李志紅，付 彬，石國明

（河南羚銳制藥股份有限公司，河南 信陽 464000）

老年咳喘片由黃芪、白術(shù)、防風(fēng)、補(bǔ)骨脂、淫羊藿、黃精、甘草組方，具有滋陰壯陽、扶正固本、提高免疫力、促進(jìn)病體康復(fù)等功效，可用于治療老年慢性支氣管炎及各種體虛癥[1]。為了有效地控制藥品質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜（HPLC）法測定其中淫羊藿苷含量，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent 1100型自動高效液相色譜儀（美國），包括Agilent 1100型可變波長檢測器（VWD），Agilent 1100 泵系統(tǒng)（PMP），Agilent化學(xué)工作站；梅特勒AG135型電子天平；KQ-600B型超聲波清洗器（昆山）。淫羊藿苷對照品（供含量測定用，批號為 1110737-200414，中國藥品生物制品檢定所）；老年咳喘片（河南羚銳制藥有限公司）；乙腈為色譜醇（天津），水為純化水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：HC-C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm），用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相：乙腈 -水（25∶75）；檢測波長：270 nm；柱溫：35 ℃；流速：0.8 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。按上述色譜條件測定，以淫羊藿苷色譜峰計(jì)算的理論塔板數(shù)為10 000，相鄰峰的分離度大于2.0。高效液相色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備

取樣品細(xì)粉0.5 g，精密稱定，置50 mL量瓶中，加乙醇至刻度，超聲處理（功率 80 W，頻率 40 kHz）25 min，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用0.45 μm的微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。精密稱取淫羊藿對照品，加甲醇溶解成每1 mL含7.2 μg的溶液，作為對照品溶液。按處方中藥味的比例及其工藝自制不含淫羊藿的陰性樣品，再按供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇溶解[2]成每1 mL含72.0 μg和7.2 μg的溶液。分別精密吸取對照品溶液 2，4，6，8，10，12 μL，按上述色譜條件進(jìn)行測定，以對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為 Y=5.492 6 X-15.943，r=0.999 7。結(jié)果表明，淫羊藿苷進(jìn)樣量在0.014 4～0.864 0 μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

空白干擾試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下3種溶液，依法測定。結(jié)果在與淫羊藿苷對照品溶液相同保留時(shí)間處未顯示色譜峰，故認(rèn)為陰性樣品對測定無干擾（圖1）。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一供試品溶液，每隔一定時(shí)間進(jìn)樣測定1次峰面積積分值。結(jié)果的 RSD=0.5%（n=5），表明供試品溶液在24 h內(nèi)相對穩(wěn)定。

精密度試驗(yàn)：精密吸取對照品溶液，依法重復(fù)進(jìn)樣5次，測定其峰面積。結(jié)果的 RSD=0.4%（n=5），表明儀器精密度良好。

重現(xiàn)性試驗(yàn)：取同一批（批號為080328）樣品5份，依法測定。結(jié)果平均含量為0.452 mg/g，RSD=0.9%（n=5）。

加樣回收試驗(yàn)：稱取已知含量的樣品約0.5 g，精密稱定，分別精密加入高、中、低3個(gè)水平的對照品溶液各2分，同供試品溶液制備方法制備溶液，依法測定含量，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 淫羊藿苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.4 樣品含量測定

依法測定5批樣品的含量。結(jié)果批號為071026，071206，080129，080328，080329 的樣品中淫羊苷含量分別為 0.446，0.435，0.462，0.450，0.455mg/g。

3 討論

結(jié)果表明，HPLC法測定老年咳喘片中淫羊藿苷含量，具有專屬性好、靈敏度高、操作簡便的特點(diǎn)。樣品測定結(jié)果顯示，淫羊藿苷含量在0.43～0.46 mg/g范圍內(nèi)，按藥材含量與處方量分析，并考慮到藥材來源及制劑生產(chǎn)、貯藏等因素，故暫訂本品每g含淫羊藿苷不得少于0.420 mg。

[1]WS3-B-1733-94，中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑（第九冊）[S].

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：229.