞抗原。

2 結(jié)果

2.1 菌落檢測及細菌形態(tài)學(xué)鑒定 肉眼觀可見MSBA平板上典型變鏈菌落為深藍色嵌頓，質(zhì)硬，表面粗糙，突起，邊緣不齊。典型遠緣鏈球菌菌落為菌落表面常覆蓋有粘液滴樣蓋帽狀物。經(jīng)革蘭色染色，油鏡(10×100)下可見變鏈菌菌落為G+小球菌，呈長鏈狀或短鏈狀，成隊或分散排列。遠緣鏈球菌為G+小球菌，成對或鏈狀排列，長鏈狀居多。

2.2 細菌生化反應(yīng) 牙菌斑中檢出的血清型c變鏈菌和血清型g遠緣鏈球菌主要生化特性鑒定見表1。

表1 臨床分離株微量生化反應(yīng)結(jié)果

2.3 細菌血清學(xué)鑒定 出現(xiàn)融合沉淀弧，表示為血清c型;出現(xiàn)突刺狀沉淀弧，狀似T形，為血清e或f型;其余血清型則無此反應(yīng)。

2.4 變形鏈球菌群檢測 20例被檢菌斑中共分離出29株變形鏈球菌，15株變形鏈球菌合并遠緣鏈球菌。兩組受試者牙菌斑中變形鏈球菌及血清c型變鏈菌檢出情況見表2、3。由表可見，在兩組中變形鏈球菌群細菌和變形鏈球菌培養(yǎng)陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

表2 MS在受試者菌斑中的檢出情況(例，%)

表3 變鏈菌(血清型c)在受試者菌斑中的檢出情況(例)

3 討論

早期學(xué)者使用表型、細菌素分型方法發(fā)現(xiàn)，同一個體變鏈菌在完整牙表面和齲壞病損處的定植存在著部位差異性。近代學(xué)者利用分子分型技術(shù)也證實了這一觀點［1］。不同牙冠部位菌斑微生物組成不同。與鄰近完整表面區(qū)比較，齲壞區(qū)變鏈菌數(shù)明顯增多，尤其在齲壞表層變鏈菌/總鏈球菌的比例最高。因此，為了避免齲壞對菌斑中MS檢出率的影響，本研究正常人群和頭頸腫瘤放療后患者組均從完整釉面收集菌斑。

本研究結(jié)果表明，變形鏈球菌的檢出率達28% ，遠緣鏈球菌的檢出率為27% ，變形鏈球菌+遠緣鏈球菌的檢出率為27%。分離出的變形鏈球菌以血清c型為主，占92.8%。在兩組中變形鏈球菌群細菌和變形鏈球菌培養(yǎng)陽性率無差別(P＞0.05)。說明頭頸腫瘤放療后患者易患齲病與口腔內(nèi)血清c型變形鏈球菌無關(guān)，可能與放射治療破壞涎腺，口腔自潔功能降低有關(guān)。這從另一方面說明單純以細菌數(shù)量這一因素解釋頭頸腫瘤放療后患者易患齲病尚不全面，還應(yīng)與放射治療的其他不良反應(yīng)結(jié)合起來。

［1］Loesche WJ.Role of Streptococcus mutans in human dental decay.Microbiol Rev ，1986 ，50(4)∶353-380.

［2］De Soet JJ ，van Loveren C ，Lammens AJ ，et al.Different cariogenicity between Fresh isolates of S.sobrinus and S.mutans.Caries Res，1991，25(2):116-122.