李愛青 焦榕芳 劉潔 曾怡

（南昌大學(xué)第四附屬醫(yī)院 江西南昌330003）

生殖免疫學(xué)觀點認(rèn)為，妊娠是一種成功的半同種移植，而流產(chǎn)被設(shè)想為半同種移植的失敗，妊娠的成功有賴于妊娠婦女對胚胎半同種抗原免疫耐受。近年來很多研究表明CD4+CD25+Tr細(xì)胞在人類體內(nèi)對誘導(dǎo)和維持免疫耐受起著中樞作用[1]?，F(xiàn)代中醫(yī)臨床和實驗證明中醫(yī)中藥具有調(diào)節(jié)內(nèi)分泌免疫等多系統(tǒng)功能，補腎健脾法為傳統(tǒng)的安胎治法，臨床證明切實有效。本研究觀察補腎健脾對URSA患者治療前后外周血CD4+CD25+Tr表達(dá)頻率的變化，探討補腎健脾中藥在安胎治療中發(fā)揮的免疫調(diào)節(jié)作用，為補腎健脾法安胎治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對象 URSA患者20例，2008年1月～2009年12月就診于南昌大學(xué)第四附屬醫(yī)院，年齡（28.3±3.59）歲，中醫(yī)辨證為脾腎兩虛型。入選標(biāo)準(zhǔn)：(1)流產(chǎn)次數(shù)2次或2次以上。(2)夫婦雙方和(或)胚胎染色體正常，無家族遺傳病史。(3)婦科檢查、超聲檢查和(或)子宮輸卵管造影等檢查排除器質(zhì)性病變和生殖器官解剖畸形。(4)月經(jīng)周期正常，基礎(chǔ)體溫雙相，超聲監(jiān)測排卵正常。(5)男方精液分析正常。(6)性激素、甲狀腺功能、空腹血糖、胰島素等內(nèi)分泌檢查均正常。(7)排除生殖道感染性疾病，如假絲酵母菌、支原體、衣原體等感染。(8)自身抗體包括：抗核抗體(ANA)、抗可提取核抗原(ENA)抗體、抗心磷脂抗體(ACL)。(9)與血凝有關(guān)的檢查：包括血小板聚集實驗(PagT)、D-二聚體、血小板顆粒膜蛋白-140（GMP-140)、血凝系列、全血分析均正常。(10)巨細(xì)胞病毒、弓形蟲等病原體檢查為陰性。(11)全身免疫功能狀態(tài)檢查，包括IgG、IgM、IgA、C3、C4、CH50、B 因子均正常。

1.2 實驗方法

1.2.1 服藥及采血時間 孕前2個月開始服用補腎健脾中藥（補腎固沖丸為基礎(chǔ)方隨證加減），月經(jīng)周期第5天開始服藥，20d為1個療程，第3個月鼓勵患者自然受孕，受孕后連續(xù)服藥至孕3個月，B超顯示有胎心胎動，隨訪至妊娠結(jié)束。服中藥前及孕2個月時分別抽取患者外周血1mL進(jìn)行流式細(xì)胞檢測，治療過程中失敗者流產(chǎn)時抽血檢測。

1.2.2 流式細(xì)胞檢測方法 抽取外周靜脈血1mL 48h內(nèi)檢測，取肝素抗凝血50μL加入CD4-PE(BD PharMingen,USA)及CD25-FITC(BD PharMingen，USA)各 5μL，混勻，室溫下避光 15min；加入 1mL紅細(xì)胞裂解液，混勻，室溫下避光10min；以1 000r/min離心5min，棄上清，懸浮細(xì)胞，PBS液1mL洗滌；以1 000r/min離心5min，棄上清，懸浮細(xì)胞，上機檢測。

2 結(jié)果

補腎健脾安胎后URSA外周血中CD4+CD25+Tr表達(dá)頻率較治療前明顯升高，差異有顯著性意義（P＜0.05），CD25+mean即 CD25+平均熒光強度差異無顯著性（P＞0.05），CD4+CD25+/CD4+較治療前升高（P＜0.05）。URSA患者中藥治療后，其中10例保胎成功，5例患者妊娠后再次流產(chǎn)，成功妊娠者CD4+CD25+Tr細(xì)胞表達(dá)頻率顯著高于妊娠失敗者（P＜0.05）。見表1。

表1 20例URSA患者中藥治療前后CD4+CD25+Tr表達(dá)頻率的比較 (±S)

表1 20例URSA患者中藥治療前后CD4+CD25+Tr表達(dá)頻率的比較 (±S)

注：治療前后比較，*P ＜0.05，△P ＞0.05。

CD4+CD25+(%) CD25+mean CD4+CD25+/CD4+20） 7.32±1.57 21.36±3.67 3.96±1.46治療后（n=20） 11.23±3.58* 23.12±3.252△ 5.69±1.67*

3 討論

隨著生殖免疫學(xué)科的興起，發(fā)展，中西醫(yī)結(jié)合學(xué)者對流產(chǎn)的免疫學(xué)病因病理、診斷及治療進(jìn)行較為系統(tǒng)研究。復(fù)發(fā)性流產(chǎn)中醫(yī)學(xué)屬“滑胎”范疇，流產(chǎn)主要源于腎不載胎，脾失攝養(yǎng)，對流產(chǎn)的治療除注重補腎外還必健脾益氣，使脾與腎、先天與后天相互促進(jìn)以固胎元。生殖免疫學(xué)角度的研究發(fā)現(xiàn)，補腎益氣安胎中藥可能通過雙相調(diào)節(jié)Th細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的平衡，來調(diào)控母胎界面免疫內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)以維持妊娠[2]，補腎健脾藥可以增強母胎保護(hù)性免疫功能，降低母胎損壞性免疫功能，調(diào)節(jié)內(nèi)分泌，對妊娠細(xì)胞因子有著重要影響[3,4]。本研究著重從補腎健脾法入手，采用補腎固沖丸為基礎(chǔ)方補腎健脾調(diào)沖任以安胎，方中菟絲子、續(xù)斷、巴戟天、杜仲、鹿角霜補腎固沖；當(dāng)歸、熟地、枸杞、阿膠養(yǎng)肝滋血；黨參、白術(shù)、大棗補脾益氣；砂仁理氣調(diào)沖：全方腎脾肝氣血同治，使腎氣壯實，胎有所系，氣血充足，胎有所養(yǎng)，先天與后天相互支持，相互促進(jìn)以益沖任之本。

近代生理免疫學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，CD4+CD25+Tr細(xì)胞是機體以主動方式獲得和維持自身免疫耐受的一種重要方式，Tr細(xì)胞可通過抑制自身反應(yīng)性T細(xì)胞的免疫反應(yīng)，抑制傳統(tǒng)T細(xì)胞的活動以及促進(jìn)一些抑制性細(xì)胞因子，在維持機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定、誘導(dǎo)移植物的耐受中發(fā)揮重要作用[5]。有研究報道，URSA和正常早孕婦女孕早期外周血CD4+CD25brightTr均顯著高于正常未孕婦女，URSA患者外周血和蛻膜CD4+CD25brightTr均顯著低于正常早孕婦女，CD4+CD25brightTr參與了正常妊娠的維持，有可能是調(diào)控母胎界面局部免疫耐受形成的一個重要因素[6]。人類調(diào)節(jié)性T細(xì)胞僅存在于CD4+CD25bright亞群，而CD4+CD25dimT細(xì)胞亞群主要是正常活化的T細(xì)胞[7,8]。本研究辨證采用補腎健脾法治療脾腎兩虛型URSA患者，通過檢測治療前后及不同妊娠結(jié)局外周血中CD4+CD25+Tr細(xì)胞的變化，發(fā)現(xiàn)補腎健脾中藥安胎后，URSA患者血中CD4+CD25+Tr數(shù)量較治療前明顯升高（P＜0.05），且妊娠成功婦女CD4+CD25+Tr顯著高于妊娠失敗者（P＜0.05），CD25+平均熒光強度無明顯變化，提示補腎健脾中藥可能提高了外周血CD4+CD25brightTr細(xì)胞數(shù)量，降低了CD4+CD25dimTr細(xì)胞數(shù)量，參與了母胎免疫調(diào)控，增強母體保護(hù)性免疫，有利于維持內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，從而維持了妊娠。

目前，對URSA的研究表明，該病與母胎外周系統(tǒng)免疫及母胎界面局部免疫密切相關(guān)，本研究僅從外周血中Tr細(xì)胞角度探討補腎健脾治法對機體的免疫調(diào)節(jié)作用，對是否參與其他免疫環(huán)節(jié)的調(diào)控尚有待進(jìn)一步研究。

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