孟茜 孟娟

Smad7和TGF-β1在宮頸癌中的表達(dá)及意義

孟茜 孟娟

目的 探討Smad7和TGF-β1在宮頸癌中的表達(dá)，研究其在不同臨床病理特征中的意義。方法 以88例宮頸癌標(biāo)本作為實(shí)驗(yàn)組，以40例慢性宮頸炎組織作為對(duì)照組，應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)，分別檢測(cè)Smad7和TGF-β1在二組中的表達(dá)及在腫瘤不同臨床病理特征之間的關(guān)系。結(jié)果 宮頸癌中Smad7和TGF-β1表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組(P＜0.05)，Smad7和TGF-β1的表達(dá)與宮頸癌臨床分期、浸潤(rùn)宮頸管長(zhǎng)度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P＜0.05)，Smad7和TGF-β1在宮頸癌中的表達(dá)具有正相關(guān)關(guān)系(P＜0.05)。結(jié)論 宮頸癌在發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，Smad7和TGF-β1起重要的協(xié)同作用，聯(lián)合檢測(cè)Smad7和TGF-β1在宮頸癌中的表達(dá)可能對(duì)判斷預(yù)后有重要價(jià)值。

宮頸癌；Smad7；TGF-β1；免疫組化

宮頸癌是最常見的女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一，其發(fā)生與發(fā)展是多因素綜合作用的結(jié)果。近來(lái)相關(guān)研究表明信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)在腫瘤的發(fā)病中具有重要作用[1]。Smad7是抑制性Smads重要成員之一，它可以與TβR-I結(jié)合，通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)抑制方式使途徑限制型Smads無(wú)法與TβR-I結(jié)合并磷酸化，對(duì)TGF-β1信號(hào)傳遞起重要作用[2]。本實(shí)驗(yàn)將應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)88例宮頸癌中Smad7和TGF-β1的表達(dá)，探討二者在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 材料和方法

1.1 臨床材料

收集宮頸癌手術(shù)后的存檔的蠟塊作為實(shí)驗(yàn)組，共88例，年齡26～65歲，平均43.2歲?；颊咝g(shù)前均未進(jìn)行任何治療。同時(shí)選取因子宮肌瘤行全子宮切除術(shù)后的慢性宮頸炎的標(biāo)本40例作為對(duì)照組。二組患者在年齡、病史等相關(guān)因素的比較中，差別無(wú)明顯意義，具有可比性。

1.2 免疫組化方法檢測(cè)Smad7和TGF-β1的檢測(cè)應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)的S-P法。具體步聚：脫蠟，水化組織切片，3%H2O2去離子水孵育10分鐘，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶；抗原修復(fù)后分別滴加一抗，室溫37度孵育1～2小時(shí)或過(guò)夜，PBS沖洗，5分鐘×3次；滴加生物素標(biāo)記的二抗，室溫37度孵育20分鐘，PBS沖洗，5分鐘×3次；滴加辣根酶標(biāo)記鏈霉卵白素，室溫37度孵育20～30分鐘，PBS沖洗，5分鐘×3次；應(yīng)用DAB顯色劑顯色；自來(lái)水充分沖洗、復(fù)染、脫水、透明、封片。補(bǔ)給中的檢測(cè)均由同一病理技師完成，并在顯微鏡下顯色觀察，嚴(yán)格質(zhì)控。

1.3 結(jié)果判定方法

結(jié)果的判斷均由二位病理主治醫(yī)師共同閱片得出。Smad7和TGF-β1的陽(yáng)性信號(hào)均為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)棕黃色顆粒或棕黃色片狀分布。合并計(jì)算高倍鏡下(×400)隨機(jī)選擇的5個(gè)視野中陽(yáng)性細(xì)胞占全部計(jì)數(shù)腫瘤細(xì)胞的百分率，平均每個(gè)視野細(xì)胞質(zhì)呈陽(yáng)性反應(yīng)的細(xì)胞數(shù)≥10%為陽(yáng)性，無(wú)明顯陽(yáng)性反應(yīng)或陽(yáng)性反應(yīng)的細(xì)胞數(shù)＜10%為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用卡方檢驗(yàn)，所有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)均用SAS6.12軟件分析完成，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Smad7和TGF-β1在二組中的表達(dá)

Smad7和TGF-β1在實(shí)驗(yàn)組中表達(dá)的陽(yáng)性率明顯高于對(duì)照組。見表1。

2.2 Smad7和TGF-β1的表達(dá)與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系由表2可見，Smad7和TGF-β1表達(dá)的陽(yáng)性率與宮頸癌的臨床分期、宮頸管浸潤(rùn)長(zhǎng)度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

2.3 宮頸癌中Smad7和TGF-β1表達(dá)的關(guān)系Smad7和TGF-β1在宮頸癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.42, P＜0.05)。而在正常宮頸中Smad7和TGF-β1的表達(dá)未見相關(guān)性(P＞0.05)。

3 討論

惡性腫瘤在體內(nèi)發(fā)生發(fā)展是一個(gè)錯(cuò)綜復(fù)雜的過(guò)程，受多種相關(guān)基因的調(diào)控[3]。TGF-β是一族結(jié)構(gòu)和功能密切相關(guān)的活性多肽，廣泛參與細(xì)胞的分化、增殖、形態(tài)改變、黏附、轉(zhuǎn)移、細(xì)胞外基質(zhì)產(chǎn)生及凋亡等。有研究認(rèn)為TGF-β能引起小鼠成纖維細(xì)胞產(chǎn)生表型轉(zhuǎn)化，在機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞生長(zhǎng)和分化、腫瘤免疫等方面起重要作用[4]。而且有觀點(diǎn)認(rèn)為TGF-β受體共同介導(dǎo)超家族成員的跨膜信號(hào)傳導(dǎo)，胞內(nèi)Smads信號(hào)則將信號(hào)從細(xì)胞表面受體傳導(dǎo)到細(xì)胞核內(nèi)部，完成轉(zhuǎn)錄過(guò)程[5]。當(dāng)前在已發(fā)現(xiàn)8種Smad蛋白，從結(jié)構(gòu)和功能上分為3個(gè)亞型：①受體調(diào)節(jié)型Smad，包括Smad1、2、3、5、8，作為TβRI激酶的底物，活化后入核，調(diào)節(jié)特異基因的表達(dá)。②共同介導(dǎo)的Smad，主要指Smad4，能與受體調(diào)節(jié)型相互作用，形成異聚體。③抑制性Smad包括Smad6、7，對(duì)前兩種Smad介導(dǎo)的基因表達(dá)具有抑制作用[6]。還有學(xué)者認(rèn)為Smad7是一種侯補(bǔ)癌基因[4]。有研究認(rèn)為Smad7是TGF-β胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的中心分子[7]，而TGF-β在抑制細(xì)胞增殖和腫瘤發(fā)生中起著重要的作用。趙倩等[8]認(rèn)為Smad7和TGF-β1在子宮內(nèi)膜異位癥中的具有重要作用，具二者的表達(dá)具有負(fù)相關(guān)。而張勇等[9]認(rèn)為Smad7和TGF-β1在鼻咽癌中的表達(dá)呈正相關(guān)，因此，關(guān)于二者的研究及相關(guān)性存在爭(zhēng)議，尤其在宮頸癌中的作用，尚不明確。

表1 Smad7和TGF-β1在實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中的表達(dá)

表2 Smad7和TGF-β1在實(shí)驗(yàn)組中不同臨床病理特征中的表達(dá)

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)宮頸癌中Smad7和TGF-β1的表達(dá)，結(jié)果顯示Smad7和TGF-β1的表達(dá)部位均定位于細(xì)胞質(zhì)中，且宮頸癌中Smad7和TGF-β1的表達(dá)明顯高于慢性宮頸炎組織，提示Smad7和TGF-β1參與了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展。Smad7和TGF-β1與宮頸癌的臨床分期、宮頸管浸潤(rùn)長(zhǎng)度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，提示Smad7和TGF-β1參與了宮頸癌的進(jìn)展及淋巴道播散。由于臨床分期及浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移與患者預(yù)后相關(guān)，因此，提示臨床中對(duì)宮頸癌標(biāo)本進(jìn)行Smad7和TGF-β1的檢測(cè)，可能對(duì)判斷預(yù)后有重要價(jià)值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示宮頸癌中Smad7和TGF-β1的表達(dá)具有正相關(guān)，提示Smad7和TGF-β1具有明顯的協(xié)同作用。Smad7在TGF-β1誘導(dǎo)表達(dá)后，反過(guò)來(lái)直接與TGFβR結(jié)合形成穩(wěn)定的復(fù)合物，并且具有與其他信息分子不同的調(diào)節(jié)作用[10]，是一種潛在的與癌發(fā)生相關(guān)的基因。TGF-β1與其相應(yīng)受體、胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smad7共同組成了一個(gè)影響腫瘤形成和發(fā)展的通路，通路中任何一個(gè)組成元件發(fā)生紊亂，均可導(dǎo)致信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)紊亂，影響其生物學(xué)效應(yīng)。

總之，Smad7和TGF-β1在宮頸癌中高表達(dá)，且具有協(xié)同作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)的異常對(duì)宮頸癌的發(fā)生發(fā)展具有重要作用。

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Objective To detect the expressions of Smad7 and TGF-β1in cervical carcinoma, and investigate their relationship in different clinical characteristic of neoplasm. Methods The study included 88 cases of cervical carcinoma as experimental group and 40 cases of chronic cervicitis tissues as control group. We analyzed their expressions of Smad7 and TGF-β1in different pathological character by using the IHC. Results Comparisons of the primary tumors with cervical carcinoma and chronic cervicitis tissues showed that there were signif i cant high-regulation of Smad7 and TGF-β1(P＜0.05). The expressions of Smad7 and TGF-β1were associated with clinical stage, infiltration degree and lymph node metastasis(P＜0.05).There was positive correlationship between Smad7 and TGF-β1in cervical carcinoma(P＜0.05). Conclusion Smad7 and TGF-β1may promote the development of cervical carcinoma. The combined examination of Smad7 and TGF-β1may be helpful to predict the prognosis in patients with cervical carcinoma.

cervical carcinoma; Smad7; TGF-β1; IHC

10.3969/j.issn.1009-4393.2010.21.055

272013 山東濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院 (孟茜)274000 山東菏澤醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校 (孟娟)