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        內(nèi)蒙古野生銀白離褶傘子實(shí)體組織分離試驗(yàn)

        2010-05-30 01:00:54馮曉宇王志英臧丹丹
        中國(guó)食用菌 2010年3期
        關(guān)鍵詞:污染生長(zhǎng)

        馮曉宇,鄒 莉,王志英,臧丹丹

        (東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院,黑龍江 哈爾濱 150040)

        銀白離褶傘Lyophyllum connatum(Schum.:Fr.)Sing.又叫做合生杯傘、真姬菇 (日本)、從生杯傘。同物異名:Clitocybe connata(Schum.:Fr.)Gill.隸屬傘菌目Agaricales、白蘑科Tricholomataceae、離褶傘屬Lyophyllum。銀白離褶傘子實(shí)體一般較小或中等大小,呈石膏樣白色。菌蓋直徑3 cm~8 cm,扁平球形至近平展,中部稍突或平,表面白色,后期近灰白色,近邊緣有皺條紋。菌肉白色。菌褶后期似帶粉黃色,直生又延生,稠密,不等長(zhǎng)。菌柄細(xì)長(zhǎng),白色,下部彎曲,常有許多柄叢生一起,內(nèi)部實(shí)心至松軟[1]??墒秤茫刑厥獾南銡馕禰1]。

        1 材料和方法

        1.1 供試種菇

        從內(nèi)蒙古圖里河地區(qū)采集的野生銀白離褶傘,選擇朵型正常,無(wú)病害、蟲(chóng)孔、破損的子實(shí)體作為供試種菇。

        1.2 培養(yǎng)基配方

        馬鈴薯葡萄糖瓊脂 (PDA)培養(yǎng)基:去皮馬鈴薯200 g、葡萄糖20 g、瓊脂15 g~20 g,水1 000 mL,自然pH。121℃高壓蒸氣滅菌20 min。

        1.3 試驗(yàn)方法

        1.3.1 孢子印觀察

        選取形狀規(guī)則八九分成熟的種菇,切去大部分,菌柄用無(wú)菌水沖洗數(shù)遍后再用已滅菌的濾紙吸干表面水分。在無(wú)菌室內(nèi),把種菇菌褶朝下用鐵絲倒掛在玻璃漏斗下面,漏斗倒蓋在培養(yǎng)皿上面;上端小孔用棉花塞住。靜置12 h~20 h,菌褶上孢子就會(huì)散落在培養(yǎng)皿內(nèi),形成孢子印。

        1.3.2 菌絲體形態(tài)觀察

        在載玻片上滴加1滴蒸餾水,用解剖針從生長(zhǎng)有銀白離褶傘的PDA平板中挑取少量菌絲,用50%的乙醇浸潤(rùn),再用蒸餾水將浸過(guò)的菌絲洗一下,然后放入載玻片上的液滴中,仔細(xì)地用解剖針將菌絲分散開(kāi)來(lái)。蓋上蓋玻片,勿產(chǎn)生氣泡,且不要移動(dòng)蓋玻片。先用低倍鏡,再轉(zhuǎn)換高倍鏡鏡檢并記錄觀察結(jié)果。

        1.3.3 子實(shí)體的組織分離

        在超凈工作臺(tái)上,將子實(shí)體用75%的醫(yī)用酒精擦拭表面2遍~3遍;先用解剖刀沿銀白離褶傘縱向輕輕劃開(kāi)小口,再用手掰開(kāi);切取菌蓋處、菌褶和菌柄交界處、菌柄處的組織塊,分別接種于PDA培養(yǎng)基平板上。每皿接4塊子實(shí)體,設(shè)置4組重復(fù),置于25℃恒溫?zé)o光培養(yǎng)。每隔1 d觀察并記錄菌絲生長(zhǎng)情況。

        1.3.4 新鮮子實(shí)體與陰干3 d子實(shí)體的對(duì)比分離

        組織分離法分別分離新鮮的子實(shí)體和經(jīng)過(guò)陰干3 d后的子實(shí)體,各接4塊子實(shí)體于PDA平板上,設(shè)置4組重復(fù),置于25℃無(wú)光條件下恒溫培養(yǎng)。每隔1 d觀察并記錄菌絲生長(zhǎng)情況。

        1.3.5 污染率

        每隔1 d觀察菌絲體的生長(zhǎng)情況,對(duì)發(fā)生污染的培養(yǎng)皿及時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)皿培養(yǎng),并做好記錄。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 孢子印的觀察

        觀察到的孢子印與菌褶排列一致,孢子印白色,粉末狀或放射狀。

        2.2 菌絲體形態(tài)的觀察

        經(jīng)過(guò)24 h培養(yǎng)后,可見(jiàn)組織塊上面長(zhǎng)出放射狀的菌絲,再經(jīng)過(guò)1 d菌絲開(kāi)始蔓延到平板培養(yǎng)基上。大約25 d~30 d菌絲可長(zhǎng)滿(mǎn)整個(gè)培養(yǎng)皿,結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2。

        圖1 菌絲體形態(tài)

        圖2 菌絲體顯微結(jié)構(gòu)

        從圖1可以看出菌絲潔白、粗壯、顏色一致;菌落呈規(guī)則圓形、邊緣整齊;無(wú)菌絲分泌物,并且具特殊的香味。從圖2可以看出,顯微鏡下的菌絲較纖細(xì),粗細(xì)均勻,菌絲細(xì)胞呈狹長(zhǎng)狀。

        2.3 子實(shí)體不同分離部位的菌絲生長(zhǎng)對(duì)比

        子實(shí)體不同分離部位的菌絲生長(zhǎng)對(duì)比情況見(jiàn)表1。

        表1 子實(shí)體不同部位分離結(jié)果

        從表1可以看出,菌褶和菌柄交界處的組織塊為最佳組織培養(yǎng)部位,萌發(fā)快,菌絲生長(zhǎng)速度快,菌絲潔白細(xì)密。菌蓋處和菌柄處次之。

        2.4 菌絲體污染率

        新鮮子實(shí)體的菌絲體污染情況見(jiàn)表2。

        從表2可以看出,新鮮子實(shí)體的菌絲體,菌蓋處的平均污染率為31.25%,菌褶和菌柄交界處的平均污染率為18.75%,菌柄處的平均污染率為31.25%??梢?jiàn),菌褶和菌柄交界處的污染率最低,菌柄處和菌蓋處的污染率相同,均較高。陰干3 d子實(shí)體的菌絲體污染情況見(jiàn)表3。

        從表3可以看出,經(jīng)陰干3 d后的子實(shí)體生長(zhǎng)的菌絲體,菌蓋處的平均污染率為25.00%,菌褶和菌柄交界處的平均污染率為12.50%,菌柄處的平均污染率為18.75%??梢?jiàn)菌褶和菌柄交界處的污染率最低,菌柄處略高,菌蓋處的污染率最高。

        3 結(jié)論

        內(nèi)蒙古野生銀白離褶傘子實(shí)體各部位經(jīng)組織分離均能萌發(fā),菌褶和菌柄交界處菌絲生長(zhǎng)勢(shì)相對(duì)最旺且菌絲生長(zhǎng)最快,污染率相對(duì)最低,為最佳組織分離部位;新鮮子實(shí)體的分離污染率相較于陰干3 d后的子實(shí)體分離污染率高,選擇陰干子實(shí)體的組織進(jìn)行分離,可得更高的分離率。

        表2 新鮮子實(shí)體的菌絲體污染率

        表3 陰干3 d子實(shí)體的菌絲體污染率

        目前世界有記錄的離褶傘屬有200余種,其中許多種既是美味的可食菌類(lèi),又是很好的藥用真菌,還有抑制癌細(xì)胞的效果[2]。但國(guó)內(nèi)外研究最多的是荷葉離褶傘,墨染離褶傘和榆生離褶傘也有研究[2]。

        銀白離褶傘作為一種待開(kāi)發(fā)的珍稀野生食用菌,其生物學(xué)特性、遺傳育種、馴化栽培研究以及營(yíng)養(yǎng)和藥用價(jià)值等在國(guó)內(nèi)外均未見(jiàn)報(bào)道,本文首次對(duì)銀白離褶傘進(jìn)行生物學(xué)特性研究,對(duì)其進(jìn)行的試驗(yàn)可為其價(jià)值和栽培的繼續(xù)研究提供支持和參考,以便于將來(lái)深入研究和開(kāi)發(fā)利用這一珍貴的種質(zhì)資源。

        [1]卯曉嵐.中國(guó)大型真菌[M].河南:河南科學(xué)技術(shù)出版社,2000.

        [2]李永紅,柴紅梅,李樹(shù)紅,等.離褶傘研究進(jìn)展[J].中國(guó)食用菌,2008, 27(2): 10-12.

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