李長生 楊曉妮 賀 仆 劉世青 林梅青

(山東省千佛山醫(yī)院,山東 濟南 250014)

血管性癡呆(VD)是因腦血管疾病所致的智能及認知功能障礙的臨床綜合征〔1〕,是老年人多發(fā)病和疑難病,給社會和家庭帶來沉重的負擔,因此探討其發(fā)病原因和機制,研究開發(fā)治療該病的新藥具有十分重要的意義。隨著對 VD研究的不斷深入,人們認識到性激素與VD關系密切,性激素水平與VD的發(fā)生發(fā)展存在著密切聯(lián)系。本研究采用改良 Pulsinelli四血管阻斷(4-VO)法制造 VD大鼠模型,觀察首烏益智膠囊對 VD大鼠的療效,并通過性激素水平的變化,進一步探討首烏益智膠囊對 VD的作用機制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 Wistar健康老齡大鼠 120只(月齡 ＞15個月),雌雄各半,體重 300～400 g。山東大學實驗動物中心提供,實驗動物質(zhì)量合格證號:010281。

1.1.2 藥物與試劑 首烏益智膠囊(藥物組成:制何首烏、黃芪、丹參、川芎、益智仁、天麻、水蛭等)由濟南鋼鐵職工醫(yī)院制劑室生產(chǎn)。腦復康片由濟南東風制藥有限公司生產(chǎn)(批號0307043)。碘〔125I〕-人血清睪酮 (T)放射免疫藥盒、碘 〔125I〕-雌二醇(E2)放射免疫藥盒、碘〔125I〕-孕酮(P)放射免疫藥盒,均購于北京北免東雅生物技術研究所。

1.2 方法

1.2.1 迷宮學習訓練 大鼠購進,室溫 20～24℃,相對濕度45～55%,飼養(yǎng) 1 w后,Morris水迷宮法進行大鼠行為學訓練。方法:定位航行試驗,每天下午 4次,將受試大鼠按順時鐘方向順序面向池壁放入水中。記錄 2 min內(nèi)找到平臺的時間(逃避潛伏期)。共學習 6d。

1.2.2 VD大鼠模型的制備 用改良 Pulsinelli4-VO法制造VD大鼠模型〔2,3〕。大鼠于術前禁食 12 h,不禁水。0.4%戊巴比妥鈉,0.16g/kg腹腔麻醉,將大鼠俯臥固定,行背側(cè)頸正中切口,逐層鈍性分離,暴露雙側(cè)第 1頸椎橫突翼小孔,用直徑約

0.5 mm的電凝針灼燒雙側(cè)翼小孔內(nèi)的椎動脈,造成永久性閉塞,再將大鼠仰臥固定,行腹側(cè)頸正中切口,鈍性分離雙側(cè)頸總動脈,以“4”號絲線穿線備用。24 h后,用微動脈夾夾閉雙側(cè)頸總動脈5 min,間隔 1 h后再夾閉 5 min,共夾閉 3次,局部傷口縫合前,以慶大霉素局部噴灑處理防止感染,術后3d給予青霉素 2 U/kg肌肉注射抗感染。假手術組步驟同上,不做缺血處理。

1.2.3 造模后水迷宮測試 造模術后 7 d,對大鼠進行水迷宮測試。定位航行試驗:歷時 6 d,每天下午 4次,將受試大鼠按順時鐘方向順序面向池壁放入水中。記錄2 min內(nèi)找到平臺的時間。前 5 d學習,第 6天測試,記錄測試成績?？臻g探索試驗:第 6天下午定位航行試驗后撤除平臺,將大鼠從任意一點放入水中,拍攝游泳過程 1 min,分析循行路徑,統(tǒng)計其在原平臺所在象限內(nèi)外循行路徑之比,和在該象限內(nèi)外停留的時間之比,統(tǒng)計跨越原平臺位置的次數(shù)。

1.2.4 分組 按術后水迷宮定位航行測試成績,隨機分組。將 VD模型大鼠分為首烏益智膠囊組、腦復康組、鹽水組,每組16只(雌雄各 8只)。并設假手術組 10只(雌雄各 5只)。

1.2.5 藥物干預 術后 7 d,給大鼠用灌胃器灌胃,每天下午灌一次,共灌胃 20 d。灌胃液體溫度為 20℃。首烏益智膠囊組,首烏益智靈溶液灌胃,每次5 ml,含藥量 0.24 g。鹽水組,生理鹽水灌胃,每次5ml。腦復康組,腦復康溶液灌胃,每次5 ml,含藥量 0.06 g。假手術組,生理鹽水灌胃,每次 5 ml。

1.2.6 用藥后迷宮測試 用藥 20 d后,對大鼠進行水迷宮測試。方法同造模后水迷宮測試。迷宮后 3 d,頸靜脈取血測性激素。

1.3 性激素的測定 E2、P、T三個試驗項目均采用放射免疫分析方法。

1.4 統(tǒng)計學方法 數(shù)據(jù)以x±s表示,應用 SPSS11.5軟件,組內(nèi)數(shù)據(jù)比較用 t檢驗,組間數(shù)據(jù)比較用單因素方差分析。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠造模后定位航行試驗結(jié)果 造模后假手術組大鼠的逃避潛伏期為(2.26±0.55)s,明顯小于鹽水組(6.45±0.39)s、腦復康組(6.42±0.44)s、首烏益智膠囊組(6.55±0.48)s,具有統(tǒng)計學意義(P＜0.01),鹽水組、首烏益智膠囊組、腦復康組間大鼠的逃避潛伏期無統(tǒng)計學差異(P＞0.05),表明 VD模型成功。

2.2 各組大鼠用藥前后定位航行試驗及空間探索試驗測試結(jié)果 用藥后組內(nèi)比較,首烏益智膠囊組、腦復康組治療后逃避潛伏期明顯小于治療前(P＜0.01);首烏益智膠囊組、腦復康組治療后在原平臺象限內(nèi)的游泳距離和時間及跨越原平臺位置的次數(shù)均較治療前明顯改善(P＜0.05,P＜0.01);用藥后組間比較,首烏益智膠囊組大鼠的逃避潛伏期明顯小于腦復康組和鹽水組(P＜0.01,P＜0.05),低于假手術組(P＜0.01);首烏益智膠囊組大鼠在原平臺所在象限內(nèi)的循行路徑和停留時間及跨越原平臺位置的次數(shù)均好于腦復康組、鹽水組,低于假手術組(P＜0.01)(見表 1)。

2.3 各組VD模型大鼠用藥前后性激素水平變化 VD模型雌鼠用藥后首烏益智膠囊組、腦復康組治療后E2、P水平明顯高于治療前(P＜0.05),VD模型雄鼠用藥后首烏益智膠囊組、腦復康組治療后 E2水平明顯低于治療前(P＜0.05),T水平明顯高于治療前(P＜0.05)。首烏益智膠囊組雌鼠 E2、P水平明顯高于腦復康組、鹽水組(P＜0.05),首烏益智膠囊組雄鼠 E2水平明顯低于腦復康組、鹽水組,而T水平明顯高于腦復康組、鹽水組(P＜0.05),見表 2。

表1 用藥前后定位航行成績及空間探索成績分析(x±s)

表2 VAD模型大鼠用藥后性激素水平比較(x±s)

3 討 論

研究表明,VD的病理機制主要有腦梗死、小血管疾病、白質(zhì)損傷、神經(jīng)元損傷幾方面;其分子機制主要有級聯(lián)反應、興奮性毒性、炎癥反應、細胞凋亡等〔4〕。VD的發(fā)病機制目前還不完全清楚,隨著對 VD研究的不斷深入,人們認識到性激素與 VD關系密切。近年來研究發(fā)現(xiàn) VD時血漿性激素水平發(fā)生變化,出現(xiàn)性激素水平失衡,認知功能的減退與性激素水平的下降成正相關,提示性激素水平與 VD的發(fā)生發(fā)展存在著密切聯(lián)系。性激素對 VD發(fā)揮作用主要通過擴血管增加腦血流、促進葡萄糖代謝、促進乙酰膽堿合成和釋放、降血脂、改善血液流變學以及減少興奮性氨基酸毒性、抗氧自由基〔5,6〕等幾個方面發(fā)揮作用,改善癥狀。本實驗研究結(jié)果表明:首烏益智膠囊能升高 VD模型雌鼠體內(nèi) E2、P水平,降低 VD模型雄鼠體內(nèi) E2水平,升高T水平,從而調(diào)節(jié)VD模型大鼠體內(nèi)性激素水平的失衡。

VD屬中醫(yī)“呆病”范疇,本病病位在腦,與肝、腎、心、脾等臟密切相關,我們以傳統(tǒng)中醫(yī)理論為指導,根據(jù)多年來的臨床經(jīng)驗,提出腎精虧虛、淤血阻絡是 VD的基本病機,確立了補腎健腦、化淤通竅的基本治法,經(jīng)過反復試驗,組方不斷加減,制成首烏益智膠囊。本方以何首烏為君藥,苦、甘、澀、溫、不寒不燥,專入肝腎,養(yǎng)陰益精,補腎健腦,養(yǎng)血益肝。黃芪氣味俱輕,具有升發(fā)之性,功專補氣升陽,為補氣藥之最,益智仁辛溫氣香,既能溫補腎陽,收斂固精,縮小便,又能溫胃逐寒,暖脾攝涎唾。二藥為輔藥鼓舞腎氣以生精,助陽以化陰。銀杏葉、水蛭、天麻共為佐藥,與主藥、輔藥共達益氣活血、化瘀通絡、推陳致新、填精益腦、開竅聰智之功。川芎為使藥,辛溫香竄,走而不守,為血中之氣藥,與黃芪相輔相成、益氣活血、安神醒腦,可帶諸藥到達病所。全方配伍共達補腎健腦、益精填髓、益氣活血、化瘀通竅之功跑。本實驗研究結(jié)果驗證了首烏益智靈對 VD有明顯的治療作用。

首烏益智靈能明顯改善 VD大鼠的智能,其治療 VD的機制之一可能是調(diào)節(jié) VAD模型大鼠體內(nèi)性激素水平。這為中詠藥防治腦 VD提供了新思路、新方法,有重要的使用價值和理論意義。

1 王維治,羅祖明.神經(jīng)病學〔M〕.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:253-5.

2 Schmidt-Kastner R,Paschen W,Ophoff BG,et al.Q modified four-wessel occlusion model for inducing in complete forebrain ischemia in rats〔J〕.Stroke,1989;20:936-8.

3 Pulsinelli WA,Brierley JB,Plum F.Temporal profile of neuronal damage in model of transient forebrain ischemia〔J〕.AnnNeurol,1982;11:491.

4 田金洲.血管性癡呆〔M〕.北京:人民衛(wèi)生出版社,2003:210.

5 朱鋐達,陳名道 .性激素與動脈硬化性心血管疾病及其相關事件的關系〔J〕.中華內(nèi)分泌代謝雜志,2005;21(1):84-7.

6 張秀清,遲兆富 .性激素與老年期腦梗死的相關性研究進展〔J〕.山東醫(yī)藥,2003;43(25):54-5.