曹艷林 柯 浩 劉振興 林 敏

硒是生態(tài)環(huán)境中重要的微量元素和必需的生命元素，環(huán)境中硒的過量或缺乏均會(huì)導(dǎo)致人體和動(dòng)物產(chǎn)生疾病[1]。20世紀(jì)30年代,美歐一些地區(qū)由于過量硒引起的牲畜“堿毒病”(Alka-line Disease)和“蹣跚癥”(Blind Stagger)使硒的毒害問題引起關(guān)注，迄止50年代，硒一直被認(rèn)為是重要的環(huán)境污染元素[2]。1957年Schwarz和Flotz首次證明動(dòng)物需要硒元素營(yíng)養(yǎng)，其后Rotruck和Awosthi分別于1973年和1975年確定了硒是谷胱甘肽過氧化物酶的重要組成成分，缺硒會(huì)引起牲畜白肌病。從此，硒在人畜健康、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)、環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域受到普遍重視，世界衛(wèi)生組織也已確認(rèn)硒是動(dòng)物必需的營(yíng)養(yǎng)元素[3-4]。硒在水產(chǎn)上的研究已得到廣泛開展，本文從魚類硒蛋白及硒對(duì)魚類的生物學(xué)作用等方面綜述了硒在魚類中的研究進(jìn)展。

1 魚類硒蛋白

硒蛋白廣泛存在于古生菌、細(xì)菌和大部分真核生物中，硒以硒代半胱氨酸(Sec)的形式存在于硒蛋白中，這種氨基酸由一個(gè)讀碼框架內(nèi)的終止密碼子UGA編碼，編碼機(jī)制依賴于特殊的Sec t-RNA、延伸因子及位于mRNA 3'UTR中的硒代半胱氨酸插入序列(selenocysteine insertion sequence，SECIS)，后者形成的頸環(huán)結(jié)構(gòu)協(xié)助tRNA識(shí)別UGA[5]。

哺乳動(dòng)物中已發(fā)現(xiàn)至少35種硒蛋白，在生長(zhǎng)、發(fā)育、抗氧化、免疫等方面發(fā)揮著重要的生物學(xué)作用。魚類中也已發(fā)現(xiàn)谷胱甘肽過氧化物酶 (glutathione peroxidase，GPx)、碘化甲狀腺氨酸脫碘酶(iodothyronine deiodinase)、硒蛋白P、硒蛋白W、硒蛋白N等多種硒蛋白，并不斷有新的硒蛋白發(fā)現(xiàn)，在其功能、進(jìn)化等方面的研究也得到廣泛開展。在鰱魚(Hypophthalmichthys molitrix)、鳙魚(Aristichthys nobilis)和草魚(Ctenopharyngodon idellus)肝臟中克隆到GPx基因，在進(jìn)化分析上與哺乳動(dòng)物GPx2聚類，但其生理功能與哺乳動(dòng)物GPx1相似[6]。在鯉魚(Cyprinus carpio)中發(fā)現(xiàn)兩種GPx4基因，這兩種基因的DNA序列和蛋白序列同源性分別為78%和79%，GPx4a廣泛存在于各組織中，并以肝臟中轉(zhuǎn)錄水平最高；GPx4b在肝臟、心臟、肌肉和腦中表達(dá)量低于GPx4a，且在腎臟中幾乎不表達(dá)，但在嗅葉中表達(dá)量是GPx4a的2倍。重金屬離子鎘(Cd2+)對(duì)GPx4a的表達(dá)影響不大，但會(huì)使GPx4b表達(dá)量大幅下降[7]。在底鳉(Fundulus heteroclitus)5'-甲狀腺氨酸脫碘酶的克隆表達(dá)分析中發(fā)現(xiàn)，底鳉的Ⅱ型甲狀腺氨酸脫碘酶核苷酸序列和氨基酸序列均與已克隆的哺乳動(dòng)物和兩棲類動(dòng)物Ⅱ型甲狀腺氨酸脫碘酶高度同源，表明硒蛋白的脫碘酶家族在脊椎動(dòng)物進(jìn)化過程中的高度保守，揭示了它們?cè)诩谞钕偌に卣{(diào)節(jié)中的重要作用[8]。大多數(shù)硒蛋白只含有一個(gè)硒代半胱氨酸殘基，人、牛和嚙齒目動(dòng)物的硒蛋白P含有10～12個(gè)硒代半胱氨酸，而在斑馬魚(Danio rerio)中克隆得到硒蛋白P分別為Pa和Pb的序列分析中發(fā)現(xiàn)，硒蛋白Pa含有高達(dá)17個(gè)硒代半胱氨酸位點(diǎn)，且在3'-UTR含有兩個(gè)SECIS元件，而硒蛋白Pb只含有一個(gè)SECIS元件和一個(gè)硒代半胱氨酸位點(diǎn)。在斑馬魚胚胎原位雜交分析中還發(fā)現(xiàn)，硒蛋白P在受精卵和卵黃囊中表達(dá)量很高[9-10]。硒蛋白P序列的N端含有UxxC基序，C端富含硒代半胱氨酸位點(diǎn)，可能同時(shí)具有氧化還原和儲(chǔ)存、運(yùn)輸硒的功能。硒蛋白W最早在處于缺硒狀態(tài)的羊中發(fā)現(xiàn)，氨基酸序列由85～88個(gè)氨基酸殘基組成，在魚中，硒代半胱氨酸位點(diǎn)位于第13個(gè)氨基酸殘基。硒蛋白W的具體生物學(xué)功能尚不清楚，但有證據(jù)顯示，它具有抗氧化、參與細(xì)胞免疫、特異性靶向甲基汞和硫氧化蛋白樣功能[11]。蘭尼堿受體(ryanodine receptor,RyR)是肌肉細(xì)胞的鈣離子(Ca2+)釋放通道，在斑馬魚胚胎肌肉形成研究中發(fā)現(xiàn)，硒蛋白N通過氧化還原調(diào)節(jié)肌肉細(xì)胞鈣離子釋放通道，蘭尼堿受體功能缺失或硒蛋白N功能缺失均會(huì)干擾斑馬魚胚胎肌肉正常的發(fā)育分化和減少慢肌纖維的生成，導(dǎo)致肌原纖維出現(xiàn)畸形并使肌節(jié)結(jié)構(gòu)異常[12]。硒蛋白J只在輻亞綱魚類和海膽中發(fā)現(xiàn)，可能作為晶狀體結(jié)構(gòu)蛋白。在斑馬魚發(fā)育早期，硒蛋白J在眼水晶體中優(yōu)先表達(dá)[13]。硒蛋白Fep15只存在于魚中，且成為15 KDa硒蛋白Sep15家族的一員，Sep15家族的其它成員催化位點(diǎn)由硒代半胱氨酸(Sec)和半胱氨酸(Cys)組成，而Fep15催化位點(diǎn)只有硒代半胱氨酸。當(dāng)Fep15在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中短暫表達(dá)時(shí)，F(xiàn)ep15依賴SECIS和SECIS-綁定蛋白2(SBP2)將硒代半胱氨酸摻入到延伸的肽鏈中，并由N端信號(hào)肽靶向內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。Sep15家族同源進(jìn)化樹分析表明，F(xiàn)ep15是基因復(fù)制的進(jìn)化結(jié)果[14]。

2 硒對(duì)魚類生長(zhǎng)發(fā)育的影響

甲狀腺激素(Thyroid hormone,TH)具有多效性，充足的甲狀腺激素水平對(duì)于脊椎動(dòng)物不同組織的生長(zhǎng)發(fā)育和整個(gè)生命代謝過程的調(diào)節(jié)非常重要[15]。甲狀腺激素參與神經(jīng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)移和分化、髓鞘形成和突觸發(fā)生等生物學(xué)過程，在脊椎動(dòng)物腦發(fā)育過程中起關(guān)鍵作用，在海洋硬骨魚孵化到幼魚的轉(zhuǎn)變過程中起重要作用[16]。四碘甲狀腺原氨酸(Thyroxine,T4)是脊椎動(dòng)物甲狀腺的主要分泌物，是甲狀腺激素的非活性形式，T4通過Ⅰ型脫碘酶(iodothyronine deiodinase-1,D1)或Ⅱ型脫碘酶(iodothyronine deiodinase-2,D2)脫去外環(huán)上的碘,生成三碘甲狀腺原氨酸(Triiodothyronine,T3)，T3為甲狀腺激素的活性形式。Ⅲ型脫碘酶(iodothyronine deiodinase-3,D3)可使T4內(nèi)環(huán)脫碘生成缺乏甲狀腺激素受體(thyroid hormone receptor,TR)介導(dǎo)的生物學(xué)活性的rT3(Reverse T3)分子，Ⅲ型脫碘酶也可使T3脫碘生成T2，從而終止甲狀腺激素的功能[17]。三種脫碘酶D1、D2和D3均為含硒酶，硒以硒代半胱氨酸(Sec)的形式存在于酶的活性中心，通過協(xié)同作用，激活和終止甲狀腺激素活性，間接調(diào)控甲狀腺激素介導(dǎo)的生物學(xué)過程。脫碘酶對(duì)甲狀腺激素的調(diào)控非常重要[18]。因此，硒能通過脫碘酶對(duì)脊椎動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生間接的影響。在硬骨魚中，早期的胚胎發(fā)育依賴母體累積在蛋黃中的主要由T4組成的甲狀腺激素，此時(shí)脫碘酶D1和脫碘酶D2得到優(yōu)先表達(dá)，以提供充足的T3，在斑馬魚中觀察到脫碘酶D1在受精至孵化前基因表達(dá)量升高，而脫碘酶D2在孵化后基因表達(dá)量大幅上升[19-20]。脫碘酶D1、D2和D3通過控制T3的活性調(diào)控脊椎動(dòng)物脂肪的生成[21]。在鱸魚(Lateolabrax japomicus)餌料中添加亞硒酸鈉，經(jīng)過10周的飼養(yǎng)試驗(yàn)，結(jié)果表明：當(dāng)餌料中硒水平為0.4 mg/kg時(shí)，鱸魚的生長(zhǎng)性能達(dá)到最大[22]；在異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)餌料中添加不同濃度硒酵母的飼養(yǎng)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，硒酵母組相對(duì)增重率比對(duì)照組增加16%～31%[23]，表明適量硒對(duì)魚類的生長(zhǎng)有促進(jìn)作用。

3 硒對(duì)魚類的抗氧化作用

好氧生物的生物代謝過程需要氧的參與，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)環(huán)境中超氧化自由基、羥自由基和過氧化氫等活性氧(reactive oxygen species,ROS)的累積，如果累積量超過一定的范圍，則會(huì)對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒害作用。因此，好氧生物建立了非酶促和酶促抗氧化防御體系來中和這些活性氧。酶促體系是由一系列基因編碼的蛋白組成的，包括超氧化物歧化酶(superoxide dismutases,SOD)、過氧化氫酶(catalases,CAT)、抗壞血酸過氧化物酶(ascorbate peroxidases,APX)和谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidases,GPx)等。其中GPx是含硒酶，硒以硒代半胱氨酸(Sec)的形式存在于酶的活性中心[24]。在脊椎動(dòng)物組織中，存在4種主要的含硒谷胱甘肽過氧化物酶同工酶：胞質(zhì)GPx(GPx1)、胃腸道GPx(GPx2)、血清 GPx(GPx3)、磷脂氫 GPx(GPx4)。其中GPx1、GPx3和GPx4在不同組織中廣泛存在。GPx利用還原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)作為電子供體將過氧化氫或有機(jī)過氧化物還原為水和相應(yīng)的醇，起到減少ROS累積的作用。GPx1～3以同源四聚體形式存在，而GPx4為單聚體，這使得GPx4可以直接還原磷脂和膽固醇過氧化物[25]。在魚類中，GPx1、GPx4已得到克隆，其表達(dá)量的高低已成為衡量魚體抗氧化水平的重要指標(biāo)。加硒可抑制磷脂過氧化(lipid peroxidation,LPO)水平升高，同時(shí)防止魚鰓和白肌中GPx活性降低，從而保護(hù)頭石脂鯉(Brycon cephalus)免受甲基對(duì)硫磷(Methyl parathion,MP)介導(dǎo)的氧化應(yīng)激[26]?；瘜W(xué)污染，尤其是重金屬離子的污染是誘導(dǎo)生物系統(tǒng)產(chǎn)生ROS的重要原因，硒可以通過提高抗氧化物酶活性防止ROS誘導(dǎo)的亞細(xì)胞單位膜結(jié)構(gòu)脂質(zhì)過氧化產(chǎn)生不飽和脂肪酸對(duì)細(xì)胞造成傷害[27]。虹鱒(Oncorhynchus mykiss)受到重金屬離子鎘(Cd2+)、鉻(Cr3+)、鉛(Pb2+)、銅(Cu2+)脅迫，會(huì)導(dǎo)致組織中CAT、GPx和SOD酶活性顯著低于對(duì)照組，而加硒組(Cd2++Se4+、Cr3++Se4+、Pb2++Se4+、Cu2++Se4+) 的組織抗氧化物酶活性維持在正常水平[28-29]。魚體暴露在含一定量甲基汞的環(huán)境中會(huì)對(duì)其行為學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生終生影響，微量元素硒可提高細(xì)胞的抗氧化防御能力，減輕甲基汞所誘導(dǎo)的機(jī)體缺陷的嚴(yán)重性。環(huán)境中的甲基汞與斑馬魚(Danio rerio)在弱光下對(duì)旋轉(zhuǎn)黑條的反應(yīng)能力表現(xiàn)出劑量效應(yīng)，即甲基汞濃度越高，反應(yīng)能力越弱，加入一定比例的硒蛋氨酸可顯著提高其反應(yīng)能力[30]。

4 硒對(duì)魚類免疫學(xué)作用

硒以硒代半胱氨酸(Sec)的形式摻入到硒蛋白中發(fā)揮其生物學(xué)作用。在脊椎動(dòng)物中，硒蛋白幾乎調(diào)節(jié)所有組織的ROS和氧化還原狀態(tài)，從而對(duì)機(jī)體炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答產(chǎn)生重要影響[31]。在硒對(duì)中性粒細(xì)胞功能影響的研究中發(fā)現(xiàn)，中性粒細(xì)胞通過產(chǎn)生ROS參與殺傷外源微生物，但ROS同樣會(huì)殺傷中性粒細(xì)胞，GPx1通過清除ROS參與了中性粒細(xì)胞的保護(hù)系統(tǒng)[32]。巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞將抗原遞呈給T淋巴細(xì)胞并具有攝取和殺傷外源微生物的功能，在機(jī)體免疫調(diào)節(jié)中起重要作用。巨噬細(xì)胞被細(xì)菌內(nèi)毒素等激活會(huì)合成和分泌促炎癥反應(yīng)酶類、細(xì)胞因子和趨化因子，起始和控制炎癥反應(yīng)和免疫反應(yīng),研究發(fā)現(xiàn)，硒通過抑制絲裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)途徑抑制巨噬細(xì)胞中兩個(gè)重要的促炎癥反應(yīng)酶基因環(huán)加氧酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)和腫瘤壞死因子-α(tumor nectosis factor-α,TNF-α)的表達(dá)。ROS造成的氧化應(yīng)激是炎癥反應(yīng)信號(hào)通路的關(guān)鍵調(diào)節(jié)者，激活的巨噬細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生呼吸爆發(fā)，使胞內(nèi)產(chǎn)生大量的ROS,引發(fā)炎癥反應(yīng)，但如果ROS不被及時(shí)清除，則會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜功能障礙、DNA損傷和蛋白失活。因此，巨噬細(xì)胞的抗氧化能力對(duì)自身防御和控制胞內(nèi)氧化水平非常重要，谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)、硫氧還蛋白還原酶(thioredoxin reductase,TR)和其它硒蛋白酶在對(duì)抗ROS中起關(guān)鍵作用[33]。在哺乳動(dòng)物的研究中還發(fā)現(xiàn)，硒蛋白通過抗氧化機(jī)制調(diào)節(jié)T細(xì)胞免疫，且硒和硒蛋白可能通過調(diào)節(jié)與細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)相關(guān)的基因表達(dá)和巨噬細(xì)胞侵襲力來調(diào)控機(jī)體免疫和組織平衡[34-35]。硒和硒蛋白的免疫功能在魚類中的研究也在逐漸開展。用一定濃度愛德華菌(Edwardsiella ictaluri)毒株對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰(Ictalurus punctatus)進(jìn)行攻毒，發(fā)現(xiàn)魚體抗體生成普遍隨餌料中硒濃度升高而升高，且餌料中添加硒蛋氨酸 (Se-Met)或硒酵母(Se-Yeast)均能提高巨噬細(xì)胞趨化反應(yīng)能力[36]。毛足鱸(Trichogaster trichopterus)頭腎細(xì)胞在濃度為4 mg/kg的亞硒酸鈉溶液中呼吸爆發(fā)水平顯著升高，且一定濃度的亞硒酸鈉可提高其血清的抗菌酶活性[37]。

5 硒的化學(xué)形態(tài)對(duì)魚類營(yíng)養(yǎng)與生理的影響

微量元素硒的生物利用率與硒被機(jī)體吸收的化學(xué)形式和吸收劑量密切相關(guān)。在自然界中，硒以無機(jī)硒和有機(jī)硒兩種形式存在，常見的無機(jī)硒有亞硒酸鈉和硒酸鈉，有機(jī)硒主要為硒蛋白和硒多糖。亞硒酸鈉和硒酸鈉被廣泛用于無機(jī)硒添加劑的研究；硒酵母(Se-yeast)中有機(jī)硒含量豐富，成為理想的有機(jī)硒添加劑。研究表明，動(dòng)物對(duì)無機(jī)硒的吸收是靠腸道被動(dòng)擴(kuò)散，而對(duì)有機(jī)硒的吸收是通過主動(dòng)運(yùn)輸，因此，對(duì)有機(jī)硒的吸收率高于無機(jī)硒[38]。在虹鱒(Oncorhynchus mykiss)對(duì)有機(jī)硒和無機(jī)硒吸收利用的對(duì)比試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，虹鱒對(duì)硒酵母的吸收利用率顯著高于亞硒酸鈉；魚組織硒增加量的測(cè)定中，除幽門盲囊和肝臟組織外，飼喂硒酵母組組織硒增加量顯著高于飼喂亞硒酸鈉組[39]。在異育銀鯽(Carassius auratus gibelio)基礎(chǔ)料中添加0.2 mg/kg的亞硒酸鈉和0.2 mg/kg的有機(jī)硒(含硒蛋白和硒多糖)，經(jīng)102 d的喂養(yǎng)試驗(yàn)，結(jié)果顯示，投喂有機(jī)硒組，魚體增重率比對(duì)照組和亞硒酸鈉組分別提高了15.29%和12.35%[40]。在對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰(Ictalurus punctatus)進(jìn)行9周的飼養(yǎng)試驗(yàn)中，魚體達(dá)到最大增重率時(shí)，餌料中所需硒蛋氨酸(Se-Met)、硒酵母(Se-yeast)和亞硒酸鈉濃度分別為0.2、0.2和0.4 mg/kg，且在后期的愛德華氏菌(Edwardsiella ictaluri)攻毒試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，抗體生成隨硒濃度升高而增加，抗體滴度最高的為添加硒酵母組，最低的為添加亞硒酸鈉組[36]。納米硒(Nano-se)是一種新形式的硒，在哺乳動(dòng)物的研究中，納米硒比亞硒酸鈉、硒蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸(Se-methylselenocysteine,SeMSC)表現(xiàn)出更高的生物利用率和更低的毒性[41-43]。而在青鱂(Oryzias latipes)的硒毒性研究中發(fā)現(xiàn)，納米硒在肝臟的累積量是亞硒酸鈉的6倍，且使魚體對(duì)氧化應(yīng)激產(chǎn)生更大的反應(yīng)[44]。

6 魚類硒中毒研究

硒是脊椎動(dòng)物必需的微量元素，但機(jī)體對(duì)其需求的濃度和其對(duì)機(jī)體產(chǎn)生毒性的濃度之間的范圍很窄，稍微超過機(jī)體所需的濃度，就可能對(duì)機(jī)體產(chǎn)生毒害。在對(duì)哺乳動(dòng)物的研究中發(fā)現(xiàn)，過量的硒會(huì)導(dǎo)致機(jī)體氧化損傷[45-47]。肝臟是硒在魚體中累積和代謝的主要場(chǎng)所，研究表明，高濃度的亞硒酸鈉可能使胞內(nèi)谷胱甘肽(glutathione,GSH)氧化還原失衡，導(dǎo)致肝細(xì)胞氧化損傷。在亞硒酸鈉對(duì)虹鱒(Oncorhynchus mykiss)肝臟的毒性試驗(yàn)中，100～200 mM亞硒酸鈉使胞內(nèi)ROS增加；還原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的比例(GSH：GSSG)隨亞硒酸鈉濃度的升高迅速下降，細(xì)胞逐漸失去還原能力；細(xì)胞脂質(zhì)過氧化隨亞硒酸鈉濃度升高而增加；在100和200 mM亞硒酸鈉濃度條件下，細(xì)胞活性下降了20%～40%；參與細(xì)胞凋亡胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的半胱天冬酶(Caspase)活性也隨亞硒酸鈉濃度升高而顯著升高，表現(xiàn)出對(duì)細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)[48]。白鱘(Acipenser transmontanus)幼魚餌料中添加硒蛋氨酸，發(fā)現(xiàn)硒濃度超過41.7 mg/g時(shí)，幼魚游動(dòng)能力和生長(zhǎng)率顯著下降；餌料中硒蛋氨酸濃度與魚體蛋白和脂肪含量呈負(fù)相關(guān)，而與魚體灰分和水分呈正相關(guān)；餌料中硒蛋氨酸的濃度與硒在腎臟、肌肉、肝臟、鰓和血清中的濃度表現(xiàn)出劑量效應(yīng)；硒濃度超過20.5 mg/g時(shí)，肝臟和腎臟發(fā)生組織病理學(xué)變化[49]。在裂尾魚(Pogonichthys macrolepidotus)幼魚餌料中添加不同濃度的富硒酵母進(jìn)行9個(gè)月的試驗(yàn)，結(jié)果表明，幼魚死亡、生長(zhǎng)率下降，組織硒濃度改變和組織發(fā)生病理變化分別出現(xiàn)在不同的飼喂時(shí)間，并對(duì)應(yīng)不同的餌料硒濃度[50]。硒蛋氨酸(L-Selenomethionine,Met)是硒在卵生脊椎動(dòng)物卵中存在的主要形式，在虹鱒的胚胎研究中發(fā)現(xiàn)，蛋氨酸酶(methioninase)催化硒蛋氨酸釋放甲基化硒醇(methylselenol)，谷胱甘肽參與甲基化硒醇氧化還原循環(huán)產(chǎn)生超氧化物，這可能是魚類體內(nèi)硒蛋氨酸濃度過高時(shí)發(fā)生氧化損傷的主要原因[51]。

7 展望

硒通過硒蛋白影響著動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育、抗氧化和免疫。隨著硒蛋白的不斷發(fā)現(xiàn)和對(duì)硒蛋白研究的不斷深入，人們對(duì)硒的生物學(xué)功能的理解日益深入。硒蛋白在哺乳動(dòng)物中的研究較為深入，而在魚類中，尤其在魚類免疫學(xué)功能方面研究的相對(duì)較少。硒通過脫碘酶影響了動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育，通過谷胱甘肽過氧化物酶家族和硫氧還蛋白酶家族等含硒酶影響了動(dòng)物的抗氧化功能，通過谷胱甘肽過氧化物酶等含硒酶調(diào)節(jié)了機(jī)體炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答。因此，硒蛋白功能的定位對(duì)硒的生物學(xué)功能的揭示尤為重要，對(duì)介導(dǎo)脊椎動(dòng)物炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答的信號(hào)通路中起關(guān)鍵作用的不同硒蛋白的發(fā)現(xiàn)和研究有待更深入的開展。硒是脊椎動(dòng)物必需的微量元素，但超過其需求量便會(huì)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生毒性，硒攝入過量對(duì)魚類的毒性機(jī)制有待做更深入的研究。

[1]王子鍵.中國(guó)低硒帶生態(tài)環(huán)境中硒的環(huán)境行為研究進(jìn)展[J].環(huán)境化學(xué),1993,12(3):237.

[2]王遠(yuǎn)亮.生物硒的研究進(jìn)展 [J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展,1987,（6）:28-34.

[3]Combs G F,et al.The Role of Selenium in Nutrition[M].Academic Press Inc.,1986:15-40.

[4]WHO.Selenium.Environmental Health Criteria,1987,58:41.

[5]Korotkov K V,Novoselov S V,Hatfield D L,et al.Mammalian selenoprotein in which selenocysteine(Sec)incorporation is supported by a new form of Sec insertion sequence element[J].Mol.Cell Biol.,2002,22(5):1402-1411.

[6]Li G Z,Liang X F,Yao W,et al.Molecular characterization of glutathione peroxidase gene form the liver of silver carp,bighead carp and grass carp[J].BMB Rep.,2008,41(3):204-209.

[7]Hermesz E,Ferencz A.identification of two phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase(GPx4)genes in common carp[J].Comp.Biochem.Physiol.C Toxicol.Pharmacol.,2009,150(1):101-106.

[8]Valverde C,Croteau W,Lafleur G J,et al.Cloning and expression of 5'-iodothyronine deiodinase from the liver of Fundulus heteroclitus[J].Endocrinology,1997,138(2):642-648.

[9]Kryukov G V,Gladyshev V N.Selenium metabolism in zebrafish:multiplicity of selenoprotein genes and expression of a protein containing 17 selenocysteine residues[J].Genes Cells,2000,5(12):1049-1060.

[10]Tujebajeva R M,Ransom D G,Hamey J W,et al.Expression and characterization of nonmannalian selenoprotein P in the zebrafish,Danio reio[J].Genes Cells,2000,5(11):897-903.

[11]Whanger P D.Selenoprotein expression and function-selenoprotein W[J].Biochirn Biophys Acta,2009,1790(11):1448-1452.

[12]Jurynec M J,Xia R,Mackrill J J,et al.Selenoprotein N is required for ryanodine receptor calcium release channel activity in human and zebrafish muscle[J].Proc.Natl.Acad.Sci.USA.,2008,105(34):12485-12490.

[13]Castello S,Lobanov A V,Chapple C,et al.Diversity and functional plasticity of eukaryotic selenoproteins:identification and characterization of the Sel J family[J].Proc.Natl.Acad.Sci.USA,2005,102(45):16188-16193.

[14]Novoselov S V,Hua D,Lobanov A V,et al.Identification and characterization of Fep15,a new selenocysteine-containing member of the Sep15 protein family[J].Biochem.J.,2006,394(Pt3):575-579.

[15]Vander Deure WM,Peeters RP,Visser TJ.Molecular aspects of thyroid hormone transporters,including MCT8,MCT10,and OATPs,and the effects of genetic variation in these transporters[J].J.Mol.Endocrinol.,2010,44(1):1-11.

[16]Campinho M A,Galay-Burgos M,Sweeney GE,et al.Coordination of deiodinase and thyroid hormone receptor expression during the larval to juvenile transition in sea bream (Sparus aurata,Linnaeus)[J].Gen.Comp.Endocrinol.,2010,165(2):181-194.

[17]Gereben B,Zavacki A M,Ribich S,et al.Cellular and molecular basis of deiodinase-regulated thyroid hormone signaling[J].Endocr.Rev.,2008,29(7):898-938.

[18]Hom S,Heuer H.Thyroid hormone action during brain development:more questions than answers[J].Mol.Cell Endocrinol.,2010,315(1/2):19-26.

[19]Walpita C N,Crawford A D,Darras V M.Combined antisense knockdown of type 1 and type 2 iodothyronine deiodinases dis－rupts embronic development in zebrafish (Danio rerio)[J].Gen.Comp.Endocrinol.,2010,166(1):134-141.

[20]Walpita C N,Vander Geyten S,Rurangwa E,et al.The effect of 3,5,3'-triiodothyronine supplementation on zebrafish(Danio rerio)embryonic development and expression of iodothyronine deiodinases and thyroid hormone receptors[J].Gen Comp.Endocrinol.,2007,152(2/3):206-214.

[21]Obregon M J.Thyroid hormone and adipocyte defferentiation[J].Thyroid,2008,18(2):185-195.

[22]梁蔭青,王家林,常青,等.飼料中硒的添加水平對(duì)鱸魚生長(zhǎng)性能及相關(guān)酶活性的影響[J].中國(guó)水產(chǎn)科學(xué),2006,13(6):1017-1022.

[23]華雪銘,周洪琪,邱小琮,等.飼料中添加芽孢桿菌和硒酵母對(duì)異育銀鯽的生長(zhǎng)及抗病力的影響[J].水產(chǎn)學(xué)報(bào),2001,25(5):448-453.

[24]Margis R,Dunand C,Teixeira F K,et al.Glutathione peroxidase family-an evolutionary overview[J].FEBS J,2008,275(15):3959-3970.

[25]Lu J,Holmgren A.Selenoproteins[J].J.Biol.Chem.,2009,284(2):723-727.

[26]Monteiro D A,Rantin F T,Kalinin A L.The effects of selenium on oxidative stress biomarkers in the freshwater characid fish matrinxa,Brycon cephalus (Gunther,1869)exposed to organophosphate insecticide Folisuper 600BR(methyl parathion)[J].Comp Biochem Physiol C Toxicol Pharmacol,2009,149(1):40-49.

[27]Orun I,Talas ZS,Ozdemir I,et al.Antioxidative role of selenium on some tissues of (Cd2+,Cr3+)-induced rainbow trout[J].Ecotoxicol Environ.Saf.,2008,71(1):71-75.

[28]Talas Z S,Orun I,Ozdemir I,et al.Antioxidative role of selenium against the toxic effect of heavy metals (Cd+2,Cr+3)on liver of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss Walbaum 1792)[J].Fish Physiol.Biochem.,2008,34(3):217-222.

[29]Ates B,Orun I,Talas ZS,et al.Effects of sodium selenite on some biochemical and hematological parameters of rainbow trout(Oncorhynchus mykiss Walbaum,1792)exposed to Pb2+and Cu2+[J].Fish Physiol.Biochem.,2008,34(1):53-59.

[30]Weber D N,Connauqhton V P,Dellinger J A,et al.Selenomethionine reduces visual deficits due to developmental methylmercury exposures[J].Physiol.Behav.,2008,93(1/2):250-260.

[31]Hoffmann PR,Berry MJ.The influence of selenium on immune responses[J].Mol.Nutr.Food Res.,2008,52(11):1273-1280.

[32]Arthur JR,Mckenzie RC,Beckett G J.Selenium in the immune system[J].J.Nutr.,2003,133(5 Suppl 1):1457S-1459S.

[33]Vunta H,Belda B J,Arner R J,et al.Selenium attenuates pro-inflammatory gene expression in macrophages[J].Mol.Nutr.Food Res.,2008,52(11):1316-1323.

[34]Shrimali R K,Irons R D,Carlson B A,et al.Selenoproteins mediate T cell immunity through an antioxidant mechanism[J].J.Bio.Chem.,2008,283(29):20181-20185.

[35]Carlson B A,Yoo M H,Sano Y,et al.Selenoproteins regulate macrophage invasiveness and extracellular matrix-related gene expression[J].BMC Immunol.,2009,10:57.

[36]Wang C L,Richard T,Lovell.Response to edwardsiella ictaluri challenge by channel catfish fed organic and inorganic sources of selenium[J].Journal of Aquatic Animal Health.1997,9(3):172-179.

[37]Low K W,Sin Y M.In vivo and in vitro effects of mercuric chloride and sodium selenite on some non-specific immune responses of blue gourami,Trichogaster trichopterus(Pallus) [J].Fish&Shellfish Immunology,1996,6(5):351-362.

[38]金豐秋,金其榮.硒酵母(有機(jī)硒)與硒酸、亞硒酸(無機(jī)硒)在安全性方面的差別[J].適用技術(shù)市場(chǎng),2001（11）:33-34.

[39]Rider S A,Davies S J,Jha A N,et al.Bioavailability of co-supplemented organic and inorganic zinc and selenium sources in a white fishmeal-based rainbow trout(Oncorhynchus mykiss)diet[J].J.Anim.Physiol.Anim.Nutr.(Berl),2010,94(1):99-110.

[40]魏文志,楊志強(qiáng),羅方妮,等.飼料中添加有機(jī)硒對(duì)異育銀鯽生長(zhǎng)的影響[J].淡水漁業(yè),2001,31(3):45-46.

[41]Zhang J,Wang H,Yan X,et al.Comparison of short-term toxicity beween Nano-Se and selenite in mice[J].Life Sci.,2005,76(10):1099-1109.

[42]Wang H,Zhang J,Yu H.Elemental selenium at nano size possesses lower toxicity without compromising the fundamental effect on selenoenzymes:comparison with selenomethionine in mice[J].Free Radic.Biol.Med.,2007,42(10):1524-1533.

[43]Zhang J,Wang X,Xu T.Elemental selenium at nano size(Nano-Se)as a potential chemopreventive agent with reduced risk of selenium toxicity:comparison with se-methylselenocysteine in mice[J].Toxicol Sci,2008,101(1):22-31.

[44]Li H,Zhang J,Wang T,et al.Elemental selenium particles at nano-size(Nano-Se)are more toxic to Medaka(Oryzias latipes)as a consequence of hyper-accumulation of selenium:a comparison with sodium selenite[J].Aquat Toxicol.,2008,89(4):251-256.

[45]李引乾.硒的毒理機(jī)制與毒力動(dòng)力學(xué) [J].畜牧獸醫(yī)雜志,1997,16(1):41-43.

[46]Wycherly B J,Moak M A,Christensen M J.High dietary intake of sodium selenite induces oxidative DNA damage in rat liver[J].Nutr.Cancer,2004,48(1):78-83.

[47]Kaushal N,Bansal MP.Diminished reproductive potential of male mice in response to selenium-induced oxidative stress:involvement of HSP70,HSP70-2,and MSJ-1[J].J.Biochem.Mol.Toxicol.,2009,23(2):125-136.

[48]Misra S,Niyoqi S.Selenite causes cytotoxicity in rainbow trout(Oncorhynchus mykiss)hepatocytes by inducing oxidative stress[J].Toxicol In Vitro,2009,23(7):1249-1258.

[49]Tashjian D H,Teh S J,Soqomonyan A,et al.Bioaccumulation and chronic toxicity of dietary L-selenomethionine in juvenile white sturgeon (Acipenser transmontanus)[J].Aquat.Toxicol.,2006,79(4):401-409.

[50]Teh S J,Deng X,Deng D F,et al.Chronic effects of dietary selenium on juvenile Sacramento splittail(Pogonichthys macrolepidotus)[J].Environ.Sci.Technol.,2004,38(22):6085-6093.

[51]Palace V P,Spallholz J E,Holm J,et al.Metabolism of selenomethionine by rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)embryos can generate oxidative stress[J].Ecotoxicol Environ Saf,2004,58(1):17-21.