高慧卿，樊蘭瑛，王秀紅，高宏樟

（1.山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院現(xiàn)代農(nóng)業(yè)研究中心，山西太原030031；2.山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)資源綜合考察研究所，山西太原030006）

近幾年，我國百合切花市場消費(fèi)量不斷攀升，生產(chǎn)面積逐年增長。據(jù)不完全統(tǒng)計，目前全國的百合切花生產(chǎn)面積已達(dá)0.2萬多hm2，年生產(chǎn)百合切花2億多支[1]。百合切花的規(guī)?；a(chǎn)，拉動了百合種球的需求，而目前我國商品化生產(chǎn)用東方百合種球主要依靠進(jìn)口，這已成為阻礙我國百合切花產(chǎn)業(yè)發(fā)展的最大瓶頸。為了降低成本，實(shí)現(xiàn)種球國產(chǎn)化，通過組培技術(shù)解決新品種繁育是一條較好途徑。本研究以Tiber品種的新鮮鱗莖、花器官、花后的鱗莖等為外植體，探討了不同取材部位、不同生長調(diào)節(jié)劑對其愈傷組織的誘導(dǎo)效果，旨在為東方百合的組培快繁研究提供基礎(chǔ)。

1 材料和方法

1.1 不同外植體的選擇及預(yù)處理

選取東方百合Tiber品種的鱗片、葉片、花器官（花瓣、花托、花絲）、花后鱗莖、幼嫩鱗莖、老鱗莖及鱗莖盤為外植體，將外植體剝離后用加入洗滌劑的清水洗3次，之后用流水沖20min，過純凈水1次。用75%乙醇滅菌30 s，無菌水沖洗2次，0.1%的升汞滅菌8min，無菌水沖洗5～6次。滅菌期間要不時輕輕晃動，以保證滅菌徹底，且不傷害外植體。外植體均切為0.5 cm×0.5 cm的方塊，進(jìn)行接種，每瓶4塊。

1.2 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)室溫度20～28℃，光照強(qiáng)度1 500～2 000 lx，光照時間12 h/d，相對濕度70%～80%。

1.3 培養(yǎng)基的設(shè)置

以MS為基本培養(yǎng)基，用不同激素濃度的6-BA（0.2，0.5，1.0mg/L）與 NAA（0.1mg/L）組合成3種培養(yǎng)基用于鱗片、葉片和葉柄的誘導(dǎo)培養(yǎng)；2，4-D（0.5，1.0 mg/L）與 6-BA（0，0.5 mg/L）組成3種培養(yǎng)基用于花器官的誘導(dǎo)培養(yǎng)；6-BA（0，0.5 mg/L）與 NAA（0.1，0.5，1.0 mg/L）組成 3種培養(yǎng)基用于花后鱗片外植體的誘導(dǎo)培養(yǎng)。不同培養(yǎng)基均加蔗糖20 g/L，瓊脂6.5 g/L，pH 5.8。

1.4 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用DPS軟件[2]和Excel 2003軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 鱗片、葉片、葉柄的誘導(dǎo)培養(yǎng)效果

對表1中愈傷誘導(dǎo)率進(jìn)行方差分析，結(jié)果顯示，外植體之間差異顯著（表2），其中鱗片的愈傷誘導(dǎo)率明顯大于葉片和葉柄的愈傷誘導(dǎo)率，而葉片和葉柄之間差異不顯著（表3）。試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，鱗莖接種后約20 d便長出嫩綠色愈傷組織，大約30 d可看到叢生芽的雛形；而以葉片和葉柄為外植體的長勢較為緩慢，誘導(dǎo)時間比鱗片誘導(dǎo)時間推遲10 d左右，且愈傷組織較小。結(jié)果得出，以鱗片為外植體的誘導(dǎo)效果，從數(shù)量和質(zhì)量上均優(yōu)于葉片和葉柄的誘導(dǎo)效果。

表1 鱗片、葉片、葉柄的誘導(dǎo)培養(yǎng)效果比較

表2 方差分析結(jié)果

表3 Duncan’s多重比較

2.2 花瓣、花絲、花托的誘導(dǎo)培養(yǎng)效果

開花時選用花器官的不同部位進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)試驗(yàn)，取未開放的花蕾進(jìn)行滅菌之后，取花瓣、花絲、花托分別進(jìn)行培養(yǎng)，結(jié)果列于表4。

表4 花瓣、花絲、花托的愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)效果比較

從表4可以看出，接種40 d后，不同的花器官啟動愈傷的能力不同，花瓣和花絲在3種培養(yǎng)基中，除花瓣在MS+2，4-D1.0+6-BA0.5中有2個形成愈傷組織外，其余均不能誘導(dǎo)出愈傷組織，在培養(yǎng)過程中全部變白、發(fā)干壞死。而花托的愈傷組織誘導(dǎo)效果較好，在3種培養(yǎng)中最低的愈傷誘導(dǎo)率為53.3%，最高的愈傷誘導(dǎo)率為95%，變異系數(shù)為0.28。表明花瓣、花絲的誘導(dǎo)是不成功的，而花托的誘導(dǎo)率最高，結(jié)果與文獻(xiàn)報道的其他百合品種的研究結(jié)果一致[3]。

2.3 花后的老鱗莖、鱗莖盤及幼嫩鱗莖的誘導(dǎo)效果

經(jīng)對表5不定芽的發(fā)生率進(jìn)行方差分析得出，不同外植體間不定芽發(fā)生率呈極顯著差異（表6），幼嫩鱗莖明顯好于成熟的老鱗莖和鱗莖盤，說明新生的鱗莖生命力強(qiáng)，易于誘導(dǎo)分化。老鱗莖和鱗莖盤由于結(jié)構(gòu)致密，脫分化較為困難，誘導(dǎo)率均較低（表7）。從3種外植體的整體誘導(dǎo)水平來看，幼嫩鱗莖均好于后二者；盡管培養(yǎng)基間差異不顯著，但對于新鱗莖，一個合適的生長調(diào)節(jié)素的濃度是至關(guān)重要的；對于鱗莖盤，MS+6-BA0.5+NAA1.0培養(yǎng)基的誘導(dǎo)率最高，達(dá)到24%，說明較老的外植體選用高濃度的生長調(diào)節(jié)素有助于細(xì)胞的脫分化。

表5 花后的鱗莖、鱗莖盤及幼嫩鱗莖的誘導(dǎo)培養(yǎng)比較

表6 方差分析結(jié)果

表7 Duncan’s多重比較

2.4 東方百合Tiber品種不同外植體培養(yǎng)效果總體比較

不同外植體的愈傷誘導(dǎo)效果總體比較如圖1所示。

從圖1可以看出，不同的外植體培養(yǎng)效果不同，愈傷組織的誘導(dǎo)能力存在差異，其誘導(dǎo)能力從高到低依次為幼嫩鱗莖、花托、鱗片、老鱗莖、葉柄、葉片、鱗莖盤、花瓣，只有花絲誘導(dǎo)不分化。

3 討論

植物不同外植體的愈傷組織誘導(dǎo)效果和同一外植體在不同激素濃度中的愈傷組織誘導(dǎo)效果均有一定的差異[4]。百合的許多組織和器官都可通過組織培養(yǎng)誘導(dǎo)成苗，常作為外植體的主要有鱗片、葉片、莖尖、珠芽、花絲、花瓣等，其中以鱗片最常見[5-9]。Arzate 等[10]以麝香百合（L longiflorum）的花絲為外植體，通過誘導(dǎo)愈傷組織分化再生植株，未發(fā)現(xiàn)遺傳變異。Nhut等[11]用百合的花梗、花托、花瓣、花柱等外植體進(jìn)行離體培養(yǎng)，結(jié)果花托最易成活，且誘導(dǎo)率最高。

本試驗(yàn)以東方百合Tiber品種的鱗片、葉片、葉柄、花器官、開花后的老鱗莖和新生的幼嫩鱗莖為外植體，在不同激素濃度的培養(yǎng)基條件下進(jìn)行誘導(dǎo)試驗(yàn)，結(jié)果表明，東方百合Tiber各外植體形成愈傷組織的能力有差異，幼嫩鱗莖花托較易誘導(dǎo)出愈傷組織，且誘導(dǎo)率較高，形成的愈傷組織生長最好，質(zhì)地疏松。不同外植體愈傷形成能力大小依次為幼嫩鱗莖＞花托＞鱗片＞葉柄＞葉片。通過本研究，為進(jìn)行百合快繁提供技術(shù)支持。

［1］ 樊蘭瑛，高宏樟，郭常蓮.東方百合組培快繁試驗(yàn)[J].山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（9）：29-32.

［2］ 唐啟義，馮明光.實(shí)用統(tǒng)計分析及其DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)[M].北京：科學(xué)出版社，2002.

［3］ 王俐，李權(quán)林.百合的組織培養(yǎng)和快繁技術(shù)[J].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，1997，19（4）：374-375.

［4］ 王秀紅，孫煊，苑波，等.一品紅試管快速繁殖技術(shù)研究[J].山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（11）：38-40.

［5］ 常樂.石蒜屬植物再生體系與鱗莖花卉遺傳轉(zhuǎn)化體系研究進(jìn)展[J].華北農(nóng)學(xué)報，2009，24（增刊）：76-80.

［6］ 張延龍.東方百合葉片組織培養(yǎng)研究 [J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2004，32（1）：47-50.

［7］ 趙祥云，程廉，邢尤美，等.百合珠芽組培及脫毒研究[J].園藝學(xué)報，1993，20（3）：284-288.

［8］ 徐品三，欒雨時，劉紀(jì)文，等.百合不定芽培養(yǎng)脫毒種球生產(chǎn)的研究[J].植物學(xué)通報，2003，20（3）：313-318.

［9］ 唐東芹，黃丹楓，唐克軒，等.東方百合鱗片的組織培養(yǎng)[J].植物生理學(xué)通訊，2003，39（5）：450-452.

［10］Arzate F A M.Efficient callus induction and plant regeneration from filaments with anther in lily（Lilium longiflorum Thunb）[J].PlantCellRep，1997，16（12）：836-840.

［11］ NhutDT.Shoot induction and plant regeneration from receptacle tissues of Lilium logiflorum [J].Sci Hort，2001，87：131-138.