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        動(dòng)物乳桿菌發(fā)酵液的體外抑菌試驗(yàn)

        2010-05-10 06:15:10
        四川畜牧獸醫(yī) 2010年6期
        關(guān)鍵詞:指示菌過氧化氫發(fā)酵液

        羅 璠

        (西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,四川 成都 610041)

        乳酸菌分布廣泛,是存在于人、畜腸道中的一種有益微生物。許多乳酸菌都能產(chǎn)生有機(jī)酸、過氧化氫以及乳酸菌素等化合物,這些物質(zhì)在抑制多種病原微生物和食物腐敗菌等方面具有重要意義,不僅可抑制與其親緣關(guān)系相近的乳酸菌,而且對(duì)非乳酸菌的革蘭氏陽性細(xì)菌也具有一定的抑制作用。因此,乳酸菌在醫(yī)藥、食品及飼料工業(yè)中有著廣泛的應(yīng)用。

        本試驗(yàn)以分離自豬腸道的動(dòng)物乳桿菌T12為試驗(yàn)材料,測(cè)定其發(fā)酵液中各種化合物的抑菌效果,為開發(fā)新的食品添加劑及微生物飼料添加劑提供一定的理論基礎(chǔ)。

        1 材料

        1.1 樣品菌株 動(dòng)物乳桿菌T12,分離自豬腸道,能夠產(chǎn)生乳酸菌素。

        1.2 指示菌 大腸桿菌,鼠傷寒沙門氏菌,金黃色葡萄球菌,枯草芽孢桿菌,蠟狀芽孢桿菌,溶壁微球菌,黃曲霉,禾谷鐮刀霉,米曲霉,保加利亞乳桿菌,嗜酸乳桿菌,異常漢遜酵母。

        以上菌株均由四川省資源微生物與微生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供。

        1.3 培養(yǎng)基 改良MRS培養(yǎng)基:大豆蛋白胨10.0 g,牛肉膏10.0g,酵母提取物5.0g,葡萄糖20.0g,乙酸鈉5.0 g,檸檬酸二胺 2.0 g,K2HPO42.0 g,MgSO4·7H2O 0.58g,Mn2SO4·H2O 0.25g,瓊脂 15.0g,蒸餾水 1.0L,pH值自然;牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。

        2 試驗(yàn)方法

        2.1 發(fā)酵液制備 將保存的動(dòng)物乳桿菌T12菌種接種到MRS液體培養(yǎng)基中,30℃活化24h,再轉(zhuǎn)入液體培養(yǎng)基中相同條件下培養(yǎng)48h,8000r/min離心,取發(fā)酵上清液放冰箱中備用。

        2.2 發(fā)酵液pH值的測(cè)定 用pH儀準(zhǔn)確測(cè)定發(fā)酵液的pH值。

        2.3 發(fā)酵液的抑菌譜研究 采用牛津杯法測(cè)定發(fā)酵液對(duì)各指示菌的抑菌作用,以未接種的MRS液體培養(yǎng)基為對(duì)照,每種指示菌做三次重復(fù)。

        2.4 酸影響的排除及排酸后發(fā)酵液的抑菌效果 用乳酸調(diào) MRS液體培養(yǎng)基的 pH 值至 3.5、4.0、4.5、5.0、5.5和6.0,分別測(cè)定其對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌效果,確定對(duì)照pH值。

        用1 mol/L NaOH和1 mol/L HCl將發(fā)酵液的pH值調(diào)至對(duì)照pH值,測(cè)定該發(fā)酵液對(duì)指示菌的抑制作用,每種指示菌做三次重復(fù),以乳酸調(diào)MRS液體培養(yǎng)基至相同pH值為對(duì)照。

        2.5 過氧化氫影響的排除及其對(duì)抑菌效果的影響H2O2對(duì)熱不穩(wěn)定,80℃水浴10 min可以完全除去H2O2。將除酸后的試驗(yàn)菌株發(fā)酵液在80℃水浴10min,測(cè)定其抑菌譜。

        3 試驗(yàn)結(jié)果

        3.1 發(fā)酵液的pH測(cè)定 用pH儀測(cè)定動(dòng)物乳桿菌發(fā)酵液的pH值為3.69。

        3.2 抑菌譜測(cè)定 采用牛津杯法測(cè)定動(dòng)物乳桿菌T12發(fā)酵液對(duì)不同指示菌的抑制效果,結(jié)果表明,發(fā)酵液對(duì)革蘭氏陰性細(xì)菌及革蘭氏陽性細(xì)菌、乳酸菌均有一定的抑菌效果,對(duì)黃曲霉和米曲霉也有一定的抑制作用。詳見表1。

        表1 發(fā)酵液的抑菌譜

        3.3 排除酸影響后的發(fā)酵液的抑菌譜 乳酸對(duì)指示菌的抑制效果見表2。

        從表2可以看出,乳酸在pH 4.5時(shí)對(duì)兩種指示菌的抑菌效果已經(jīng)很弱了,在pH 5.0時(shí)抑菌效果完全消失。根據(jù)參考文獻(xiàn),選擇pH 5.0作為對(duì)照pH值。

        調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH值至5.0后,發(fā)酵液的抑菌譜較調(diào)酸前有一定的變化,說明有機(jī)酸起到了一定的抑制作用。除酸后發(fā)酵液仍有抑菌效果,說明發(fā)酵液中除了有機(jī)酸還有其他抑菌物質(zhì)存在。根據(jù)研究報(bào)道,其中的乳酸菌素可能是重要的抑菌物質(zhì)之一。

        表2 乳酸對(duì)指示菌的抑制效果

        表2 排酸后發(fā)酵液的抑菌譜

        3.4 除過氧化氫后的發(fā)酵液的抑菌譜 試驗(yàn)結(jié)果顯示,除去過氧化氫后的發(fā)酵液的抑菌譜與除酸后的發(fā)酵液的抑菌譜沒有變化。說明過氧化氫在本試驗(yàn)菌株的發(fā)酵液中沒有起到明顯的抑制作用。根據(jù)報(bào)道,過氧化氫有一定的抑菌作用,而在本試驗(yàn)中沒發(fā)現(xiàn)其明顯的抑制作用,可能是因?yàn)樗诎l(fā)酵液中的含量較少,也可能是因?yàn)槠渌志镔|(zhì)的抑菌效果掩蓋了過氧化氫的抑制作用。

        4 結(jié)論

        乳酸菌的抑菌活性往往是其代謝產(chǎn)生的酸、過氧化氫及細(xì)菌素類物質(zhì)所產(chǎn)生的作用。本試驗(yàn)所采用的動(dòng)物乳桿菌T12的發(fā)酵上清液有較強(qiáng)的抑菌活性,在排除酸作用后,對(duì)指示菌仍有較強(qiáng)抑制作用,而過氧化氫的抑菌效果不明顯。說明動(dòng)物乳桿菌產(chǎn)生的有機(jī)酸和乳酸菌素對(duì)多種微生物有明顯的抑制作用,兩者共同作用的抑菌效果明顯強(qiáng)于乳酸菌素的單獨(dú)作用。過氧化氫在此次試驗(yàn)中的抑菌作用不明顯。

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