吳 婷，李 薇

（廣州市藥品檢驗(yàn)所，廣東廣州 510160）

單硝酸異山梨酯注射液 （Isosorbide Mononitrate Injection）為新一代的長(zhǎng)效硝酸酯類抗心絞痛藥物，通過(guò)擴(kuò)張外周血管，特別是靜脈容量血管，減少回心血量，降低心臟前后負(fù)荷，使心肌耗氧量減少，發(fā)揮抗心肌缺血作用[1-2]。主要用于冠心病的長(zhǎng)期治療，心絞痛的預(yù)防，心肌梗死后持續(xù)心絞痛的治療；與洋地黃或利尿劑聯(lián)合應(yīng)用，治療慢性充血性心力衰竭。單硝酸異山梨酯注射液具有較強(qiáng)的擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈作用，從而改善缺血性心臟病供血狀況，它還具有抑制血小板聚集和降低血液黏附作用[3]。本品與其他血管擴(kuò)張劑、鈣拮抗劑、β受體阻滯劑、抗高血壓壓藥、三環(huán)抗抑郁藥及酒精合用，可強(qiáng)化本類藥物的降血壓效應(yīng)。本品收載于國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-（X-078）-2004Z，但未規(guī)定細(xì)菌內(nèi)毒素檢查標(biāo)準(zhǔn)。為了提高藥品控制標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)對(duì)單硝酸異山梨酯注射液進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)研究，建立了本品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

旋渦振蕩器（德國(guó)IKA，型號(hào)：MS-1）；四孔水浴鍋（英國(guó)GRANT，型號(hào)：SUB14）。

1.2 試藥

單硝酸異山梨酯注射液（a.批號(hào)：0601428，規(guī)格：5 ml∶20 mg，濟(jì)南利民制藥有限責(zé)任公司；b.批號(hào)：20050702，規(guī)格：5 ml∶20mg，山東海山藥業(yè)有限公司；c.批號(hào)：060110，規(guī)格：2 ml∶25 mg，南寧楓葉藥業(yè)有限公司；d.批號(hào)：040801，規(guī)格：2 ml∶25 mg，上海旭東海普藥業(yè)有限公司；e.批號(hào)：070502，規(guī)格：5 ml∶20 mg，廣東省博羅先鋒藥業(yè)集團(tuán)有限公司）。鱟試劑（a.TAL，批號(hào)：0809091，規(guī)格：0.1 ml/支，標(biāo)示靈敏度：0.25 EU/ml，湛江安度斯生物有限公司鱟試劑；b.TAL，批號(hào)：081124，規(guī)格：0.1 ml/支，標(biāo)示靈敏度：0.25 EU/ml，廈門市鱟試劑實(shí)驗(yàn)廠有限公司鱟試劑）。細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE，批號(hào)：150601-200860，效價(jià)：160 EU/支，中國(guó)藥品生物制品檢定所）。內(nèi)毒素檢查用水（BET 水，批號(hào)：0801180，規(guī)格：50 ml，湛江安度斯生物有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 細(xì)菌內(nèi)毒素限值的確定[4]

按《中國(guó)藥典》2005年版二部中細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的規(guī)定，根據(jù)公式L=K/M，式中L為供試品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值，K為按規(guī)定的給藥途徑，人用每公斤體重每小時(shí)最大可接受的內(nèi)毒素劑量，注射劑K=5 EU/（kg·h），M為人用每公斤體重每小時(shí)的最大供試品劑量，人均體重按60 kg計(jì)算，注射時(shí)間若不足1 h，按1 h計(jì)算。

本品收載于國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-（X-078）-2004Z，規(guī)格：5 ml∶20 mg、2 ml∶25 mg、2 ml∶20 mg、1 ml∶10 mg， 熱原劑量為1 mg/kg。根據(jù)單硝酸異山梨酯注射液說(shuō)明書的用法用量，靜脈滴注一般有效劑量：每小時(shí) 2～7 mg，一般速度：60～120 μg/min，本品的 M=7 mg/（60 kg·1 h）=0.12 mg/（kg·h）。 K 為 5 EU/（kg·h），本品用于心血管藥、兒童老人用藥，根據(jù)《注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則》（修訂稿）的要求安全系數(shù)定為3，按公式L=K/M計(jì)算，則L=14 EU/mg。

2.2 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)

按照《中國(guó)藥典》2005年版二部附錄ⅪE“鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)”項(xiàng)下進(jìn)行，結(jié)果見(jiàn)表1。2批鱟試劑靈敏度分別為0.18、0.25 EU/ml，均在 0.50～2.00 范圍內(nèi)，靈敏度符合規(guī)定，可用于細(xì)菌內(nèi)毒素檢查。

表1 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)Tab.1 Sensitivity test of tachypleus amebocyte lysate

單硝酸異山梨酯注射液有效稀釋濃度（MVC）的計(jì)算[5-6]根據(jù)公式MVC=λ/L，其中L為內(nèi)毒素限值14 EU/mg，λ為鱟試劑標(biāo)示靈敏度，目前市售鱟試劑靈敏度范圍為0.50～0.03 EU/ml，則單硝酸異山梨酯注射液對(duì)應(yīng)的有效稀釋濃度分別為0.040 0、0.020 0、0.010 0、0.005 0、0.002 5 mg/ml。

2.3 干擾預(yù)試驗(yàn)[7]

用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水將單硝酸異山梨酯注射液分別稀釋至 0.040 0、0.020 0、0.010 0、0.005 0、0.002 5 mg/ml的濃度，將此系列稀釋液記為NPC系列，同時(shí)在上述系列的試驗(yàn)液中加入2λ濃度的細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，記為PPC系列。取靈敏度為0.25 EU/ml的兩個(gè)廠家的鱟試劑，分別與上述NPC、PPC系列進(jìn)行反應(yīng)，每一濃度重復(fù)兩管，并設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。結(jié)果見(jiàn)表2、3。

表2 單硝酸異山梨酯注射液的干擾預(yù)試驗(yàn)1Tab.2 Results of prerliminary interference test of Isosorbide Mononitrate Injection 1

表3 單硝酸異山梨酯注射液的干擾預(yù)試驗(yàn)2Tab.3 Results of prerliminary interference test of Isosorbide Mononitrate Injection 2

由以上干擾預(yù)試驗(yàn)結(jié)果可以初步了解，兩個(gè)廠家鱟試劑對(duì)單硝酸異山梨酯注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素的試驗(yàn)結(jié)果均在0.04 mg/ml以下濃度時(shí)無(wú)干擾。

2.4 干擾試驗(yàn)

為了最終確認(rèn)無(wú)干擾因素，進(jìn)行以下干擾試驗(yàn)。將單硝酸異山梨酯注射液用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水進(jìn)行稀釋，使其最終濃度為0.02 mg/ml，按照《中國(guó)藥典》2005年版二部附錄中的“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查供試頻干擾試驗(yàn)”項(xiàng)下進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表 4、5。

表4 單硝酸異山梨酯注射液的干擾試驗(yàn)1Tab.4 Results of interference test of Isosorbide Mononitrate Injection 1

表5 單硝酸異山梨酯注射液的干擾試驗(yàn)2Tab.5 Results of interference test of Isosorbide Mononitrate Injection 2

5批單硝酸異山梨酯注射液用兩個(gè)廠家生產(chǎn)的鱟試劑進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果單硝酸異山梨酯注射液0.02 mg/ml稀釋溶液對(duì)兩個(gè)廠家生產(chǎn)的鱟試劑無(wú)干擾作用，Es/Et均在0.5～2.0范圍內(nèi)。

2.5 樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

取9個(gè)廠家生產(chǎn)的22批單硝酸異山梨酯注射液，分別稀釋到0.02 mg/ml，使用兩個(gè)廠家的靈敏度均為0.25 EU/ml的鱟試劑，按照《中國(guó)藥典》2005年版二部附錄“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”進(jìn)行檢查，結(jié)果全部符合規(guī)定。由此可得結(jié)論，單硝酸異山梨酯注射液稀釋到0.02 mg/ml時(shí)對(duì)鱟試劑與內(nèi)毒素凝集反應(yīng)無(wú)干擾作用，可適用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。

3 討論

本品單硝酸異山梨酯注射液收載于國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-（X-078）-2004Z，規(guī)格：5 ml∶20 mg、2 ml∶25 mg、2 ml∶20 mg、1 ml∶10 mg?，F(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定為熱原檢查，劑量為1 mg/kg。目前本品無(wú)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)，如采用鱟試劑法來(lái)控制細(xì)菌內(nèi)毒素，操作簡(jiǎn)易且結(jié)果可靠。從干擾預(yù)試驗(yàn)和正式干擾試驗(yàn)可知，單硝酸異山梨酯注射液對(duì)鱟試劑無(wú)干擾的有效濃度范圍在0.04 mg/ml以下，在此濃度范圍內(nèi)，可用靈敏度為0.25 EU/ml的鱟試劑進(jìn)行檢驗(yàn)。由于不同廠家生產(chǎn)的鱟試劑其抗干擾能力存在差異，所以本實(shí)驗(yàn)采用了兩個(gè)廠家鱟試劑進(jìn)行干擾試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，單硝酸異山梨酯注射液稀釋到0.02 mg/ml時(shí)對(duì)鱟試劑與內(nèi)毒素凝集反應(yīng)無(wú)干擾作用，可適用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。因此，本品采用限值14 EU/mg進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法代替熱原檢查法是可行的。

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[3]宋文宣,張七一,孫王安,等.實(shí)用心血管病藥學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:553-554.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].二部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:Ⅺ E.

[5]中國(guó)藥品生物制品檢定所.中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2005:287-297.

[6]潘正興,宋勤.注射用奧美拉唑鈉細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法[J].藥物分析雜志,2008,28(2):275-277.

[7]王慧明,陳邦樹(shù).胞磷膽堿鈉注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法[J].中國(guó)藥師,2005,8(9):793.