邵文武,張 輝

(佳木斯大學(xué),黑龍江 佳木斯 154007)

熱休克蛋白又稱(chēng)應(yīng)激蛋白,是在熱休克狀態(tài)下啟動(dòng)的一系列特殊基因編碼合成的蛋白質(zhì),廣泛存在于真核細(xì)胞內(nèi),能夠在應(yīng)激狀態(tài)下保護(hù)細(xì)胞組織免受傷害,并對(duì)受損組織有修復(fù)作用。因其在體內(nèi)與多種多肽和蛋白質(zhì)形成復(fù)合體,生理狀態(tài)下在蛋白質(zhì)的折疊與伸展,多肽的組裝過(guò)程中起調(diào)節(jié)作用,但又不改變靶蛋白的結(jié)構(gòu),故熱休克蛋白又被稱(chēng)作分子伴侶[1]?；谄浞肿恿康拇笮∮袑W(xué)者建議將其分為四類(lèi),HSP90家族,HSP70家族,HSP60家族及小分子量 sHSP家族。其中 HSP70具有高度的保守性 ,是熱休克蛋白重要的家族之一,在組織細(xì)胞中的含量也最多。HSP70在應(yīng)激時(shí)保護(hù)核內(nèi)重要遺傳物質(zhì),同時(shí)作為分子伴侶參與蛋白質(zhì)折疊,轉(zhuǎn)運(yùn),裝配,使變性肽鏈重新折疊并清除無(wú)法恢復(fù)的變性肽鏈,對(duì)于維持細(xì)胞持續(xù)生存及加速損傷修復(fù)有重要作用[2]。目前它在腫瘤、癌癥、黏膜病變方面已被深入研究,而對(duì)其在口腔特別是在牙髓病方面的研究相對(duì)較少。國(guó)內(nèi)學(xué)者呂平等[3]曾做過(guò) HSP70在人正常牙和齲壞牙髓中的免疫定位,發(fā)現(xiàn)其分布于成牙本質(zhì)細(xì)胞及細(xì)胞突,牙髓成纖維細(xì)胞,血管內(nèi)皮細(xì)胞及管壁平滑肌細(xì)胞中。推測(cè)了其在牙髓自身修復(fù)中的作用,但沒(méi)有闡明其在牙髓炎中的作用。蘭衛(wèi)東[4]等研究了HSP70在大鼠牙髓炎中的免疫組化表達(dá)推測(cè)了其在牙髓抗損傷修復(fù)過(guò)程中可能的作用。但是,HSP70是如何誘導(dǎo)成牙本質(zhì)細(xì)胞的發(fā)生,保護(hù)正常牙髓組織免受炎癥刺激和損傷的牙髓組織如何形成修復(fù)性牙本質(zhì),其具體機(jī)制學(xué)者們雖有研究,卻只是推測(cè),尚無(wú)定論。

圖1 鼠穿髓144h

本實(shí)驗(yàn)選取大鼠磨牙為研究對(duì)象進(jìn)行程度不同的機(jī)械性損傷(淺磨,深磨,穿髓 )實(shí)驗(yàn),因?yàn)槿藗儗?duì)大鼠牙髓組織的研究已經(jīng)積累了大量資料,故對(duì)于大量的重復(fù)性實(shí)驗(yàn)是較理想的選擇,同時(shí)大鼠磨牙牙髓組織結(jié)構(gòu)與人類(lèi)牙髓基本相似,通過(guò)對(duì)大鼠磨牙進(jìn)行由淺入深的機(jī)械性損傷,以其更好的了解牙髓在抵御外界刺激中 HSP70的表達(dá)情況,為 HSP70如何參與牙髓的抗損傷修復(fù)提供更為可靠的理論依據(jù),同時(shí)也可以為相關(guān)藥物的研制開(kāi)拓新思路。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Wistar大鼠 ,雄性,40只,體重 200～ 250g,均購(gòu)自佳木斯大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物中心。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

根據(jù)不同的處理時(shí)間將30只大鼠隨機(jī)分為 3組,每組10只,即正常組、穿髓72h組和穿髓 144h組。10%水合氯醛腹部注射麻醉后分別在大鼠左右上頜第一磨牙合面進(jìn)行機(jī)械性鉆磨。各組大鼠分別按規(guī)定時(shí)間脫頸處死,將左右側(cè)上頜第一磨牙及周?chē)啦酃堑慕M織塊作石蠟切片,分別進(jìn)行常規(guī)HE染色和免疫組化染色后,光鏡觀察。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠磨牙標(biāo)本經(jīng) HE染色后

見(jiàn)圖 1～ 3。

圖2 鼠穿髓72h

圖3 鼠陰性對(duì)照

(1)正常組牙髓成牙本質(zhì)細(xì)胞排列整齊,無(wú)血管擴(kuò)張充血,未見(jiàn)炎細(xì)胞浸潤(rùn)。(2)穿髓 72h組可見(jiàn)穿髓點(diǎn)周?chē)写罅苛＜?xì)胞和巨噬細(xì)胞浸潤(rùn),還有少量淋巴細(xì)胞。個(gè)別標(biāo)本有中心的壞死區(qū)。(3)穿髓144h組可見(jiàn)大量炎細(xì)胞浸潤(rùn),以淋巴細(xì)胞居多,壞死區(qū)擴(kuò)大,細(xì)胞間纖維成分增多。

2.2 各組大鼠磨牙標(biāo)本經(jīng)免疫組化染色后

(1)正常組牙髓組織未見(jiàn)陽(yáng)性著色。(2)穿髓3D組可見(jiàn)成牙本質(zhì)細(xì)胞,血管內(nèi)皮中度至強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá),成纖維細(xì)胞中度表達(dá),中性粒細(xì)胞仍呈強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。個(gè)別標(biāo)本壞死區(qū)為棕黃色均質(zhì)中度陽(yáng)性表達(dá)。(3)穿髓7D組壞死區(qū)擴(kuò)大呈均質(zhì)弱陽(yáng)性表達(dá),成牙本質(zhì)細(xì)胞,牙髓成纖維細(xì)胞及血管內(nèi)皮細(xì)胞減少,均呈弱陽(yáng)性表達(dá),修復(fù)性牙本質(zhì)弱陽(yáng)性表達(dá)。

3 討論

牙髓的損傷與修復(fù),取決于牙髓的免疫防御能力和牙髓組織的解剖生理特點(diǎn),刺激的形式,強(qiáng)度和作用時(shí)間等。本研究選取大鼠雙側(cè)上頜磨牙為研究對(duì)象,采用穿髓以便更加清晰的觀察 HSP70在牙髓中的動(dòng)態(tài)表達(dá)特點(diǎn) ,更好的為 HSP70在人牙髓中的表達(dá)做借鑒和參考。本實(shí)驗(yàn)的病理結(jié)果顯示:穿髓72h組除牙髓細(xì)胞,血管內(nèi)皮細(xì)胞及中性粒細(xì)胞強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)外部分標(biāo)本還可見(jiàn)壞死區(qū)呈棕黃色均質(zhì)染色。在穿髓點(diǎn)附近的成牙本質(zhì)細(xì)胞由于受到鉆磨損傷的直接刺激,HSP70強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。壞死區(qū)牙髓由于細(xì)胞變性壞死 ,胞體溶解 ,呈現(xiàn)均質(zhì)樣黃色染色。穿髓144h組,牙髓壞死區(qū)擴(kuò)大,殘存牙髓組織中炎細(xì)胞浸潤(rùn)減少,炎癥基本消退。殘存牙髓組織開(kāi)始形成修復(fù)性牙本質(zhì),免疫組化結(jié)果顯示修復(fù)性牙本質(zhì)弱陽(yáng)性表達(dá),此時(shí),成牙本質(zhì)細(xì)胞,前期牙本質(zhì)細(xì)胞層仍有陽(yáng)性表達(dá),提示 HSP70可能參與牙髓修復(fù)過(guò)程。通過(guò)對(duì)大鼠牙髓的研究,我們更加直觀詳盡的了解了在牙髓的不同反應(yīng)期HSP70在牙髓中的動(dòng)態(tài)表達(dá),即牙髓損傷早期 HSP70提供抗炎癥反應(yīng),在炎癥晚期,HSP70表達(dá)則顯示 HSP70積極參與牙髓的損傷與修復(fù)。為其在人類(lèi)牙髓中表達(dá)的研究提供了可靠的理論數(shù)據(jù)。

[1]Hays SA,Dice JF.Role for molecularchaperonesin protein degradation[J].J Cell Biol,1996,132(3):255-258

[2]Boston R S,Viitanen PV,Vierling E.Molecular chaperones and protein folding in plant[J].Plant Mol Biol,1996,32(1-2):191-222

[3]呂平,邊專(zhuān),陳智.熱休克蛋白70在人正常牙和齲壞牙牙髓中的免疫定位 [J].牙體牙髓牙周病學(xué)雜志,1999,9(4):267-269

[4]蘭衛(wèi)東,解寶生,王培新,等.熱休克蛋白70在大鼠牙髓炎中的免疫組化研究 [J].口腔醫(yī)學(xué)雜志,2004,24(4):202-205