劉廣嵐 周士福 孟 東 賈澤斌

乳腺癌是嚴重威脅女性健康最常見的惡性腫瘤之一。近年來發(fā)病率有明顯的上升趨勢，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多因素、多步驟的復雜過程，其預后是與多種指標有關(guān)，而研究這些指標在腫瘤細胞中的表達，有助于判斷乳癌的預后和指導治療。我們通過檢測ER、PR、cerbB-2和Ki-67在乳腺癌組織的表達，以探討其在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取江蘇省無錫市第四人民醫(yī)院2008年6月～2009年12月，行根治術(shù)的乳腺癌組織標本107例?；颊呔鶠榕?，年齡23～82歲，中位年齡53歲。其中導管內(nèi)癌15例，浸潤性導管癌82例，乳腺鱗癌10例。腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移61例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例。TNM分期:0～Ⅰ期36例，Ⅱ期46例，Ⅲ～Ⅳ期25例。均經(jīng)兩位以上病理醫(yī)師分別閱片，取得一致意見后重新認定。所有標本均經(jīng)4%甲醛溶液固定，石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片，分別行HE染色和免疫組化檢測。

1.2 試劑與方法

ER、PR單克隆抗體及S-P免疫組化相關(guān)試劑盒均購自北京中山金橋生物技術(shù)有限公司。采用S-P二步法免疫組化染色。切片厚約4μm，脫蠟，梯度酒精水化，高壓鍋熱處理5～8 min進行抗原修復，PBS沖洗，3%過氧化氫阻斷過氧化物酶，馬血清封閉，加用一抗，4℃冰箱孵育過夜，加生物素標記的二抗，室溫下30 min后PBS充分洗滌，加入S-P復合物孵育20～30 min;PBS洗3次，每次2 min;DAB顯色，蘇木精復染。自來水沖洗返藍，梯度酒精脫水，中性樹膠封片。用PBS代替一抗作為陰性對照，已知陽性片作為陽性對照。

1.3 結(jié)果判定

免疫組化陽性判斷標準，ER、PR、Ki-67陽性細胞:細胞核有棕黃色顆粒，凡5個高倍視野陽性細胞數(shù)＞10%為陽性，否則為陰性。CerbB-2陽性為胞膜及胞質(zhì)著色:陽性細胞按無著色、陽性細胞數(shù)＜1/3、1/3～2/3和 ＞2/3分別記為0、1、2、3分;陽性細胞著色強度按無著色、黃色、棕黃色和棕褐色分別記為0、1、2、3分。以兩項打分之和判斷其結(jié)果，≥3分為陽性。臨床評估指標包括腫瘤病理類型和大小，是否有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及累及數(shù)目和大小。組織學分級按照WHO乳腺癌的組織學分類(2003)，根據(jù)腺管形成、細胞分化及核分裂等3項9分的評定標準，進行組織學分級，分為Ⅰ級、Ⅱ級及Ⅲ級。乳腺癌病理分期標準為2002年第六版AJCC分期標準。結(jié)果判斷均由兩名高年資病理科醫(yī)生統(tǒng)一核準。

1.4 統(tǒng)計學分析

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件分析，樣本率的比較采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman檢驗。

2 結(jié)果

2.1 ER、PR、cerbB-2和 Ki-67表達與乳腺癌組織臨床病理特征的關(guān)系

ER、PR、cerbB-2和 Ki-67陽性表達率分別為56.1%、82.2%、71.0%和 67.3%;ER、PR 陽性表達與乳腺癌患者年齡、病理組織學類型、腫瘤大小無相關(guān)性，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期相關(guān)。cerbB-2和Ki-67與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤pTNM分期顯著相關(guān)(P均＜0.05)，見表1 和表2。

2.2 ER、PR和Ki-67與cerbB-2表達的關(guān)系

ER與PR表達呈正相關(guān)，P=0.000;與Ki-67表達呈負相關(guān)，P=0.000。PR與 cerbB-2、Ki-67表達呈負相關(guān)，P 均 ＜0.05。

表1 ER、PR和cerbB-2、Ki-67表達與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系(例，%)

表2 ER、PR和cerbB-2、Ki-67表達與乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系(例、%)

3 討論

乳腺癌是1種多因素疾病，在其發(fā)生、發(fā)展過程中伴隨多種基因和蛋白的改變。相關(guān)研究［1，2］表明，乳腺癌與生物分子標志物 ER、PR、CerbB-2等有相關(guān)性。這些生物分子標志物在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用，對判斷腫瘤的預后及指導內(nèi)分泌治療有重要的臨床意義［1，2］。通過對這些生物標志物的研究，可以更深入地認識乳腺癌的生物學行為。這些生物學指標如ER、PR、CerbB-2、Ki-67等陽性表達率文獻報道不一［3］。目前將乳腺癌的生長和增殖受性激素調(diào)控的，稱激素依賴性乳腺癌即ER(+)、PR(+);如果癌細胞丟失了受體，該乳腺癌的生長和增殖不再受性激素調(diào)控，則稱非激素依賴性乳腺癌即 ER(－)、PR(－)［4］。ER作為1種蛋白質(zhì)對雌激素有高度親和力。ER可以反映乳腺癌細胞對雌激素的敏感性，ER陽性乳腺癌分化相對較高，預后好，對內(nèi)分泌治療敏感。雌激素與受體結(jié)合誘導產(chǎn)生了PR，因此，ER、PR可作為臨床常用的內(nèi)分泌治療的指標。較多的臨床報道顯示乳腺癌內(nèi)分泌治療的有效率僅為20% ～30% ，很少能達到完全緩解(CR)。進一步研究證實，受體狀況不明的乳腺癌患者，其內(nèi)分泌治療的有效率僅為30%;ER陽性患者有效率達到50% ～60%，而ER陰性患者的有效率為5% ～8%;ER、PR均為陽性者其內(nèi)分泌治療的有效率為70%［5］。本組107例乳腺癌患者的激素受體測定結(jié)果，ER陽性表達率56.1%、PR陽性表達率82.2%，經(jīng)統(tǒng)計學分析顯示ER、PR陽性表達與乳腺癌患者年齡、病理組織學類型、腫瘤大小無相關(guān)性，而兩者陽性表達率與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期相關(guān)。另外，相關(guān)分析顯示，ER、PR與cerbB-2、Ki-67是呈負相關(guān)的。

cerbB-2基因作為乳腺癌常用基因標志之一，是1種跨膜糖蛋白，其分子量是185 kD［6］，該蛋白與表皮生長因子受體(EGFR)具有高度的同源性，故又稱為人類表皮生長因子相關(guān)基因［7］，cerbB-2過表達會激活癌基因，癌變細胞內(nèi)癌基因數(shù)量、性質(zhì)從而發(fā)生改變。體內(nèi)外研究顯示cerbB-2過度表達可促進腫瘤發(fā)生［8，9］。有研究表明，cerbB-2高表達提示乳腺癌細胞的高轉(zhuǎn)移潛能，表現(xiàn)出較強的侵襲性臨床病理特征，cerbB-2也可使細胞整合素和黏合素功能異常，增強癌細胞轉(zhuǎn)移能力。目前cerbB-2已被公認為是與乳腺癌發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的原癌基因，參與調(diào)控細胞的生長、增殖及分化，其產(chǎn)物過度表達常提示惡性程度高、預后差。Slamon等認為乳腺癌患者cerbB-2陽性細胞越多，染色越強，死亡、復發(fā)和轉(zhuǎn)移的幾率也越高。本實驗研究顯示，cerbB-2在乳腺癌組織中陽性表達率為71%，其陽性表達與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床病理分期顯著相關(guān)，相關(guān)分析顯示，cerbB-2陽性與腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床病理分期呈顯著正相關(guān)，可以說明cerbB-2與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，其陽性表達率越高者，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率越高，這與Learn報道［10］的相似。cerbB-2與乳腺癌患者年齡、腫塊大小、組織學分級無相關(guān)性。

Ki-67是目前較為肯定的核增殖標記物，它開始表達于細胞周期的G1期，在S期及G2期表達增強，至M期達高峰，在細胞分裂晚期很快消失。由于其半衰期短，故已成為檢測腫瘤細胞增殖活性最可靠的指標。研究表明Ki-67表達能可靠而迅速地反映惡性腫瘤增殖率，與多種惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預后有關(guān)［11，12］。本組結(jié)果示，Ki-67與乳腺癌患者年齡、腫塊大小、組織學分級無相關(guān)性，而與腫瘤病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈顯著正相關(guān)。相關(guān)研究［13］對68項研究進行meta分析，發(fā)現(xiàn)早期乳腺癌淋巴結(jié)陽性者Ki-67高表達比例增高，預后較差，提示Ki-67有促使腫瘤向淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的能力。Ki-67增殖指數(shù)高低與多種腫瘤的分化程度、浸潤、轉(zhuǎn)移及預后密切相關(guān)。

綜上所述，cerbB-2、Ki-67可以表達于乳腺癌組織中，而表達強度隨乳腺癌惡性程度的增高而增強，ER、PR和cerbB-2、Ki-67的聯(lián)合檢測，可能有助于客觀評估乳腺癌的生物學行為，用來指導臨床用藥和預測預后。因此，在臨床工作中，對于乳腺癌患者要常規(guī)檢測雌、孕激素受體、cerbB-2、Ki-67表達水平。

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