張瀟 李蓉 唐斌

(1.瀘州醫(yī)學(xué)院化學(xué)教研室,2.瀘州醫(yī)學(xué)院藥理毒理學(xué)研究室,四川 瀘州 646000)

本品為鳶尾科植物鳶尾(Iris tectorum Maxim)的干燥根莖,苦,寒,入肺、肝經(jīng)。主產(chǎn)廣東、廣西和四川,具有消熱解毒,消痰利咽的功效,用于咽喉腫痛,痰咳氣喘[1]?，F(xiàn)代藥學(xué)研究表明,川射干含有射干苷、鳶尾苷、野鳶尾苷、鳶尾甲苷A、點(diǎn)地梅雙糖苷、鳶尾苷元、鳶尾甲黃素A、染料木素等多種物質(zhì)[2]。本文以射干苷為對(duì)照品,采用紫外分光光度法,建立了川射干總黃酮的含量測定方法。本試驗(yàn)所用的儀器設(shè)備操作簡單,適于普及,可用于川射干藥材的質(zhì)量控制,為其開發(fā)利用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器

UV-2100雙光束紫外/可見光分光光度計(jì)(北京瑞利分析儀器公司);XR205SM-DR型電子天平(瑞士Precisa);CQX25-06型超聲波清洗器(上海必能信超聲有限公司,功率250W,頻率25kHz)。

1.1.2 藥品

射干苷標(biāo)準(zhǔn)品：購自中國藥品生物制品檢定所,在選定色譜條件分離后按面積歸一化法計(jì)算含量為98.88%,符合含量限度要求,故以含量為100%計(jì)算;川射干飲片：購自瀘州市圣杰藥房,經(jīng)瀘州醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院張春博士鑒定為鳶尾科植物鳶尾的干燥根莖,即川射干;乙醇為分析純。

1.2 方法

1.2.1 供試品溶液的配制

精確稱取川射干粉末約1g(過三號(hào)篩),置于100ml的具塞錐形瓶中,加入70%乙醇約50mL,超聲處理(功率250W,頻率50kHz)1h,放冷,搖勻,減壓過濾,用少量 70%乙醇分多次洗滌濾渣,將濾液轉(zhuǎn)入100ml容量瓶中,用70%乙醇定容,精確量取濾液0.2mL,置于l0mL容量瓶中,用70%乙醇定容,搖勻,即得。

1.2.2 射干苷對(duì)照品溶液的制備

精確稱取射干苷標(biāo)準(zhǔn)品適量,用70%乙醇制成濃度為0.1 mg?mL-1的溶液,即得。

1.2.3 測定波長的確定[3]

取射干苷對(duì)照品及供試品溶液各適量,以70%乙醇為空白試劑,分別于紫外可見光分光光度計(jì)200～600nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行波長掃描。

1.2.4 線性關(guān)系考察

精確量取射干苷對(duì)照品溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL,分別置于l0mL容量瓶中,用70%乙醇稀釋溶解至刻度,搖勻,以70%乙醇為空白試劑,于266nm波長處測定吸光度。

1.2.5 精密度試驗(yàn)

取上述供試品溶液,連續(xù)測定5次。

1.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取對(duì)照品及供試品溶液于室溫分別放置 0、2、4、6、8、10、12h后,測定吸光度。

1.2.7 重現(xiàn)性考察

取上述藥材樣品,按1.2.1方法制備供試品溶液,平行制備5份,分別測定吸光度。

1.2.8 回收率試驗(yàn)

取已知射干苷含量(4.12%)的川射干藥材粉末 6份 ,每份約0.5g,分成 3組,每組 2份,分別精密添加對(duì)照品溶液(0.1 mg?mL-1)2、3、4ml,按1.2.1方法制備溶液并按1.2.9方法測定,計(jì)算回收率。

1.2.9 樣品的含量測定

取3個(gè)批次的川射干藥材粉末各約1g(過三號(hào)篩),按1.2.1方法制備供試品溶液,以70%乙醇為空白試劑,于紫外分光光度計(jì)266nm波長處測定吸光度,分別計(jì)算其含量。

2 結(jié)果

2.1 檢測波長

川射干提取液與射干苷對(duì)照品溶液均在266nm處有最大吸收,故確定266nm為檢測波長。

2.2 線性關(guān)系

以吸光度(A)為縱坐標(biāo),濃度(C)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到回歸方程為Y=0.692X-0.0085,r=0.9991。射干苷濃度在0.002～0.010 mg?mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3 精密度

計(jì)算得5次吸光度的RSD為0.53%,表明本方法精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性

計(jì)算得7個(gè)時(shí)間點(diǎn)吸光度的RSD為0.25%,表明對(duì)照品及供試溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 重現(xiàn)性

試驗(yàn)測得5份川射干藥材中總黃酮的平均值為4.12%,RSD值為0.76%(n=5),表明方法重現(xiàn)性良好。

2.6 回收率

結(jié)果表明加樣回收率的平均值為97.45%;RSD=0.65%(n=6),符合規(guī)定(見表1)。

2.7 樣品的含量測定

測得3份樣品中,川射干總黃酮的平均含量為4.17%(以射干苷計(jì))(見表2)。

3 討論

在供試品溶液制備時(shí)曾研究了川射干中總黃酮的提取溶劑,分別以水,50%甲醇、50%乙醇、70%乙醇作提取溶劑。結(jié)果顯示,以70%乙醇為提取溶劑時(shí),樣品中總黃酮含量最高,因此,選用70%乙醇為樣品提取溶劑。曾考察了超聲處理時(shí)間(30、45、60、90min),結(jié)果提取60min和90min時(shí)提出液的濃度相差不大,但比45min時(shí)明顯增高,考慮到超聲90min時(shí)間太長,提取過程中產(chǎn)熱嚴(yán)重可能會(huì)破壞某些成分,故選擇超聲處理60min。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

表2 樣品中射干苷的含量測定結(jié)果

采用紫外分光光度法測定川射干中總黃酮的含量,儀器設(shè)備操作簡單,適于普及,靈敏度高,檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠,具有良好的重現(xiàn)性和回收率,故該方法可用于川射干藥材的質(zhì)量控制。

1 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典2005版一部[S].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2005：28.

2 袁崇均.川射干化學(xué)成分的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2008,20(3)：444-446.

3 李國信.紫外分光光度法測定射干中總異黃酮的含量[J].遼寧中醫(yī)雜志,2008,35(3)：428-429.