竇 霞，畢宇安， 王振中，吳 云， 陳寶來(lái)，尚 強(qiáng)， 蕭 偉

（江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，江蘇 連云港 222001）

利膽溶石軟膠囊為江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司研制的中藥復(fù)方新藥，由香葵油、薄荷油等藥味組成，具有清熱利濕、利膽排石之功效，臨床用于膽道結(jié)石、膽道感染等病癥。為了更全面、有效的控制產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量，提高本品的質(zhì)量控制水平，保證臨床用藥的安全及療效，參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的中藥指紋圖譜研究的技術(shù)要求，建立了利膽溶石軟膠囊的氣相指紋圖譜。因?yàn)橹苿┲兄饕煞直『赡X、香葉醇等均為揮發(fā)性成分，所以我們采用氣相色譜法進(jìn)行研究。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)所建立的指紋圖譜方法，重現(xiàn)性好，操作簡(jiǎn)單，同時(shí)也為其他復(fù)方中藥指紋圖譜的研究提供了研究思路［1，2］。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 6890氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測(cè)器。

1.2 試藥 試劑為分析純。薄荷醇對(duì)照品，中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào):0774-9904，含量測(cè)定用)；香葉醇對(duì)照品，美國(guó)SIGMA公司(批號(hào):G-5135)。利膽溶石軟膠囊由江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)(批號(hào):071101)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Agilent 6890氣相色譜儀；用5%二苯基-95%二甲基硅烷共聚物為固定相的毛細(xì)管色譜柱(HP-5:30 m×0.32 mm×0.25 μm)；進(jìn)樣口溫度:240℃；檢測(cè)器溫度(FID):240℃；分流比:50∶1；程序升溫:初始溫度50℃，保持5 min，以每分鐘2℃升至80℃，保持5 min，以每分鐘2℃升至120℃，保持6 min，再以每分鐘10℃升至210℃，保持3 min，測(cè)定；載氣流速:1.5 ml/min；理論板數(shù)按薄荷腦峰計(jì)算，應(yīng)不低于30000。

2.2 參照物的選擇 考慮利膽溶石軟膠囊主要成分為薄荷腦和香葉醇，且薄荷腦含量高，所占峰面積較大，保留時(shí)間也較為適中，所以我們選擇薄荷腦作為參照物。

2.3 參照物溶液的制備 取薄荷腦對(duì)照品適量，精密稱定，加乙酸乙酯制成每1 mL含1.0 mg的溶液，即得。

2.4 供試品溶液的制備 取利膽溶石軟膠囊10粒，內(nèi)容物混勻，取約50 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，加乙酸乙酯至刻度，搖勻，即得。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 精密度試驗(yàn):取樣品(批號(hào):071101)，按供試品溶液的制備方法制備供試品，連續(xù)進(jìn)樣6次進(jìn)行測(cè)定。記錄色譜圖，經(jīng)中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)的操作規(guī)范軟件(版本2004A)計(jì)算，6張圖譜之間的相似度均為1.000，說(shuō)明測(cè)定方法精密度良好。

2.5.2 穩(wěn)定性試驗(yàn):取樣品(批號(hào):071101)，按供試品溶液制備方法制備供試品，分別在 0、3、6、9、12、24 h 測(cè)定，計(jì)算出相似度均為1.000，說(shuō)明供試品溶液在24 h穩(wěn)定。

2.5.3 重復(fù)性試驗(yàn):取樣品(批號(hào):071101)6份，按供試品溶液制備方法制備供試品，進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算出相似度均為1.000。

2.6 指紋圖譜的建立

2.6.1 樣品測(cè)定:取10批利膽溶石軟膠囊，按供試品的制備方法處理，同時(shí)取參照物溶液10 μL記錄色譜圖。將10批利膽溶石軟膠囊指紋圖譜導(dǎo)入中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)的操作規(guī)范軟件(版本2004A)，對(duì)保留時(shí)間7～53 min(溶劑峰剪切:0～7 min、53～60 min)的色譜峰進(jìn)行多點(diǎn)校正后，自動(dòng)匹配，色譜圖見(jiàn)圖1，生成對(duì)照指紋圖譜(見(jiàn)圖2)，共標(biāo)定12個(gè)共有峰，其中薄荷醇為參照峰(S)。各批利膽溶石軟膠囊樣品與對(duì)照指紋圖譜比較相似度在0.969～0.990，平均為0.979，RSD為0.73%，見(jiàn)表1。以7號(hào)峰(薄荷醇)作為指紋圖譜的參比峰，計(jì)算各共有指紋峰相對(duì)于參比峰的相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積的比值。結(jié)果見(jiàn)表2、3。

圖1 10批利膽溶石軟膠囊GC指紋圖譜測(cè)定色譜圖

圖2 利膽溶石軟膠囊氣相指紋圖譜

表1 10批利膽溶石軟膠囊相似度測(cè)定結(jié)果

表2 利膽溶石軟膠囊指紋圖譜中共有峰的相對(duì)保留時(shí)間

表3 利膽溶石軟膠囊指紋圖譜中共有峰的相對(duì)峰面積

2.6.2 指紋圖譜中主要色譜峰的組成藥味歸屬:在相同色譜條件下，測(cè)定了兩個(gè)原料的指紋圖譜。薄荷油原料以薄荷腦(7號(hào)峰)為參照進(jìn)行測(cè)定，共有10個(gè)色譜峰，香葵油原料以香葉醇(8號(hào)峰)作為參照進(jìn)行測(cè)定，共有5個(gè)色譜峰。通過(guò)對(duì)原料及成品的指紋圖譜中各色譜峰相對(duì)保留時(shí)間的比較分析，結(jié)果表明，1、2、3、4、5、6、7(S)、8、9、12 號(hào)峰來(lái)源于薄荷油，其中7(S)峰為薄荷腦；5、6、8、10、11號(hào)峰來(lái)源于香葉油，其中8號(hào)峰為香葉醇，；5，6，8號(hào)峰薄荷油及香葵油均有。見(jiàn)圖2～4。

圖3 薄荷油氣相指紋圖譜

圖4 香葵油氣相指紋圖譜

3 討論

3.1 升溫程序的選擇 考察了不同的氣相色譜分析條件，柱溫是色譜條件的重要參數(shù)，它對(duì)各組分分離的影響很大，為此摸索了以下3種程序升溫條件:(1)起始50℃(維持5 min)，3℃/min升至80℃(維持5 min)，3℃/min升至120℃(維持3 min)，再以10℃/min升至210℃(維持10 min)；(2)起始50℃(維持5 min)，2℃/min升至80℃(維持5 min)，2℃/min升至120℃(維持3 min)，再以10℃/min升至210℃(維持3 min)；(3)起始50℃(維持5 min)，1℃/min升至80℃(維持5 min)，1℃/min升至120℃(維持3 min)，再以20℃/min升至210℃(維持3 min)。結(jié)果表明程序(2)分離較好，保留時(shí)間適中，峰形好。因此選程序(2)作為利膽溶石軟膠囊指紋圖譜測(cè)定的升溫程序。

3.2 毛細(xì)管色譜柱的選擇 選用二根不同生產(chǎn)廠家的毛細(xì)管色譜柱，均為5%二苯基-95%二甲基硅烷共聚物為固定相的毛細(xì)管色譜柱:Agilent HP-5(30 m×25 mm×0.25 μm)；Phenomenex ZB-5(30 m×25 mm×0.25 μm)；進(jìn)行試驗(yàn)篩選，比較分離度和柱效，結(jié)果兩根色譜柱分離效果均較好。

［1］國(guó)家藥品監(jiān)督管理局.中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求［S］.(暫行).2000.

［2］國(guó)家藥典委員會(huì).中藥注射劑指紋圖譜實(shí)驗(yàn)研究技術(shù)指南［S］(試行).2002.

［3］中國(guó)藥典［S］.一部.2005.