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        2007—2009年東莞市屠宰豬體內(nèi)豬鏈球菌2型帶菌情況調(diào)查及分析

        2010-05-18 08:40:48洪偉彬張險(xiǎn)朋黃炳熾
        中國(guó)動(dòng)物檢疫 2010年11期

        洪偉彬,張險(xiǎn)朋,黃炳熾

        (東莞市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心,廣東 東莞 523086)

        豬鏈球菌2型(Streptococcus suis type 2,SS2)是一種重要的人獸共患病病原菌。它不僅可以引起豬的腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎、肺炎、敗血癥和突然死亡,而且可以感染相關(guān)從業(yè)人員,并導(dǎo)致死亡。1991年我國(guó)廣東省首次分離到豬鏈球菌2型[1],此后全國(guó)各地陸續(xù)分離到該細(xì)菌。1998-1999年江蘇省南通地區(qū)暴發(fā)豬鏈球菌2型疫情,并引起20多人感染,死亡14人[2]。2005年7月,四川資陽地區(qū)再次暴發(fā)豬鏈球菌2型疫情,導(dǎo)致34人死亡[3]。給養(yǎng)豬業(yè)和公共衛(wèi)生安全帶來重大危害。鏈球菌可隱性帶菌,扁桃體是豬鏈球菌入侵豬體內(nèi)首先定植的器官,也是豬隱性帶菌的主要部位。通過監(jiān)測(cè)豬群扁桃體內(nèi)SS2的攜帶情況,可了解SS2在豬群內(nèi)的感染。本研究用熒光PCR的方法對(duì)本市屠宰豬體內(nèi)SS2隱性帶菌情況進(jìn)行監(jiān)測(cè),為進(jìn)一步制定鏈球菌病預(yù)防控制措施奠定基礎(chǔ)。

        1 材料與方法

        1.1 樣本采集

        2007—2009年從東莞市各屠場(chǎng)采集豬扁桃體共1893份,冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

        1.2 主要儀器

        ABI7500PCR儀,ECSO生物安全柜,37℃恒溫培養(yǎng)箱,高速冷凍離心機(jī)。

        1.3 主要試劑

        牛肉膏、胰蛋白胨均購(gòu)自廣州環(huán)凱微生物科技有限公司;豬鏈球菌2型熒光PCR檢測(cè)試劑盒(中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司批號(hào):2008002;2009001);其它化學(xué)試劑均為分析純。

        1.4 細(xì)菌培養(yǎng)

        以無菌操作取扁桃體25 g,加入裝有225mL滅菌選擇性THB增菌液的廣口瓶?jī)?nèi),均質(zhì),于36±1℃培養(yǎng)24±2 h。無菌吸取增菌液1mL備用。

        1.5 模板制備

        取培養(yǎng)后的菌液50μL于1.5mL無菌離心管內(nèi),加入50μLDNA提取液充分混勻,100℃恒溫處理10±1min,12000 rpm 離心 5min,備用。

        1.6 PCR擴(kuò)增

        反應(yīng)采用25μL體系,反應(yīng)條件為:94℃3min,1個(gè)循環(huán);93℃30 s,55℃45 s,40個(gè)循環(huán);收集熒光在55℃45s。

        2 結(jié)果

        2.1 不同年份豬鏈球菌2型熒光PCR檢測(cè)結(jié)果

        取 2μL模板 DNA做熒光PCR,部分樣品檢測(cè)見圖1。不同年份屠宰豬體內(nèi)豬鏈球菌2型帶菌情況不同(表1)。2009年帶菌率最高,為74.8%,而2007年為0。

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        2.2 不同季度豬鏈球菌2型熒光PCR檢測(cè)結(jié)果

        各個(gè)季度豬鏈球菌2型陽性率不同,結(jié)果見表2。第二季度和第三季度的陽性率要明顯高于第一季度和第四季度。

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        3 討論

        本研究采用熒光 PCR來監(jiān)測(cè)樣本中的豬鏈球菌2型,與傳統(tǒng)方法相比,熒光 PCR具有快速,敏感性高,特異性強(qiáng),操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn),適合于動(dòng)物防疫部門大規(guī)模的監(jiān)測(cè)。

        本研究所監(jiān)測(cè)樣本來自東莞市各鎮(zhèn)街屠場(chǎng)屠宰豬,因此本文的結(jié)果可以認(rèn)為是來自健康豬群的豬鏈球菌2型帶菌情況調(diào)查。SS2廣泛存在正常豬呼吸道中,活體扁桃體棉拭子檢出率一般在50%以上,而屠宰場(chǎng)豬扁桃體SS2的檢出率可達(dá)100%,豬群是否會(huì)發(fā)生豬鏈球菌病與其帶菌率的高低并無直接關(guān)系[4]。國(guó)內(nèi)不同地區(qū)健康豬體內(nèi)SS2的檢出率差異比較大,有報(bào)道稱江蘇地區(qū)大部分健康豬群的SS2的帶菌率普遍較高,為31.6~77%,平均帶菌率為40.9%[5]。胡杰等[6]用普通PCR的方法對(duì)廣西8個(gè)縣屠場(chǎng)的豬扁桃體樣本進(jìn)行SS2帶菌調(diào)查,平均帶菌率為36.3%。2007年我市尚未出現(xiàn)SS2隱性感染的生豬進(jìn)場(chǎng),2008年屠宰豬的帶菌率達(dá)到37.4%,2009年則高達(dá)74.8%。說明SS2在我市屠宰豬中隱性感染已相當(dāng)普遍;但也不能排除屠場(chǎng)消毒不徹底,使SS2污染屠場(chǎng)環(huán)境,從而使所采樣本受到污染的可能。從縱向來看,每個(gè)季度SS2陽性率也有所不同,以第二季度為最高,第三季度次之。由此可見,帶菌率一定的季節(jié)性。和羅隆澤等人的報(bào)道一致[7]。

        豬鏈球菌2型的毒力因子主要有溶菌酶釋放蛋白(MRP),細(xì)胞外蛋白因子(EF),溶血素(sly),莢膜多糖(cps2A),甘油醛-3-磷酸脫氫酶編碼基因(gapdh),纖連蛋白/血纖蛋白原結(jié)合蛋白(FBPS)和orf2毒力相關(guān)基因等[8-9]。這些毒力因子都可以影響SS2的毒力。Vecht U等[10]研究發(fā)現(xiàn),并不是所有的SS2菌株都致病,而是存在著強(qiáng)致病力、弱致病力以及無致病力菌株,并依此將其分為三個(gè)型,即 MRP+EF+、MRP+EF-、MRP-EF-,且從健康豬分離的菌株86%為MRP-EF-,即無致病力毒株。羅隆澤等[10]通過調(diào)查發(fā)現(xiàn),四川資陽地區(qū)健康豬攜帶的2型豬鏈球菌是高致病性菌株(MRP+EF+),與同期病人分離株具有一致的生物學(xué)特征,是引起豬或人發(fā)病的重要傳染源。本研究發(fā)現(xiàn)在2009年東莞市屠宰豬群的SS2平均帶菌率達(dá)到了74.8%,帶菌率非常高。但究竟是屬于SS2的哪種表型,以及哪種表型比較多,尚需進(jìn)一步的研究。

        通過對(duì)東莞市屠宰豬SS2帶菌率的監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn),目前SS2隱性帶菌在我市屠宰豬中已相當(dāng)普遍,對(duì)我市人民的健康是一個(gè)潛在威脅。因此,需進(jìn)一步搞清楚它們的致病性,以便制定有針對(duì)性的預(yù)防和控制措施,保護(hù)人民群眾健康。

        [1]黃毓茂,黃引賢,余志東,等.2型豬鏈球菌的初步研究[J].中國(guó)畜禽傳染病,1993,(5):1-3.

        [2]姚火春,陳國(guó)強(qiáng),陸承平,等.豬鏈球菌1998分離株病原特性鑒定[J].南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),1999,22(2):67-70.

        [3]李卓,孫光,楊木,等.豬鏈球菌病及其防治[J].畜牧獸醫(yī)科技信息,2005(8):14-15.

        [4]何孔旺,陸承平,倪艷秀,等.PCR方法檢測(cè)2型豬鏈球菌2種毒力因子[J].揚(yáng)州大學(xué)學(xué)報(bào):農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版,2002,23(3):1-4.

        [5]何孔旺,倪艷秀,王繼春,等.豬鏈球菌2型分子流行病學(xué)研究[J].中國(guó)人獸共患病雜志,2002,18(5):45-47.

        [6]胡杰,劉棋,陸承平.廣西屠宰豬的豬鏈球菌2型分子流行病學(xué)調(diào)查[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,2008,44(10):37-38.

        [7]羅隆澤,王鑫,崔志剛.四川資陽地區(qū)健康豬2型豬鏈球菌分離與分子生物學(xué)特征分析[J].中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào),2009,25(9):842-845.

        [8]Jacobs A A,Loeffen W,Vanden-Berg A,et al.Identifcation,purification and characterrization of a thiolactvated hemolysin (suilysin)of Streptococcus suis [J].Infect Immun, 1994,62:1742-1748.

        [9]Smith H E,Daraman M,Vander Velde J,et al.Identification and characterization of the cpslocus of Streptococcus suis serotype2:the capsule protects against phagocytosis and is an important virulence factor[J].Infect Immun,1999,67(4):1750-1756.

        [10]Vecht U ,Wisselink H J,Jellema M L,et al.Identification of two proteins associated with virulence of the Streptococcus suis type 2[J].Infect Immun,1991,59:3156-3162.

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