初洪波,張 玲,張 瑜,赫玉芳

(吉林天藥現(xiàn)代中藥科技有限公司,吉林長(zhǎng)春130012)

銀線草是金粟蘭科植物銀線草 (Chloranthus japonicus Sieb)的干燥全草,又名鬼督郵 (《本草經(jīng)集注》)、獨(dú)搖草 (《唐本草》)和四塊瓦 (《廣西中藥志》)[1]。其味辛、苦,性溫,有毒,功能祛風(fēng)除濕、散寒止痛、活血消腫[2]。銀線草的天然植物資源極為豐富,主要分布于我國(guó)黑龍江、吉林、河北、甘肅等省份。

超臨界流體萃取技術(shù)(supercritical fluid extraction,SFE)是近年來(lái)迅速發(fā)展的一種新型分離技術(shù)。CO2作為最常用的超臨界流體,具有操作溫度低、分離效率高,無(wú)毒、無(wú)溶劑殘留、無(wú)二次污染等優(yōu)點(diǎn),非常適合中藥有效成分的提取分離[3-7]。本文首次應(yīng)用超臨界CO2萃取技術(shù)提取銀線草揮發(fā)油,利用毛細(xì)管氣相色譜-質(zhì)譜法對(duì)其化學(xué)成分進(jìn)行了定性定量分析。

1 儀器與材料

銀線草全草經(jīng)吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院嚴(yán)仲凱研究員鑒定為金粟蘭科植物銀線草(C.japonicus)的干燥全草;HA221-50-06型超臨界流體萃取裝置(江蘇南通華安超臨界萃取有限公司);HP6890A-5973型氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)Agilent科技有限公司);He(純度99.999%),CO2(純度99.9%)均由長(zhǎng)春市光機(jī)氣體有限公司提供;乙醚,乙酸乙酯(分析純,北京化工廠)。

2 方法

2.1 揮發(fā)油的制備 銀線草藥材粉(通過(guò)20目篩)200 g,加入萃取釜,先靜態(tài)萃取30 min,后動(dòng)態(tài)萃取90 min,從出口閥接物料,獲得萃取物,萃取條件見(jiàn)表1。

表1 超臨界CO2流體萃取條件

2.2 GC-MS分析測(cè)試條件[8]美國(guó)HP6890A-5973氣相色譜質(zhì)譜儀聯(lián)用儀,G1701BA化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。HP-1(30 m×0.25 mm,0.25 μ m)彈性石英毛細(xì)管柱;載氣為高純氦氣,載氣流量1.0 mL/min;進(jìn)樣口溫度280℃;分流比50∶1;升溫程序:起始柱溫60℃,維持3 min,再以6℃/min升溫至300℃;離子源為EI源,離子源溫度200℃;接口溫度280℃;連接桿溫度200℃;電離電壓70 eV;發(fā)射電流34.6A;掃描范圍m/z 20～500,掃描速度2000 amu/s。

2.3 供試樣品的制備 超臨界萃取所得的總揮發(fā)油粗品,用10倍量的水稀釋,用相同體積的乙醚萃取5次,合并乙醚液,無(wú)水硫酸鈉脫水,低溫?fù)]干乙醚,得到淡黃色透明油狀物,4℃密封保存?zhèn)溆谩Ｈ∩倭繐]發(fā)油提取物,用乙酸乙酯溶解,過(guò)0.45 μ m濾膜得供試品。

2.4 揮發(fā)油化學(xué)成分分析 揮發(fā)油供試樣品,用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)行分析鑒定。通過(guò)G1701BA化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng),檢索NIST98譜圖庫(kù),并分別與八峰索引及EPA/NIH質(zhì)譜圖集的標(biāo)準(zhǔn)譜圖進(jìn)行對(duì)照、復(fù)合,再結(jié)合有關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行人工譜圖解析,確定揮發(fā)油中的各個(gè)化學(xué)成分。按峰面積歸一化法進(jìn)行定量分析,分別求得各化學(xué)成分在銀線草揮發(fā)油中的相對(duì)百分含量。

3 結(jié)果

對(duì)銀線草揮發(fā)油的GC-MS分析,測(cè)得揮發(fā)油氣相色譜共有62個(gè)峰,總離子色譜圖,共鑒定出34個(gè)化合物,利用面積歸一法計(jì)算各化合物相對(duì)含量,已鑒定化合物含量占總揮發(fā)油的81.38%,化學(xué)成分及相對(duì)含量結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 銀線草揮發(fā)油化學(xué)成分及其含量

4 討論

分析結(jié)果表明,銀線草揮發(fā)油化學(xué)成分以亞油酸(相對(duì)含量為 30.490%),十六烷酸(19.096%),γ-谷甾醇(7.086%),9,12,15-十八碳三烯-1-醇(4.605%),反油酸(3.028%)為主,占總揮發(fā)油成分的64.31%。在檢測(cè)的化合物中,醇類化合物占總揮發(fā)油的16.33%,酸類化合物占 54.31%,酯類化合物占6.59%。經(jīng)文獻(xiàn)檢索,所有化合物均首次從該植物中檢出。銀線草所含亞油酸、反油酸等不飽和脂肪酸占銀線草揮發(fā)油成分含量的33.52%?，F(xiàn)代研究認(rèn)為,不飽和脂肪酸通過(guò)與腫瘤細(xì)胞膜結(jié)合,使腫瘤細(xì)胞膜上的脂肪酸組成發(fā)生改變,破壞了腫瘤細(xì)胞膜結(jié)構(gòu),以致腫瘤細(xì)胞完全崩解;不飽和脂肪酸還可以通過(guò)影響免疫細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能來(lái)發(fā)揮免疫功能。所以,在抗腫瘤治療時(shí),不飽和脂肪酸除了殺傷腫瘤細(xì)胞外,還能使病人的免疫功能不受影響[9]。其中,亞油酸是人體所必需的兩種脂肪酸之一,能夠抑制膽固醇的吸收,促進(jìn)體內(nèi)多余的膽固醇分解為膽酸從而降低血液中的膽固醇濃度,提高血管壁的彈性,預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化。

銀線草揮發(fā)油中還含有部分微量物質(zhì),其生理功能亦是不容忽視。如欖香烯是非細(xì)胞毒性的廣譜抗癌物質(zhì),可以逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的耐藥性,有效地控制惡性胸腹腔積液[10];而花生酸產(chǎn)生的血栓素A2則具有極強(qiáng)的收縮血管和血小板聚集作用[11]。

總之,從不飽和脂肪酸含量與醫(yī)療保健方面考慮,銀線草揮發(fā)油成分有很高的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。該研究結(jié)果為進(jìn)一步對(duì)銀線草的開(kāi)發(fā)和利用提供了可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。

[1]冉先德.中華藥海[M].哈爾濱:哈爾濱出版社,1993:1736-1737.

[2]宋立人,洪恂,丁緒亮,等.現(xiàn)代中藥學(xué)大辭典[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:1978-1979.

[3]蕭效良,甘海濤,戚東林.超臨界萃取技術(shù)提取中藥有效成分[J].化工進(jìn)展,2001,20(5):7-9.

[4]武星,嚴(yán)銘銘,劉琬暉,等.超臨界提取東北刺人參揮發(fā)性成分分析[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2007,23(2):28-29.

[5]曹東東,徐雅娟,徐東銘,等.CO2超臨界萃取漆大姑活性成分最佳工藝研究[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2008,24(1):31-32.

[6]葛云初,黎陽(yáng).超臨界流體萃取技術(shù)及其在中藥提取中的應(yīng)用[J].現(xiàn)代藥物與臨床,2009,24(5):279-282.

[7]吳秀華,鐘鳴.GC-MS法對(duì)比分析超臨界CO2萃取法與水蒸氣蒸餾法提取佩蘭揮發(fā)油化學(xué)成分的差異[J].中國(guó)藥房,2009,20(24):1888-1890.

[8]李懷林,楊曉虹,李剛,等.長(zhǎng)白山水楊梅揮發(fā)油成分GCMS分析[J].長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2005,21(2):31-32.

[9]Gill I,Valivety R.polyunsaturated fatty acids,partⅠ:occurrence,biological activities and application[J] .Trends Biotechnol,1997,15(10):401-409.

[10]陳春美,楊衛(wèi)忠,王春華,等.欖香烯對(duì)人腦膠質(zhì)瘤 U251/AD M耐藥細(xì)胞株多藥耐藥性的逆轉(zhuǎn)作用[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志,2006,23(4):601-603.

[11]Suchner U,Senftleben U.Immune modulation by polyunsaturated fatty acids during nutritional therapy:interactions with synthesis and effects of eicosanoids[J].Infusionsther Transfusionsmed,1994,21(3):167-182.