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        雷公藤多甙對(duì)體外培養(yǎng)的眼眶成纖維細(xì)胞增殖和透明質(zhì)酸分泌的影響

        2010-04-17 11:32:40常翠榮孫豐源于建國(guó)
        關(guān)鍵詞:眼眶依賴性透明質(zhì)

        常翠榮 孫豐源 于建國(guó)

        (天津市寶坻區(qū)人民醫(yī)院眼科 天津?qū)氎?301800)

        甲狀腺相關(guān)眼病(thyroid-associated ophthalmopathy,TAO)是眼眶常見病,其可影響患者的外觀,危及患者的視力,影響患者的正常生活。該病的發(fā)病機(jī)制不清,目前認(rèn)為是一種自身免疫性疾病,多數(shù)學(xué)者認(rèn)為眶后成纖維細(xì)胞是TAO自身免疫的靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞。目前TAO的治療較局限,缺乏特效的藥物。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用雷公藤多甙作用于體外培養(yǎng)人眼眶后成纖維細(xì)胞,觀察其對(duì)成纖維細(xì)胞增殖和透明質(zhì)酸(HA)分泌的影響,為藥物治療甲狀腺相關(guān)眼病提供實(shí)驗(yàn)室證據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 材料 雷公藤多甙藥片(中國(guó)制藥廠);MTT(SIGMA);RPMI1640(GIBCO);小牛血清(hyclone);0.25%胰蛋白酶(SIGMA);0.02%EDTA(實(shí)驗(yàn)室配制);二甲基亞砜-DMSO(上海生工生物工程有限公司);磷酸鹽緩沖液-PBS(GIBCO 0.01M,pH7.2);青鏈霉素(SIGMA);6孔、24孔、96孔細(xì)胞培養(yǎng)板(GLOSTAR);酶聯(lián)免疫測(cè)定儀(BIO-RAD MODEL2550 EIA JAPAN),CO2孵箱(美國(guó) Forma scientific3336);B600型低速自動(dòng)平衡離心機(jī)(白洋離心機(jī)廠);OLYMBUS照像顯微鏡由天津醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)影像室提供;透明質(zhì)酸放射免疫分析藥盒(北京北方生物技術(shù)研究所,批號(hào):041120);SN-695B型智能放免γ測(cè)量?jī)x。

        1.2 方法 實(shí)驗(yàn)標(biāo)本取自海綿狀血管瘤手術(shù)中切除的眶后組織,共3例。將手術(shù)過(guò)程中切除的眶后組織進(jìn)行成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng),傳代,細(xì)胞鑒定,并觀察不同濃度的雷公藤多甙對(duì)成纖維細(xì)胞增殖和透明質(zhì)酸分泌的影響。

        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件,所有數(shù)據(jù)用表示,經(jīng)正態(tài)分布和方差齊性檢驗(yàn),進(jìn)行組間單因素方差分析。

        2 結(jié)果

        雷公藤多甙對(duì)眶成纖維細(xì)胞的抑制作用呈時(shí)間依賴性。而同一時(shí)間內(nèi),隨著藥物濃度的增加,抑制率(IR)增強(qiáng),其對(duì)細(xì)胞的作用具有劑量依賴性和時(shí)間依賴性。雷公藤多甙對(duì)成纖維細(xì)胞分泌透明質(zhì)酸也呈時(shí)間依賴性和劑量依賴性,見表1,表2。

        表1 不同濃度藥物組作用不同時(shí)間后的細(xì)胞增殖(±s,n=10)

        表1 不同濃度藥物組作用不同時(shí)間后的細(xì)胞增殖(±s,n=10)

        注:同一時(shí)間,不同濃度組與對(duì)照組比較,*P<0.05,ΔP<0.01

        分組 藥物濃度(μg/mL) 24h OD值 IR(%)48h OD值 IR(%)72h OD值 IR(%)0.225 ±0.010 - 0.312 ±0.010 - 0.398 ±0.011 -實(shí)驗(yàn)組 0.625 0.233 ±0.011 -3.56 0.303 ±0.012 2.90 0.366 ±0.023* 8.031.25 0.191 ±0.016 15.11 0.285 ±0.013* 8.77 0.321 ±0.017Δ 19.312.5 0.137 ±0.007* 39.11 0.247 ±0.015Δ 20.90 0.228 ±0.019Δ 42.605.0 0.115 ±0.006Δ 48.89 0.189 ±0.011Δ 39.55 0.147 ±0.022Δ 63.0110.0 0.107 ±0.018Δ 52.44 0.130 ±0.021Δ 58.20 0.109 ±0.013Δ對(duì)照組072.70

        表2 不同濃度藥物組作用不同時(shí)間后HA的含量(±s,n=10)

        表2 不同濃度藥物組作用不同時(shí)間后HA的含量(±s,n=10)

        注:同一時(shí)間,不同濃度組與對(duì)照組比較,*P<0.05,ΔP<0.01

        分組 藥物濃度(mg/mL)24h 48h 72h對(duì)照組0 50.10 ±13.56 61.31 ±23.55 133.30 ±5.21實(shí)驗(yàn)組 0.625 41.67 ±9.35 43.25 ±13.77 61.11 ±26.12Δ1.25 39.96 ±16.71 39.86 ±10.73* 49.57 ±4.50Δ2.5 39.76 ±9.34 36.26 ±2.90Δ 48.76 ±9.67Δ5.0 30.61 ±12.84* 35.18 ±5.44Δ 45.53 ±16.64Δ10.0 18.74 ±5.94Δ 30.82 ±13.83Δ 32.69 ±15.40Δ

        3 討論

        目前公認(rèn)的TAO發(fā)病機(jī)制為其在內(nèi)、外因素作用下引起甲狀腺損害,導(dǎo)致甲狀腺抗原的釋放,自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞被激活,激活的T淋巴細(xì)胞進(jìn)入眼眶,并釋放大量的細(xì)胞因子,如IL-1,IFN-γ,TGF-β,TNF等,這些細(xì)胞因子作用于眼眶成纖維細(xì)胞,使其增殖及合成糖胺多糖(GAG),引起眼眶組織的體積增加,另一方面使免疫調(diào)控蛋白如HLA-DR,ICAM-1,HSP-72表達(dá)增強(qiáng),增強(qiáng)眼眶局部的自身免疫反應(yīng)。同時(shí)激活的成纖維細(xì)胞又可分泌多種細(xì)胞因子,其中多數(shù)為炎性分子,與眼眶浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞等分泌的細(xì)胞因子共同作用于眼眶組織,引起眼眶的炎性反應(yīng)。成纖維細(xì)胞是TAO發(fā)病的靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞。在我們的實(shí)驗(yàn)中,應(yīng)用不同濃度的雷公藤作用于眶成纖維細(xì)胞,可見其明顯抑制眶成纖維細(xì)胞的增殖和透明質(zhì)酸的分泌,并呈濃度和時(shí)間依賴性。雷公藤多甙具有較強(qiáng)的抑制CD4/CD8的功能,使CD4/CD8值下降??赡芡ㄟ^(guò)T輔助細(xì)胞減少,抑制T細(xì)胞增高,達(dá)到糾正T細(xì)胞亞群紊亂,使T細(xì)胞功能得到改善,由此調(diào)整免疫應(yīng)答。實(shí)驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)其有促進(jìn)腎上腺合成糖皮質(zhì)激素以及增加腎上腺皮質(zhì)功能的作用??蓽p輕水腫和炎性細(xì)胞浸潤(rùn),減輕血漿前列腺素E2含量和抑制肉芽組織增生。雷公藤多甙具有與糖皮質(zhì)激素相似的免疫抑制作用,但無(wú)抑制下丘腦、垂體、腎上腺皮質(zhì)軸的作用,故其副作用較糖皮質(zhì)激素小。其臨床常見的副作用為腎功能、肝功能受損,血白細(xì)胞下降,血小板減少,月經(jīng)失調(diào),精子減少,胃腸道反應(yīng),皮膚色素沉著等。雷公藤多用于多種免疫相關(guān)性疾病的治療,如虹膜睫狀體炎、葡萄膜炎、白塞病。羅燕等[1]曾觀察雷公藤多甙片治療TAO的臨床療效,結(jié)果顯示,應(yīng)用雷公藤多甙治療后患者球結(jié)膜水腫消失,眼瞼腫脹減輕,上、下瞼回縮均有不同程度的減輕,部分患者上瞼遲落消失,眼球突出度減少。B超顯示各條眼外肌的厚度均有不同程度的降低。王嵐[2]報(bào)道雷公藤多甙可以達(dá)到與激素治療相當(dāng)?shù)男Ч?,?duì)眼球突出有較好的治療效果,且不良反應(yīng)少且輕。有報(bào)道提示雷公藤多甙小劑量多次用藥較安全而且療效較好[3],故筆者認(rèn)為在甲功正常的輕中度TAO患者中可使用雷公藤多甙以取得較好的療效。

        [1]羅 燕,鄭大文,王 湘,等.雷公藤多甙片治療甲狀腺相關(guān)眼眶病變的臨床觀察[J].中國(guó)中醫(yī)眼科雜志,2002,12(5):95

        [2]王 嵐.Graves眼病免疫抑制劑療效探討[J].浙江臨床醫(yī)學(xué),2007,9(2):197

        [3]李莉霞,金若敏,李化奎,等.雷公藤多甙多次給藥的免疫抑制作用及安全范圍的研究[J].中國(guó)新藥與臨床雜志,2006,25(4):248

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