蔡 云 羅慶豐 高 玟 詹勤元

非小細(xì)胞肺癌是發(fā)病率和死亡率增長(zhǎng)最快的惡性腫瘤，且治療效果較差。目前大量的研究證明Ku蛋白在腫瘤發(fā)生、發(fā)展、診斷、治療和預(yù)后等方面具有重要的臨床意義，結(jié)合病理學(xué)檢查和TNM分期來(lái)估計(jì)肺癌的惡性程度、轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的危險(xiǎn)度，能更精確地判斷患者的預(yù)后，特別能為非小細(xì)胞肺癌患者術(shù)后的個(gè)體化綜合治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 一般資料

收集我院2005年6月至2007年12月住院患者88例，年齡56～72歲，中位年齡66歲，患者均有明確的病理組織學(xué)診斷，其中高分化鱗狀細(xì)胞癌8例，中分化鱗狀細(xì)胞癌20例，低分化鱗狀細(xì)胞癌22例，中分化腺癌18例，低分化腺癌20例。

1.2 方法

采用MaxvisionTM免疫組化法，按照免疫組化試劑盒的操作說(shuō)明進(jìn)行。P-ERK為工作液，由美國(guó)基因公司提供。具體步驟:①4μm連續(xù)切片，裱于涂有APES的載玻片上，70℃烤片2 h;②二甲苯脫蠟，梯度酒精入水;③3%過(guò)氧化氫室溫孵育30 min，消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶;④抗原修復(fù):切片浸于pH6.0檸檬酸溶液中，電飯鍋中煮沸5 min，保溫10 min，自然冷卻;⑤ PBS洗5 min×2次;⑥ 加入適當(dāng)稀釋倍數(shù)的一抗，4℃冰箱12 h;⑦ 復(fù)溫，PBS洗去一抗;⑧加Maxvision試劑，室溫作用1 h;⑨PBS洗2次;⑩ DAB顯色，蘇木精復(fù)染，酒精脫水，二甲苯透明，封片光鏡下觀察抗原在癌組織中表達(dá)。

1.3 結(jié)果判斷

棕黃色顆粒在細(xì)胞核沉著為陽(yáng)性，隨機(jī)選擇4個(gè)高倍視野，記數(shù)400個(gè)細(xì)胞。①按切片中細(xì)胞顯色有無(wú)及深淺評(píng)分:無(wú)顯色為0分，淡黃色為1，棕黃色為2分，棕褐色為3分。②根據(jù)顯色癌細(xì)胞的比例記分:陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)1% ～25%，計(jì)1分，26% ～50%計(jì)2分，51%～75%計(jì)3分，76% ～100%計(jì)4分。每例腫瘤的積分=①×②［1］。按積分高低分為:0分為“－”，1～3分者為“+”，4 ～8分為“++”，9～12分為“+++”。結(jié)果由兩位病理醫(yī)師分別診斷，不同結(jié)果討論決定，保證結(jié)果的客觀性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用卡方檢驗(yàn)和等級(jí)秩和檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

88例非小細(xì)胞肺癌KU80蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為54.5%(48/88)。腫瘤直徑≤2 cm組與＞2 cm組的KU80陽(yáng)性表達(dá)率結(jié)果差別具有非常顯著性意義(χ2=11.17，P=0.001)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無(wú)轉(zhuǎn)移組KU80陽(yáng)性表達(dá)率結(jié)果差別具有非常顯著性意義(χ2=14.58，P=0.0008)，進(jìn)展組、緩解組與穩(wěn)定組 KU80陽(yáng)性表達(dá)率結(jié)果差別具有顯著性意義(χ2=7.61，P=0.02);KU80陽(yáng)性表達(dá)率與病理類型和TNM分期無(wú)關(guān)(P ＞0.05)，見(jiàn)表1。

表1 KU80蛋白與肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例)

3 討論

KU蛋白是DNA結(jié)合蛋白，是 KU70/KU80異源二聚體，這個(gè)復(fù)合體能補(bǔ)充、活化DNA依賴激酶催化亞單位(DNA-PKcs)共同組成DNA依賴激酶(DNAPK)。DNA-PKcs作為1種絲氨酸/蘇氨酸激酶，促進(jìn)p53蛋白的磷酸化，p53蛋白表達(dá)增加，同時(shí)反式激活上調(diào)另1種抑癌基因WAFl/CIPI，表達(dá)產(chǎn)物為p2l蛋白。p21抑制增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)和多種細(xì)胞周期素，使受損的細(xì)胞阻滯在 G1期，以修復(fù)損傷的DNA，如損傷嚴(yán)重不能修復(fù)則啟動(dòng)細(xì)胞凋亡［2］。而對(duì)于腫瘤細(xì)胞來(lái)說(shuō)，如果能缺乏 KU蛋白和DNA-PK的作用，腫瘤細(xì)胞將進(jìn)入永生化，促進(jìn)細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)移，抑制DNA的修復(fù)，促進(jìn)腫瘤演進(jìn)，同時(shí)對(duì)放射線出現(xiàn)超敏反應(yīng)。這證明Ku蛋白和DNA-PKcs在維持人體正常免疫功能，調(diào)節(jié) DNA修復(fù)，防止細(xì)胞惡變方面有很重要的作用［3］。最近的研究表明:在缺乏KU基因的胚胎干細(xì)胞，對(duì)放射線照射非常敏感，KU70/KU80陰性表型的DNA-PKcs陰性鼠，不僅DNA雙鏈斷裂的修復(fù)和V(D)J重排的編碼終止，而且出現(xiàn)生長(zhǎng)遲緩，對(duì)放射線超敏反應(yīng)及淋巴瘤的發(fā)生。

近兩年來(lái)KU蛋白在腫瘤預(yù)后、發(fā)生發(fā)展、診斷和治療等研究中已經(jīng)開(kāi)始受到重視，KU80具有促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、黏附和侵襲能力及在非小細(xì)胞肺癌發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用［4］。準(zhǔn)確判斷非小細(xì)胞肺癌患者的預(yù)后，制定合理的個(gè)體化治療，為非小細(xì)胞肺癌的防治開(kāi)辟1個(gè)新的途徑。

本研究發(fā)現(xiàn)KU80蛋白在非小細(xì)胞肺癌發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移中有重要意義，其陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和治療效果密切相關(guān)。Wilson等［5］報(bào)道KU蛋白缺乏導(dǎo)致某些腫瘤放射敏感性增加，KU蛋白將是預(yù)測(cè)療效的蛋白之一，與本研究結(jié)果相一致。關(guān)于KU有關(guān)的抗腫瘤藥物的敏感性以及腫瘤放射增敏機(jī)制，有待進(jìn)一步研究。

［1］ 許良中，楊文濤.免疫組織化學(xué)反應(yīng)結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)〔J〕.中國(guó)癌癥雜志，1996，6(4):229.

［2］ Pueei S，Mamarelli P，Rabitti C，et al.Tumor specific modulation of Ku70/Ku80 DNA binding activity in breast and bladder human tumor biopsies〔J〕.Oneogene，2001，20(6):739.

［3］ 王曉莉，張 明，李文輝.DNA—PK亞單位Ku70、Ku80在不同分期乳腺癌中的表達(dá)情況〔J〕.昆明醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，30(2):114.

［4］ 嚴(yán)珊珊，劉 莉，劉志剛.Ku80在鼻咽癌中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.腫瘤防治與研究，2008，21(1):49.

［5］ Wilson CR，Davidson SE，Margison GP，et al.Expression of Ku70 correlates with survival in carcinoma of the cervix〔J〕.Br JCancer，2000，83(12):1702.