張仲林， 臧志和， 鐘 玲， 辛志偉， 楊 勝

（成都醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，四川成都 610083）

六君子湯方出《醫(yī)學(xué)正傳》，由人參、白術(shù)、茯苓、陳皮、半夏和甘草等六味藥組成，具有益氣健脾、燥濕化痰之功，六君子湯或其加減方臨床主要常用于治療功能性消化不良［1－2］。本研究采用的六君子湯系根據(jù)古方六君子湯藥物組成采用現(xiàn)代制劑工藝制備的藥液，并根據(jù)文獻(xiàn)采用飲食控制法復(fù)制脾虛證大鼠動(dòng)物模型，探討六君子湯對(duì)模型大鼠胃腸激素的影響，為臨床應(yīng)用該方治療脾虛證提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 藥物 六君子湯，生藥含量0.8 g/mL，由成都醫(yī)學(xué)院藥物研究所制備，實(shí)驗(yàn)批號(hào)20090306。六君子丸，由山東步長(zhǎng)制藥有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號(hào):國(guó)藥準(zhǔn)字Z37020873，生產(chǎn)批號(hào)20070601。嗎丁啉，西安楊森制藥有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號(hào):國(guó)藥準(zhǔn)字H10910003，生產(chǎn)批號(hào)20070728。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠40只，♀♂各半，體重（200±20）g。由四川醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心提供，合格證號(hào):SCXK川2008－24，于自然光線、自由飲水?dāng)z食條件下適應(yīng)性喂養(yǎng)1周備用。

1.3 主要試劑及儀器 胃泌素（MTL）放免藥盒由北京北方生物技術(shù)研究所提供;胃動(dòng)素（GAS）、血管活性腸肽（VIP）和生長(zhǎng)抑素（SS）藥盒均由北京科銳生物技術(shù)中心提供。小鼠自主活動(dòng)測(cè)試儀，型號(hào)ZZ－6，由成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)。

2 方法

取SD大鼠50只，隨機(jī)等分為5組:正常對(duì)照組、脾虛模型組、嗎丁啉組、六君子丸組和六君子湯組，各組10只。按照文獻(xiàn)［3］方法復(fù)制大鼠脾虛動(dòng)物模型，10 d后各組分別灌喂生理鹽水、生理鹽水、嗎叮啉、六君子丸和六君子湯藥液10 mL/kg。連續(xù)5 d，實(shí)驗(yàn)第15天，用電子天平測(cè)定每只大鼠24 h攝食量、體重，用小動(dòng)物活動(dòng)記錄儀測(cè)定5 min內(nèi)自發(fā)活動(dòng)，觀察大便性狀，逐日記錄觀察一般狀態(tài)變化。第16天股靜脈采血4 mL，分別置于2只試管中，Ⅰ管2 mL，離心（2 000 r/min）5 min，分離血清，置－20℃冰箱保存，待測(cè)血清 GAS;Ⅱ管2 mL，管中加入10%NA－EDTA 30 μL 及抑肽酶30 μL，充分混勻，離心（2 000 r/min）5 min，分離取血漿，置－20℃冰箱保存，待測(cè)血漿MTL、VIP、SS。按照藥盒規(guī)定要求，采用放射免疫法（RIA）測(cè)定血清 GAS，血漿 MTL、VIP、SS。結(jié)果用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，組間比較用單因素方差分析。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)脾虛大鼠一般狀態(tài)的影響 脾虛證大鼠于造模后出現(xiàn)豎毛，被毛粗糙無(wú)光澤、拱背、自發(fā)活動(dòng)減少、腹脹。隨后出現(xiàn)被毛枯槁，倦臥嗜唾、活動(dòng)明顯減少，四肢乏力，腹脹明顯，便少而干或便溏，肛周污穢;與正常對(duì)照組比較有極顯著性差異（P＜0.01，P＜0.00 1）。經(jīng)六君子湯治療后，動(dòng)物以上癥狀逐漸減退或消失，攝食量增加，大便恢復(fù)正常，自發(fā)活動(dòng)與體重均明顯增加，與脾虛模型組比較有顯著性或極顯著性異（P＜0.05，P＜0.01）。結(jié)果詳見(jiàn)表1、表2。

3.2 六君子丸對(duì)脾虛大鼠胃動(dòng)素（MTL）和胃泌素（GAS）的影響 造模后模型組大鼠血漿MTL和血清GAS含量與正常對(duì)照組相比明顯下降（P＜0.05），經(jīng)六君子湯治療后，大鼠MTL含量有上升的趨勢(shì)，但與模型組相比無(wú)顯著意義;大鼠GAS含量明顯提高，與模型組相比有顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)果詳見(jiàn)表3。

3.3 六君子丸對(duì)脾虛大鼠血管活性腸肽（VIP）和生長(zhǎng)抑素（SS）的影響 造模后模型組大鼠的VIP含量顯著升高，與正常組比較有極顯著性差異（P＜0.01），經(jīng)六君子湯治療后大鼠的血漿VIP含量顯著降低，與模型組比較有極顯著性差異（P＜0.01）。SD大鼠造模后，模型組大鼠血漿SS的含量顯著降低，與正常組比較有極顯著性差異（P＜0.01），經(jīng)六君子湯治療后大鼠血漿SS含量顯著上升，與模型組比較有顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)果詳見(jiàn)表4。

表1 六君子丸對(duì)脾虛大鼠攝食量、自發(fā)活動(dòng)、體重的影響（±s，n=10，15 d）

表1 六君子丸對(duì)脾虛大鼠攝食量、自發(fā)活動(dòng)、體重的影響（±s，n=10，15 d）

注:與正常對(duì)照組比較，△△P＜0.01，△△△P ＜0.001;與脾虛模型組比較，*P＜0.05，**P ＜0.01，***P ＜0.001。

/g正常對(duì)照組 等容積組別 劑量/（g/kg） 攝食量/（g/d） 自發(fā)活動(dòng)數(shù)/5 min 體重NS 220.11±16.35 320.60±25.14 235.00±29.23脾虛模型組 等容積NS 141.26±25.05△△△ 200.16±32.88△△△ 195.60±18.09△△嗎丁啉組 0.02 198.65±17.52*** 261.70±28.03** 266.68±19.87***六君子丸組 6 167.03±9.18** 240.33±45.29* 230.00±37.77*六君子湯組 8 158.14±8.87* 250.55±34.76** 222.53±30.98*

表2 六君子丸對(duì)脾虛大鼠大便性狀的影響（±s，n=10，15 d）

表2 六君子丸對(duì)脾虛大鼠大便性狀的影響（±s，n=10，15 d）

注:與正常對(duì)照比較，△P＜0.05，△△P＜0.05;與脾虛模型組比較，*P＜0.05。

組別 劑量/（g/kg）造模后 治療后便常便少而干便溏正常對(duì)照組 等容積便常便少而干便溏NS 10 0 0 10 0 0脾虛模型組 等容積NS 1 3 6△△ 2 3 5△嗎丁啉組 0.02 0 2 8 9 1 0*六君子丸組 6 0 1 9 5 2 3*六君子湯組 8 0 2 8 6 1 3*

表3 六君子丸對(duì)脾虛大鼠胃泌素（GAS）和胃動(dòng)素（MTL）的影響（±s）

表3 六君子丸對(duì)脾虛大鼠胃泌素（GAS）和胃動(dòng)素（MTL）的影響（±s）

注:與正常對(duì)照組比較，△P＜0.05;與模型組比較，*P＜0.05，**P ＜0.01。

組別 動(dòng)物數(shù)/只劑量/（g/kg）GAS/（pg/mL）MTL/（pg/mL）NS 61.06±13.07 382.15±100.44模型對(duì)照 10 等容積NS 48.04±12.59△293.57±49.88△嗎丁啉組 10 0.02 65.10±9.87**368.65±46.47**六君子丸組 10 6 60.16±7.15* 340.08±40.19六君子湯組 10 8 59.32±8.52* 339.65±29.83正常對(duì)照 10 等容積*

表4 六君子丸膠囊對(duì)脾虛大鼠血管活性腸肽（VIP）生長(zhǎng)抑素（SS）的影響（±s）

表4 六君子丸膠囊對(duì)脾虛大鼠血管活性腸肽（VIP）生長(zhǎng)抑素（SS）的影響（±s）

注:與正常組比較，△△P＜0.01;與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 劑量/（g/kg）動(dòng)物數(shù)/只VIP/（pg/mL）SS/（pg/mL）正常對(duì)照組 等容積NS 10 47.02±13.11 105.54±18.02模型對(duì)照組 等容積NS 10 73.57±18.02△△ 74.87±18.69△△嗎丁啉組 0.02 10 49.75±14.03** 96.58±17.05*六君子丸組 6 10 58.03±9.42* 92.14±11.35*六君子湯組 8 10 54.41±12.25** 95.38±16.19*

4 討論

脾胃學(xué)說(shuō)從宏觀把握脾胃生理病理規(guī)律，疏于微觀;胃腸激素研究詳于微觀，偏缺于整體觀念，兩者結(jié)合無(wú)疑是互補(bǔ)的、創(chuàng)造性的研究思路［4］。脾虛證是中醫(yī)脾胃證候中的常見(jiàn)證型，是因素體脾虛或飲食不節(jié)、情志因素、勞逸失調(diào)等原因引起脾的功能虛衰、不足的病證，以精神疲倦、食后困倦、食欲不振，食后腹脹，大便稀、舌體胖和脈虛弱等為主要臨床癥狀。胃腸激素是由散在分布于消化道的內(nèi)分泌細(xì)胞和腸神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元所分泌的起激素作用的生物活性多肽，這些肽類物質(zhì)主要存在于胃腸道中［5］。許多胃腸激素對(duì)消化道運(yùn)動(dòng)有促進(jìn)或抑制作用，胃泌素（GAS）主要由胃竇及小腸上部黏膜的G細(xì)胞分泌，能強(qiáng)力刺激胃酸、胃蛋白酶的分泌，營(yíng)養(yǎng)胃黏膜，促胃腸肌收縮，從而促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)［6－7］。胃動(dòng)素（MTL）主要由十二指腸和近端空腸黏膜分泌，是參與調(diào)節(jié)胃腸運(yùn)動(dòng)的興奮性腦腸肽，引起平滑肌收縮，調(diào)解胃腸運(yùn)動(dòng)［8］。生長(zhǎng)抑素（SS）由腸壁神經(jīng)叢、胃及胰腺的D細(xì)胞分泌，其分泌活動(dòng)具有明顯的旁分泌性質(zhì)，生理作用主要是對(duì)神經(jīng)傳遞、腺體分泌、平滑肌收縮等廣泛抑制，對(duì)胃腸道的運(yùn)動(dòng)、吸收及胃酸、胃蛋白酶的分泌等功能具有普遍的抑制作用［9］。VIP具有舒張胃腸括約肌，刺激胰液和腸液分泌，保護(hù)腸黏膜，調(diào)節(jié)胃腸吸收等功能［10］。因此，用 GAS、MTL、SS和 VIP等胃腸激素指標(biāo)從微觀層面揭示脾虛證的相關(guān)胃腸運(yùn)動(dòng)機(jī)制，可以賦予傳統(tǒng)中醫(yī)的“脾虛證”以現(xiàn)代科學(xué)含義;并可為中醫(yī)臨床有效治療脾虛證提供胃腸激素評(píng)價(jià)指標(biāo)和依據(jù)。

從現(xiàn)代胃腸病學(xué)角度看，脾虛證主要表現(xiàn)為胃腸運(yùn)動(dòng)減弱，消化功能抑制而出現(xiàn)的系列綜合癥，應(yīng)屬于胃腸動(dòng)力不足的功能性消化不良疾病（fuctional dyspepsia，F(xiàn)D）的范疇［11－12］。本實(shí)驗(yàn)選用外周多巴胺阻滯劑——嗎丁啉作為陽(yáng)性對(duì)照藥，該藥可使胃腸道上部的蠕動(dòng)和張力恢復(fù)正常，促進(jìn)胃竇和十二指腸運(yùn)動(dòng)，協(xié)調(diào)幽門(mén)收縮，為較好的胃腸動(dòng)力藥，可以很好地針對(duì)脾虛證胃腸動(dòng)力不足的病因病理。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，六君子湯能明顯改善脾虛模型大鼠的一般狀態(tài)，顯著升高血漿中MTL、SS的含量，明顯降低血漿VIP含量，有升高血清GAS的趨勢(shì)。結(jié)果提示，六君子湯具有明顯治療脾虛證的作用，其作用機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)節(jié)脾虛證胃腸激素水平來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

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