陳麗，陳科偉，許再福，梁廣文

（華南農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲(chóng)學(xué)系，廣州，510642）

夜蛾黑卵蜂（Te1enomus remus Nixon）對(duì)甜菜夜蛾信息化合物的嗅覺(jué)反應(yīng)

陳麗，陳科偉，許再福，梁廣文

（華南農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲(chóng)學(xué)系，廣州，510642）

利用Y型嗅覺(jué)儀測(cè)定了源于甜菜夜蛾不同生理階段的雌蛾性附腺、卵表、鱗片及尾毛浸提液對(duì)夜蛾黑卵蜂寄主選擇行為的影響。結(jié)果表明，甜菜夜蛾不同生理階段的雌蛾性附腺、卵表及尾毛浸提液對(duì)夜蛾黑卵蜂均有較強(qiáng)的引誘作用，但鱗片浸提液的效果不明顯。甜菜夜蛾卵表信息化合物可通過(guò)蒸餾水、丙酮及正己烷3種介質(zhì)浸提。卵表及尾毛對(duì)夜蛾黑卵蜂有引誘效果的物質(zhì)濃度分別為10卵塊/mL與2 mg/mL。在處女蛾、交配未產(chǎn)卵、產(chǎn)卵前期及產(chǎn)卵末期這4種不同生理階段的性附腺浸提物質(zhì)中，處女蛾性附腺浸提液在30 μL時(shí)對(duì)夜蛾黑卵蜂有顯著的引誘作用，交配但未產(chǎn)卵雌蛾及產(chǎn)卵前期雌蛾性附腺浸提物在60 μL時(shí)對(duì)夜蛾黑卵蜂產(chǎn)生引誘作用，而處于產(chǎn)卵后期雌蛾性附腺浸提物在30 μL與60 μL時(shí)均表現(xiàn)出明顯的引誘作用。

夜蛾黑卵蜂；甜菜夜蛾；信息物質(zhì)；嗅覺(jué)反應(yīng)

寄生蜂在尋找寄主過(guò)程中往往受到來(lái)自植物和寄主兩方面化學(xué)信息物質(zhì)的影響[1，2]。其中，來(lái)源于寄主昆蟲(chóng)本身的化學(xué)信息物質(zhì)在寄生蜂近距離的寄主定位過(guò)程中起關(guān)鍵作用[3～5]，這些化學(xué)信息物質(zhì)存在于寄主昆蟲(chóng)的不同發(fā)育時(shí)期和不同部位，主要有寄主卵、鱗片、尾毛、性附腺等[6～11]。

夜蛾黑卵蜂（Te1enomus remusNixon）是鱗翅目夜蛾科害蟲(chóng)卵期的主要寄生性天敵，對(duì)許多重要的農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)，如斜紋夜蛾 （Spodoptera 1itura）與草地夜蛾（Spodoptera frugiperda）均有較強(qiáng)的控制作用[12]。 2009年6月于廣州大蔥田在被寄生的甜菜夜蛾卵上采獲此蜂，初步的田間釋放試驗(yàn)表明，該蜂對(duì)甜菜夜蛾（Spodoptera exiguaHübner）同樣具有較強(qiáng)的寄生作用，顯示出良好的應(yīng)用前景。本試驗(yàn)利用Y型嗅覺(jué)儀測(cè)定了夜蛾黑卵蜂對(duì)甜菜夜蛾卵塊和成蟲(chóng)不同部位信息浸提物的嗅覺(jué)反應(yīng)，以期從中找到甜菜夜蛾吸引夜蛾黑卵蜂寄主定位的信息化合物主要存在部位，為進(jìn)一步分析確定其信息化合物組成成分提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試?yán)ハx(chóng)

甜菜夜蛾采集于廣州市大蔥田，在實(shí)驗(yàn)室26℃，相對(duì)濕度（70±10）%，光周期 L∶D=12 h∶12 h 的條件下用人工飼料繁殖飼養(yǎng)，建立試驗(yàn)種群。

夜蛾黑卵蜂采集于廣州市大蔥田被寄生的甜菜夜蛾卵塊上，在室內(nèi)26℃下用甜菜夜蛾卵繁殖馴化5代。測(cè)試所用的蜂為初羽化、已交配但未產(chǎn)卵的雌蜂，供以20%的蜂蜜水。測(cè)試前將蜂置于內(nèi)徑為0.8 cm的指形管中適應(yīng)20 min。

1.2 甜菜夜蛾信息化合物的浸提

①甜菜夜蛾卵塊 選取卵粒數(shù)較為一致的新鮮卵塊（每個(gè)卵塊約含50粒卵），分別用正己烷、丙酮水溶液（丙酮∶水為 1∶1，體積比）、蒸餾水浸泡 24 h，離心3 min，取上清液，濃縮至40卵塊/mL，存于冰箱中保存?zhèn)溆谩?設(shè)定6個(gè)處理濃度：2.5卵塊/mL、5卵塊/mL、10卵塊/mL、20卵塊/mL、40卵塊/mL，測(cè)定時(shí)每個(gè)處理取15 μL浸提液進(jìn)行測(cè)試。

②甜菜夜蛾雌成蟲(chóng)腹部鱗片 將初羽化的甜菜夜蛾雌成蟲(chóng)在冰箱冷凍層中放置5 min后取出，用小毛筆輕輕將其腹部的鱗片掃下，用正己烷浸泡24 h，離心3 min，取上清液，濃縮至50 mg/mL，存于冰箱中保存?zhèn)溆?。試?yàn)設(shè)定6個(gè)處理濃度：0.25 mg/mL，0.5 mg/mL，1 mg/mL，2 mg/mL，4 mg/mL，8 mg/mL， 測(cè)定時(shí)每個(gè)處理取15 μL浸提液進(jìn)行測(cè)試。

③甜菜夜蛾雌成蟲(chóng)尾毛 將初羽化的甜菜夜蛾雌成蟲(chóng)在冰箱冷凍層中放置5 min后取出，用鑷子取其尾毛；用正己烷浸泡24 h，離心3 min，取上清液，濃縮至50 mg/mL，存于冰箱中保存?zhèn)溆?。設(shè)定6個(gè)處理濃度：0.25 mg/mL，0.5 mg/mL，1 mg/mL，2 mg/mL，4 mg/mL，8 mg/mL。測(cè)定時(shí)每個(gè)處理取15 μL浸提液進(jìn)行測(cè)試。

④甜菜夜蛾雌成蟲(chóng)不同生理階段性附腺 分別解剖甜菜夜蛾雌成蟲(chóng)不同生理階段性附腺：處女蛾、交配未產(chǎn)卵、產(chǎn)卵前期（產(chǎn)卵1 d后，有1精珠）、產(chǎn)卵后期（產(chǎn)卵5 d后，有2~3精珠）的雌蛾附腺各50頭，置于加有正己烷的進(jìn)樣瓶（3 mL）中，搖勻，于冰箱中保存48 h后，將溶液用離心管離心（3 000 r/min）3 min，然后將上清液轉(zhuǎn)移到另一干凈的進(jìn)樣瓶中，加正己烷至2 mL，在冰箱中（3±1）℃保存?zhèn)溆?。測(cè)定時(shí)分別取15 μL，30 μL，60 μL 浸提液進(jìn)行測(cè)試。

1.3 夜蛾黑卵蜂對(duì)甜菜夜蛾信息化合物的嗅覺(jué)反應(yīng)

用Y型嗅覺(jué)儀分別測(cè)試夜蛾黑卵蜂對(duì)上述浸提液的嗅覺(jué)反應(yīng)。Y型管各臂長(zhǎng)15 cm，內(nèi)徑為1.6 cm。其上方用45 W節(jié)能燈提供均勻光照。Y型管兩臂連接味源瓶，吹入味源的氣流先經(jīng)過(guò)活性炭過(guò)濾器過(guò)濾，再通過(guò)加濕器加濕，并利用流量計(jì)控制氣泵吹入兩臂，氣流均為300 mL/min。連接Y型管后，預(yù)吹氣10 min，排除儀器中的氣體；再用移液槍移取浸提液和等體積對(duì)照液滴在等面積（r=5 mm）的濾紙片上；待溶劑揮發(fā)后，分別置于Y型嗅覺(jué)儀的兩個(gè)放樣瓶中。繼續(xù)吹氣5 min后，引入蜂進(jìn)行測(cè)試。

將蜂引入Y型管主干，當(dāng)其爬至離中心5 cm處時(shí)開(kāi)始計(jì)時(shí)。每頭蜂作為1個(gè)處理，記錄10 min內(nèi)雌蜂停留于各區(qū)時(shí)間和進(jìn)入各臂次數(shù)，進(jìn)入兩臂5 cm以上記為一次選擇，5 min內(nèi)沒(méi)有進(jìn)入兩分臂者記為無(wú)反應(yīng)。每測(cè)5頭將方向?qū)Q一下，以免光線不勻而造成影響，并將測(cè)試區(qū)域先用無(wú)水乙醇擦拭，然后用蒸餾水擦拭，之后重新放入樣品。每個(gè)處理測(cè)定30～60頭雌蜂。測(cè)試時(shí)室內(nèi)溫度保持在26℃，測(cè)試時(shí)間為9：00~12：00 和 14：00~17：00。

2 結(jié)果與分析

2.1 夜蛾黑卵蜂對(duì)甜菜夜蛾卵表浸提液的嗅覺(jué)反應(yīng)

夜蛾黑卵蜂對(duì)甜菜夜蛾卵表信息化合物的嗅覺(jué)反應(yīng)與浸提物的濃度密切相關(guān)（表1）。當(dāng)卵表浸提物濃度為10卵塊/mL時(shí)，進(jìn)入“Y”型管處理臂的夜蛾黑卵蜂數(shù)量明顯多于對(duì)照臂，說(shuō)明此濃度的浸提物對(duì)夜蛾黑卵蜂具有顯著的引誘作用。夜蛾黑卵蜂對(duì)2.5卵塊/mL、5卵塊/mL、20卵塊/mL及40卵塊/mL濃度的浸提物沒(méi)有明顯的趨向行為；并且當(dāng)卵表浸提物濃度為20卵塊/mL與40卵塊/mL時(shí)，較多的夜蛾黑卵蜂則選擇進(jìn)入對(duì)照臂區(qū)。

2.2 夜蛾黑卵蜂對(duì)甜菜夜蛾鱗片及尾毛浸提液的嗅覺(jué)反應(yīng)

甜菜夜蛾雌蛾鱗片浸提物對(duì)夜蛾黑卵蜂無(wú)明顯的引誘作用，夜蛾黑卵蜂進(jìn)入處理臂與對(duì)照臂的蜂數(shù)接近（表2）。夜蛾黑卵蜂對(duì)甜菜夜蛾雌蛾尾毛浸提物的嗅覺(jué)反應(yīng)與浸提液的濃度有關(guān)，在 0.25，0.5，1，2，4，8 mg/mL這6個(gè)濃度浸提物中，僅2 mg/mL浸提物對(duì)夜蛾黑卵蜂表現(xiàn)出顯著的引誘作用（表2）。

2.3 夜蛾黑卵蜂對(duì)甜菜夜蛾性附腺浸提液的嗅覺(jué)反應(yīng)

夜蛾黑卵蜂對(duì)不同生理階段的甜菜夜蛾性附腺浸提物嗅覺(jué)反應(yīng)的氣味閾值范圍不同。處女蛾附腺浸提液在30 μL時(shí)對(duì)夜蛾黑卵蜂有顯著的引誘作用，交配但未產(chǎn)卵雌蛾及產(chǎn)卵前期雌蛾性附腺浸提物在60 μL時(shí)對(duì)夜蛾黑卵蜂產(chǎn)生引誘作用，而處于產(chǎn)卵后期雌蛾性附腺浸提物在30 μL與60 μL時(shí)均表示出顯著的引誘作用（表3）。

3 結(jié)論與討論

利用“Y”型嗅覺(jué)儀對(duì)夜蛾黑卵蜂測(cè)定結(jié)果表明，甜菜夜蛾的卵表、尾毛及性附腺這3個(gè)部位均存在對(duì)夜蛾黑卵蜂具引誘作用的信息化合物，且引誘作用的強(qiáng)弱與這些化學(xué)物質(zhì)的濃度有關(guān)，具有明顯的氣味閾值范圍，信息化學(xué)物濃度太低或太高均不能引起夜蛾黑卵蜂的嗅覺(jué)反應(yīng)，這與其他寄生蜂寄主利它素的研究結(jié)果基本一致[13～17]。有研究報(bào)道，寄主昆蟲(chóng)體上的鱗片信息物質(zhì)對(duì)寄生蜂也有較強(qiáng)引誘和產(chǎn)卵刺激作用，雖然其利它素含量可能低于寄主卵、尾毛、性附腺等部位[9，15，18，19]。 而在本試驗(yàn)中，夜蛾黑卵蜂對(duì)甜菜夜蛾鱗片浸提液沒(méi)有明顯的趨向行為，初步推斷，可能是對(duì)夜蛾黑卵蜂而言，甜菜夜蛾卵期的寄主利它素主要存在于與其生殖活動(dòng)直接相關(guān)的卵、尾毛及附腺這3個(gè)部位中，是誘導(dǎo)夜蛾黑卵蜂搜索寄主的直接信息源。

表1 夜蛾黑卵蜂對(duì)不同浸提方法及不同濃度甜菜夜蛾卵表浸提液的嗅覺(jué)反應(yīng)（次數(shù)）

表2 夜蛾黑卵蜂對(duì)甜菜夜蛾鱗片及尾毛浸提液的嗅覺(jué)反應(yīng)（次數(shù)）

表3 夜蛾黑卵蜂對(duì)甜菜夜蛾性附腺浸提物的嗅覺(jué)反應(yīng)（次數(shù)）

甜菜夜蛾卵表寄主利它素能通過(guò)水、丙酮及正己烷3種溶劑獲取，這3種浸提方法所獲得的信息化合物的組成、比例將進(jìn)行進(jìn)一步的比較分析。寄主昆蟲(chóng)在不同生理階段性附腺產(chǎn)生的信息化合物組成比例與含量存在較大的差異，表現(xiàn)出對(duì)寄生蜂不同的引誘作用[15，20]。練永國(guó)等[15]研究揮發(fā)性信息化合物對(duì)玉米螟赤眼蜂（Trichogramma ostriniae）寄主選擇行為影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，玉米螟赤眼蜂僅對(duì)亞洲玉米螟（Ostrinia furnaca1is）交配未產(chǎn)卵和產(chǎn)卵前期的雌蛾性附腺浸提液有反應(yīng)，而對(duì)處女蛾和產(chǎn)卵后期的性附腺浸提液沒(méi)反應(yīng)；進(jìn)一步分析認(rèn)為，附腺內(nèi)含物具有能使卵粒相互粘結(jié)成卵塊和分泌性信息素的功能，剛羽化的處女蛾的附腺內(nèi)含物還沒(méi)形成，故不能引起赤眼蜂反應(yīng)，在雌蛾交配后刺激了它的形成，對(duì)赤眼蜂產(chǎn)生較強(qiáng)的吸引力；在產(chǎn)卵前期玉米螟性附腺內(nèi)含物含量較高，對(duì)赤眼蜂保持較強(qiáng)的引誘作用，而產(chǎn)卵后期附腺內(nèi)含物含量下降或消失，失去對(duì)赤眼蜂的引誘作用[15]。而在本試驗(yàn)中，夜蛾黑卵蜂對(duì)處女蛾、交配但未產(chǎn)卵、產(chǎn)卵前期及產(chǎn)卵后期這4個(gè)不同生理階段的甜菜夜蛾雌蛾性附腺浸提液均表現(xiàn)出明顯的趨向行為，性附腺是其釋放寄主利它素的一個(gè)重要組織器官。甜菜夜蛾在不同生理階段其性附腺內(nèi)含物的組成結(jié)構(gòu)與含量是否會(huì)產(chǎn)生明顯的變化有待進(jìn)一步研究。

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Olfactory Response ofTelenomus remusNixon to the Volatile Information Objects fromSpodoptera exigua(Hübner)

CHEN Li,CHEN Kewei,XU Zaifu,LIANG Guangwen
(Department of Entomo1ogy,South China Agricu1tura1 University,Guangzhou 540640）

O1factory response ofTe1enomus remusNixon to the hexane extracts ofSpodoptera exigua(Hübner)fema1e moth sca1e,abdomina1 tips,egg masses and accessory g1ands of different physio1ogica1 stages were measured by using a Y-tube o1factometer.The resu1ts showed that extracts from abdomina1 tips,egg masses and accessory g1ands ofS.exiguahad strong impacts on the host 1ocation ofT.remus,whi1e the extracts from fema1e moth sca1e exhibited not significant attraction forT.remus.vo1ati1e infochemica1s from egg masses ofS.exiguacou1d be extracted with water,acetone and hexane.The hexane extracts from egg masses and abdomina1 tips exhibited significant attraction toT.remusat the concentrations 10 egg masses/mL and 2 mg/mL,respective1y.The hexane extracts from accessory g1ands of different physio1ogica1 stages a11 had strong impacts on the searching behavior ofT.remus.The hexane extracts from accessory g1ands of virgin fema1es exhibited attraction toT.remusat the concentrations 30 μL,whi1e the hexane extracts from accessory g1ands of mated-fema1es before first ovipositon,fema1es at ear1ier and 1ater oviposition stage e1icited the searching reaction byT.remusat the the concentrations 60 μL.

Te1enomus remus;Spodoptera exigua;Information objects;O1factory response

10.3865/j.issn.1001-3547.2010.18.002

公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專(zhuān)項(xiàng)經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目（200803007），國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2008BA DA5B01-02）

陳麗（1986-），女，碩士研究生，研究方向是農(nóng)業(yè)昆蟲(chóng)與害蟲(chóng)防治，電話：020-85283137，E-mai1：chenxiaochun9977@163.com

陳科偉，通信作者，電話：020-85283137，E-mai1：chenkewei@scau.edu.cn

2010-08-20