杜堅(jiān)宗,欽光躍,趙 恬,顧 亮,吳金彥,陸曉玲,吳 健

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征 (obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome,OSAHS)是一種多基因的慢性睡眠呼吸疾病,與代謝綜合征關(guān)系密切[1]。過氧化物酶體增殖物激活型受體 γ2(peroxisome proliferator-activated receptorgamma-γ2,PPARγ2)是一種配體激活型核轉(zhuǎn)錄因子,在調(diào)控脂肪細(xì)胞分化、調(diào)節(jié)機(jī)體糖脂代謝的平衡、增強(qiáng)胰島素敏感性、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抑制炎癥反應(yīng)等方面均發(fā)揮重要作用。有研究表明 PPARγ2基因多態(tài)性與代謝綜合征有一定的關(guān)系。故推測PPARγ2基因 Prol2Ala多態(tài)性與OSAHS有關(guān)。本研究擬探討PPARγ2基因 Prol2Ala多態(tài)性與 OSAHS的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇 2007年 6月—2009年 12月來我院經(jīng)臨床和整夜多導(dǎo)睡眠圖 (PSG)監(jiān)測并按 OSAHS診療指南[2]確診的男性 OSAHS患者 100例。對(duì)照組為年齡、身高、體質(zhì)量與 OSAHS組匹配的經(jīng) PSG確診的單純打鼾 (simple snoring)男性患者 100例。兩組均排除急性感染、慢性呼吸系統(tǒng)疾病、心血管疾病及糖尿病。本研究通過本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),所有患者在參加前均簽署知情同意書。

1.2 方法 晨起空腹抽提靜脈血 2m l,EDTA抗凝。按照微量全血提取法抽提基因組 DNA。以 50～200μg DNA為模板進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng) (PCR)擴(kuò)增,引物序列為:上游引物 5′-GCCAATTCAAGCCCAGTC-3′, 下游引物 5′-GATATGTTTGCAGACAGTGTATCAGTGAAGGAATCGCTTTCCG-3′。 PCR反應(yīng)體系為 20μl,包括 1μl基因組 DNA模板,200μmmolPL dNTP,上下游引物 0125μmmolPL,1UTaqDNA聚合酶,018 mmolPLMgCl2。PCR循環(huán)參數(shù)為:94℃預(yù)變性 5 min,變性 94℃45 s,退火 56℃45 s,延伸 72℃30 s,30個(gè)循環(huán);最后 72℃延伸 7 Min。取5μlPCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳監(jiān)測,紫外燈下觀測基因型。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件完成。運(yùn)用基因計(jì)數(shù)法計(jì)算各組基因頻率及等位基因頻率,χ2檢驗(yàn)比較兩組間頻率的差異。

2 結(jié)果

OSAHS組和對(duì)照組 PPARγ2基因 Prol2Ala基因型與等位基因分布 基因型等位基因頻率的分布符合 Hardy-Weinberg平衡,提示所選擇的樣本具有群體代表性。兩組間各基因型分布及等位基因頻率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P＞0.05),在兩組間基因型以純合子 PP基因型多見 (見表 1)。

表 1 OSAHS組和對(duì)照組 PPARγ2基因 Prol2Ala基因型與等位基因分布[n(%)]Tab le 1 The Distributed of PPARγ2Prol2Ala genotype and allele in OSAHS group and the control group

3 討論

PPAR是一種配體激活型核轉(zhuǎn)錄因子,在調(diào)控脂肪細(xì)胞分化、調(diào)節(jié)機(jī)體糖脂代謝的平衡、增強(qiáng)胰島素敏感性、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抑制炎癥反應(yīng)等方面均發(fā)揮重要作用。PPARγ2主要存在于脂肪細(xì)胞,參與脂肪細(xì)胞的分化[3]。PPARγ2已被發(fā)現(xiàn)參與近百個(gè)基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié),Prol2Ala非常接近所表達(dá)氨基酸末端,可改變活性結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu),從而有可能降低重要的蛋白質(zhì)高級(jí)結(jié)構(gòu),因此 Prol2Ala的變異可降低體內(nèi) PPARγ2對(duì)靶基因的轉(zhuǎn)錄活性,影響代謝的效應(yīng),特別是對(duì)脂肪細(xì)胞的代謝調(diào)節(jié)的改變,由此而產(chǎn)生了許多生物學(xué)效應(yīng)。有研究報(bào)道Prol2Ala的變異可能與胰島素抵抗、血脂代謝、肥胖、糖尿病、高血壓有關(guān)[4-6]。由于 OSAHS患者臨床表型與 2型糖尿病、胰島素抵抗、血脂紊亂及中心性肥胖等代謝性疾病密切相關(guān),那么 PPARγ多態(tài)性是否參與 OSAHS發(fā)病,導(dǎo)致 OSAHS的易感性增加,是非常值得探討的問題。因此本研究對(duì)浙江地區(qū) OSAHS人群進(jìn)行了研究,研究結(jié)果表明 PPARγ2基因Prol2Ala多態(tài)性性以 PP基因型為主,該變異與 OSAHS無明顯關(guān)聯(lián),但也不排除樣本量小或研究人群遺傳背景不同及抽樣誤差等原因造成偏差。

綜上所述,浙江地區(qū) OSAHS與 PPARγ2基因 Prol2Ala多態(tài)性性無關(guān),但由于選取的研究對(duì)象種族差異、研究方法、樣本含量等不同有可能造成研究結(jié)果的不一致性,故有待于積累資料擴(kuò)大樣本進(jìn)一步深入研究。

1 劉卿雪.阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征臨床診治進(jìn)展 [J].河北醫(yī)藥,2008,30(6):846.

2 中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)分會(huì)睡眠呼吸疾病學(xué)組.阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征診治指南 (草案)[J].中華結(jié)核和呼吸雜志,2002,25(4):195-198.

3 Cheng S,Afif H,Martel-Pelletier J,et al.Association of polymorphisms in the peroxisome proliferator-activated receptor gamma gene and osteoarthritis of the knee[J].Ann Rheum Dis,2006,65(10):1394-1397.

4 Jaziri R,Lobbens S,Aubert R,et al.The PPARG Prol2Ala polymorphism is associated with a decreased risk of developing hyperglycemia over 6 years and combines with the effect of the APM 1G-11391A single nucleotide polymorphism:the data from an epidem iological study on the insulin resistance syndrome(DESIR)study[J].Diabetes,2006,55(4):1157-1162.

5 Tan GD,Neville MJ,Liverani E,et al.The in vivo effects of the Prol2A la PPARgamma2 polymorphism on adipose tissue NEFA metabolism:the first use of the Oxford Biobank[J].Diabetologia,2006,49(1):158-168.

6 Meirhaeghe A,CottelD,Amouyel P,etal.Association between peroxisome proliferator-activated receptor gamma haplotypesand themetabolic syndrome in French men and women[J].Diabetes,2005,54(10):3043-3048.