王 麟， 袁 珂， 劉華亮

（1.浙江林學(xué)院天然藥物研發(fā)中心，浙江臨安 311300;2.河南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，河南鄭州 450008）

厚樸為木蘭科植物厚樸Magnolia officinaisRehd.et Wils.或凹葉厚樸Magnolia officinalisRehd.et Wils.var.biloba Rehd.et Wils.的干燥干皮、根皮及枝皮［1］。厚樸載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，又名厚皮、川樸、紫油厚樸。性溫，味苦、辛，具有燥濕消痰、下氣除滿的功能。生品性味峻烈，具有抗菌、消炎、抗胃潰瘍、抗氧化等作用［2］，厚樸生用辛辣，有“棘人喉舌”的副作用，在臨床上較少生用，姜制后可消除對咽喉的刺激性，同時可增強寬中和胃的作用。厚樸中的主要成分厚樸酚與和厚樸酚為聯(lián)苯型木脂素類［3］，以游離態(tài)與植物膠、樹脂等脂溶性成分共存。姜制厚樸的炮制方法目前應(yīng)用的主要有姜炙法和生姜汁煮法［4－6］。厚樸的炮制方法繁多，厚樸歷代炮制方法有凈制、切制、炒制、輔料制幾大類，超過16種炮制方法。事實上厚樸的姜制方法各地也不盡統(tǒng)一，有姜汁拌后炒的，有姜汁拌后蒸的，有姜汁拌后煮的，也有拌姜汁燜潤后直接烘干的。在實際生產(chǎn)過程中姜炙法的煙塵污染較為嚴重，生姜汁煮法的加工時間過長。而微波炮制是近年來快速發(fā)展的一種新技術(shù)，具有無污染、快速、高效、安全、節(jié)能、質(zhì)量易控等優(yōu)點，尤其是短時快速，可以避免物料長時間高溫加熱引起的有效成分分解等特點，已被廣泛應(yīng)用于多種植物的提取，干燥、炮制等并取得了顯著成效。故本實驗對姜厚樸的微波炮制工藝進行了優(yōu)化研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器與試劑 Waters 2695液相分離單元（在線脫氣機、自動進樣器、四元梯度泵、柱溫箱），Waters 2996 PDA檢測器，微量分析天平（EETTLER AE 240瑞士，十萬分之一）（METTLER），色譜純甲醇（天津四友公司），Millipore Simplicity型超純水器（美國Millipore公司），NJL07－3型實驗專用微波爐（南京杰全微波設(shè)備有限公司，額定功率800W），KQ2200DE數(shù)控超聲儀，AUTO SCIENCE溶劑過濾裝置，微孔濾膜（上海醫(yī)藥工業(yè)研究院）。森信DGG－9240A型干燥箱、娃哈哈純凈水，其他試劑均為分析純。

1.2 對照品及藥材 厚樸酚對照品:中國藥品生物制品檢定所（批號:110729－200310）;和厚樸酚對照品:中國藥品生物制品檢定所（批號:110730－200307）。厚樸藥材于2007年5月采自浙江龍泉，經(jīng)浙江林學(xué)院林業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院遺傳學(xué)科斯金平教授鑒定為木蘭科植物厚樸Magnolia officinaisRehd.et Wils.的干燥樹皮。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Waters Xbridge ODS C18柱;流動相:MeOH－H2O（78∶22）;柱溫:25 ℃;檢測波長:294 nm;流速:1 mL/min。

2.2 含量測定方法的建立

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱定厚樸酚對照品2.60 mg、和厚樸酚對照品0.97 mg，分別置25 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，過0.45 μm微孔濾膜，即得對照品溶液。

2.2.2 微波炮制品及厚樸生品溶液的制備 取按照最佳工藝進行微波炮制所得的炮制品與厚樸生品粉末（過三號篩）各約0.2 g，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，搖勻，密塞，浸漬24 h，濾過。精密量取續(xù)濾液5 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得微波炮制品及厚樸生品溶液。

2.2.3 傳統(tǒng)炮制品溶液的制備 取厚樸絲，加姜汁拌勻，悶潤，待姜汁被吸盡后，置炒制容器內(nèi)用文火加熱，炒干，取出晾涼。取本品粉末（過三號篩）約0.2 g，精密稱定，按照供試品溶液的制備方法制備，得到傳統(tǒng)炮制品溶液。

2.2.4 標準曲線的繪制 取厚樸酚對照品溶液2、5、10、15、20 μL，和厚樸酚對照品溶液 1、2、5、10、20 μL分別注入高效液相色譜儀中，按上述色譜條件測定。以峰面積積分值為縱坐標，對照品含量為橫坐標繪制標準曲線。計算厚樸酚與和厚樸酚的回歸方程分別為:Y=1.68×106X－1.19×104，r=0.999 9;Y=1.73×106X－4×103，r=0.999 9。結(jié)果表明厚樸酚在0.092 8～0.928 μg范圍內(nèi)，和厚樸酚在0.020 4～0.408 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.5 精密度實驗 取對照品溶液10 μL，注入液相色譜儀中，連續(xù)進樣5次，測定峰面積積分值，計算厚樸酚與和厚樸酚的RSD分別為0.62%和0.59%。表明厚樸酚與和厚樸酚精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性實驗 分別在 0、2、4、6、8、10、12 h進同一樣品溶液10 μL，測定峰面積積分值，計算厚樸酚與和厚樸酚的RSD分別為0.84%和0.79%。表明厚樸酚與和厚樸酚在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.7 重復(fù)性實驗 取同一樣品粗粉5份，每份約0.2 g，精密稱定，按照上述供試品溶液的制備方法制備。取供試品溶液10 μL注入高效液相色譜儀，測定厚樸酚與和厚樸酚峰面積積分值，計算RSD分別為1.93%和1.39%。

2.2.8 加樣回收率實驗 取已知含量的姜炙厚樸粉末約0.1 g，精密稱定，分別加入厚樸酚與和厚樸酚對照品適量，按供試品溶液的制備方法制備。取樣品供試液10 μL，注入液相色譜儀，測定峰面積積分值，計算厚樸酚與和厚樸酚的回收率分別為99.08%和98.87% ，RSD分別為1.98%和1.69%。

2.2.9 樣品的含量測定 依次進微波炮制品、厚樸生品溶液及傳統(tǒng)炮制品溶液各10 μL于高效液相色譜儀中，按照前述色譜條件測定峰面積積分值，計算各供試品溶液中厚樸酚與和厚樸酚的含量（以總酚含量計），結(jié)果厚樸傳統(tǒng)炮制品中厚樸酚與和厚樸酚（總酚）的平均含量為18.708 83 mg/g，RSD為1.64%;而微波炮制品中厚樸酚與和厚樸酚（總酚）的平均含量為20.78 mg/g，RSD為2.44%;厚樸生品中厚樸酚與和厚樸酚（總酚）的平均含量為24.64 mg/g，RSD為2.13%，對照品和樣品的色譜圖見圖1。

圖1 對照品及樣品色譜圖

2.3 正交設(shè)計 選用L9（34）正交方案，以炮制品 中厚樸酚與和厚樸酚（總酚）的含量為考察指標，采用生姜用量、微波功率、加熱時間3個因素，每個因素3個水平進行實驗，以優(yōu)選出微波法的最佳炮制工藝，取9份厚樸藥材，每份取樣500 g，結(jié)果見表1、表2 和表3。

表1 因素水平表

表2 L9（34）正交試驗表

表3 方差分析結(jié)果

3 討論

3.1 從直觀分析表可以看出，各因素對實驗結(jié)果重要性為微波功率＞加熱時間＞生姜用量。方差分析結(jié)果表明，微波功率和加熱時間對姜制厚樸炮制品中總酚含量的影響有顯著意義（P＞0.05），而生姜用量的影響較少（P＜0.05）。因此微波炮制姜厚樸的最佳工藝為A2B2C2，即生姜用量10%，微波功率550 W，微波時間15 min。

3.2 通過與傳統(tǒng)炮制品比較可知，傳統(tǒng)炮制法生產(chǎn)過程中炮制火候、溫度、時間等較難掌握，溫度過高則產(chǎn)品易焦糊，過低則產(chǎn)品含水量較高，且費工費時。而按照最佳工藝加工出的微波炮制品的總酚含量高于傳統(tǒng)炮制品，且外觀更加美觀，雜質(zhì)較少，炮制過程中的各項參數(shù)簡便可控，無傳統(tǒng)姜炙過程中的煙塵污染，不對生產(chǎn)人員的身體健康造成傷害?？梢?，微波法炮制姜制厚樸的工藝合理可行，建立的HPLC方法準確，重復(fù)性好，適用于厚樸飲片的質(zhì)量控制。

［1］中國藥典［S］.一部.2005:205.

［2］李杰萍，梁 統(tǒng)，周克元，等.厚樸酚對趨化三肽激活的大鼠中性粒細胞功能的影響［J］.中國藥科大學(xué)學(xué)報，2003，34（3）:260－263.

［3］黃文華，郭寶林，斯金平.不同種源厚樸酚性成分的HPLC圖譜研究［J］. 中國中藥雜志，2005，30（13）:968－971.

［4］中國藥典［S］.一部.2005:196.

［5］歐陽榮，周新蓓，胡鐵驪，等.厚樸生片及5種不同炮制品的質(zhì)量比較［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報，2007，13（10）:19－21.

［6］葉定江，原思通.中藥炮制學(xué)辭典［M］.上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2005:469.