袁 娜 王家富 黃慶玉

(泰山醫(yī)學(xué)院，山東 泰安 271016)

蜂膠是廣為熟知的被廣泛應(yīng)用于保健食品的一種物質(zhì),是蜜蜂從植物幼芽或受傷樹干上采集樹脂,并混入上腭腺分泌物和蜂臘后，經(jīng)咀嚼加工而成的一種粘稠膠狀物質(zhì)[1]。

蜂膠中含有大量的生物活性物質(zhì)和微量元素,主要包含5大類成分:樹脂、樹膠約占50%～55%,蜂膠約占30%,揮發(fā)油約占10%,花粉約占5%,各種有機(jī)酸和礦物質(zhì)約占5%[2]。目前已從蜂膠中分離鑒定出的成分有黃酮類、萜烯類、醌類、酯類、醇類、酚類、醚類、有機(jī)酸和大量氨基酸、酶類、維生素B1、維生素B2、維生素B6、維生素E和維生素A 以及礦物質(zhì)等。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外對(duì)蜂膠的研究取得很大進(jìn)展,使得蜂膠的應(yīng)用也越來(lái)越廣泛。它的抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化、調(diào)節(jié)血脂等方面的作用也越來(lái)越受到人們的關(guān)注。現(xiàn)將蜂膠抗動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)研究作一綜述。

1 調(diào)節(jié)血脂水平

血脂是血液中脂肪的總稱,主要指血中的膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)。高血脂是動(dòng)脈粥樣硬化形成的主要原因,血液中長(zhǎng)期過(guò)高的膽固醇、甘油三脂，使得血管壁上過(guò)多的脂類容易被自由基氧化,形成脂質(zhì)過(guò)氧化物質(zhì), 沉積在血管壁上,從而導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化。血清中TC、TG 及低密度脂蛋白(LDL-C) 含量升高和高密度脂蛋白(HDL-C) 含量降低是誘發(fā)動(dòng)脈硬化和導(dǎo)致心腦血管疾病的重要因素, 高LDL-C 血癥是動(dòng)脈粥樣硬化的易患因子, 其在血漿中的濃度與動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生率呈明顯的正相關(guān)。大量研究證明蜂膠醇提液和水提液均能有效抑制高脂血癥SD大鼠血清中的甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT ) 的升高, 并且能有效抑制肝臟組織中的TC、TG、丙二醛(MDA) 的升高, 但對(duì)血清中的高密度脂蛋白(HDL-C)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA )、一氧化氮(NO ) 的影響不明顯; 蜂膠醇提液能有效降低高脂血癥SD 大鼠的體重、肝重及肝指數(shù), 表明蜂膠能夠改善高脂血癥大鼠的脂質(zhì)代謝[3]。通過(guò)分離結(jié)扎大鼠膽總管進(jìn)行成功造模后，觀察蜂膠對(duì)肝臟形態(tài)學(xué)變化，發(fā)現(xiàn)蜂膠組大鼠肝細(xì)胞擴(kuò)大，膽小管擴(kuò)張，肝臟水腫情況減輕，壞死肝細(xì)胞數(shù)目及清除比例增加[4]。蜂膠降低血脂機(jī)理尚未完全闡明，可能是與膽固醇或其轉(zhuǎn)化物膽酸結(jié)合，從而抑制其在腸內(nèi)的吸收，促進(jìn)降解和排泄而起到調(diào)節(jié)血脂的作用，或與提高脂類代謝相關(guān)酶活性有關(guān)。

2 對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的作用

各種原因造成的動(dòng)脈內(nèi)膜損傷是動(dòng)脈粥樣硬化病變發(fā)生的關(guān)鍵因素。內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙可以引發(fā)一系列變化,從而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。張?jiān)葡愕萚5]在一定濃度的腫瘤壞死因子-α誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的模型實(shí)驗(yàn)中，加入不同濃度的蜂膠水提液，用流式細(xì)胞儀和缺口末端標(biāo)記技術(shù)TUNEL檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果為模型組內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率均明顯高于對(duì)照組,不同濃度蜂膠組內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率明顯低于模型組。從而發(fā)現(xiàn)蜂膠對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞起到一定的保護(hù)作用。喬松素亦稱松屬素，是蜂膠黃酮類成份中含量較高的一種，約為1.7%～2.8%，屬于雙氫黃酮類。李東娟等[6]培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞, 建立脂多糖損傷模型，光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài), MTT 法觀察喬松素對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞活性的影響, ELISA 方法檢測(cè)培養(yǎng)上清中血管假血友病因子的含量, TUNEL 法檢測(cè)細(xì)胞凋亡率。發(fā)現(xiàn)喬松素能增強(qiáng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞活性, 抑制脂多糖誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡, 從而發(fā)揮可能的內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)功能。喬松素還能夠通過(guò)一氧化氮環(huán)化鳥苷酸(NO-cGMP) 和開放鉀離子通道封鎖鈣離子通道，從而引起小鼠動(dòng)脈環(huán)舒張[7]。然而有其他學(xué)者[8]研究發(fā)現(xiàn)黃酮類中不同結(jié)構(gòu)的化合物，這些化合物對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞形成管型具有抑制作用，咖啡酸乙酯的血管抑制作用最強(qiáng)，并且這些物質(zhì)具有的抗生成血管性質(zhì)與抗氧化性有相關(guān)性，即抗生成血管性質(zhì)強(qiáng)，反而該化合物的抗氧化能力相對(duì)要弱。

3 調(diào)節(jié)炎癥介質(zhì)作用

多種炎性介質(zhì)參與動(dòng)脈粥樣硬化的病變形成。致炎因子首先引起內(nèi)皮細(xì)胞的功能障礙,從而引起一系列有大量炎性介質(zhì)參與的炎性反應(yīng)。許多研究證實(shí)蜂膠具有抗炎癥的作用?？寡仔再|(zhì)源于黃酮類物質(zhì)對(duì)致炎因子的抑制作用。高良姜黃素可以抑制環(huán)氧化酶、脂氧合酶 、聚半乳糖醛酸酶的活性，降低了環(huán)氧化酶2的表達(dá)?？Х人嵋阴ネㄟ^(guò)阻止細(xì)胞膜花生四烯酸的釋放達(dá)到抗炎特性。花生四烯酸可以抑制環(huán)氧化酶1和2的活性[9]?；|(zhì)金屬蛋白酶(MMP)對(duì)細(xì)胞的遷移、侵襲、活化及動(dòng)脈粥樣硬化的形成、血管重塑等均起重要作用。動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的早期,循環(huán)中的單核細(xì)胞和血小板黏附于損傷的內(nèi)膜下,釋放大量的細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子,刺激血管平滑肌細(xì)胞增殖并分泌細(xì)胞外基質(zhì),同時(shí)又刺激平滑肌細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞合成基質(zhì)金屬蛋白酶,以促進(jìn)細(xì)胞擺脫細(xì)胞基質(zhì)的束縛,然后進(jìn)行遷移。細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)的沉積以及基質(zhì)金屬蛋白酶引起的細(xì)胞外基質(zhì)降解之間失去平衡,最終導(dǎo)致斑塊形成。MMP-9 主要由單核巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、成纖維細(xì)胞分泌產(chǎn)生。采用熒光電泳法,檢測(cè)不同葡萄糖濃度和不同蜂膠濃度處理的體外培養(yǎng)的人成纖維細(xì)胞及單核巨噬細(xì)胞系的基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9 蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)蜂膠可抑制這些細(xì)胞MMP-9 的表達(dá), 并呈劑量依賴性，有益于細(xì)胞基質(zhì)的積聚,從而有益于傷口的愈合[10]。核因子(nuclear factor kappa B,NF-κB )是一種重要的炎癥轉(zhuǎn)錄因子, 許多炎癥基因的表達(dá)是通過(guò)NF- κB的活化來(lái)實(shí)現(xiàn)的。在動(dòng)脈粥樣硬化病變部位，血管平滑肌、血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)均可見NF-κB的激活現(xiàn)象，后者的NF-κB異常激活被認(rèn)為是AS的始動(dòng)機(jī)制之一[11]。利用載脂蛋白E基因敲除小鼠模型，研究證明咖啡酸苯乙酯可以抑制NF-κB，在高膽固醇血癥下也能阻止動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，并且沒(méi)有不良反應(yīng)。咖啡酸苯乙酯同樣可以減少在大動(dòng)脈NF-κB相關(guān)基因產(chǎn)物如TNF-α、 IL-2、 血小板源性生長(zhǎng)因子( PDGF-BB)和 E-選擇素表達(dá),以及NF-κB下游相關(guān)分子產(chǎn)物的激活。從而說(shuō)明咖啡酸苯乙酯可以通過(guò)NF-κB和氧化應(yīng)激，來(lái)達(dá)到治療動(dòng)脈粥樣硬化的目的[12]。

4 抗氧化作用

蜂膠乙醇提取液具有明顯的抗氧化功能， 主要原因就是由于蜂膠中黃酮類化合物與超氧陰離子反應(yīng)， 阻止自由基反應(yīng)的引發(fā)， 或與鐵離子鰲合阻止羥基自由基的生成，或與脂質(zhì)過(guò)氧化基反應(yīng)阻止脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程等途徑。用分光光度計(jì)測(cè)定蜂膠水提液對(duì)臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞過(guò)氧化物歧化酶活性(SOD)及丙二醛(MDA)含量的影響，結(jié)果顯示蜂膠水提液組SOD活性較對(duì)照組有顯著性差異，高濃度的蜂膠水提液能減少M(fèi)DA的生成[13]。 咖啡酸苯乙酯(caffeic acid phenethyl ester，CAPE)是蜂膠中分離的一種活性成分，研究發(fā)現(xiàn)CAPE可以顯著降低MDA含量，提高SOD、過(guò)氧化氫酶 (CAT)活性，對(duì)谷胱甘肽過(guò)氧化酶 (GSH-Px)活性顯著提高。說(shuō)明蜂膠可以清除氧自由基，對(duì)抗脂質(zhì)過(guò)氧化和一些參與氧化反應(yīng)的酶活性具有作用[14]。阿魏酸、咖啡酸和二咖啡醇喹尼酸等含有酚羥基的有機(jī)酸可消除自由基,抑制氧化反應(yīng)和自由基反應(yīng),具有保護(hù)肝細(xì)胞和抗肝脂質(zhì)過(guò)氧化作用。糖類中的果糖也有明顯的抗氧化作用。蜂膠中眾多的其他類化合物均有抗氧化作用,可能比已知的抗氧化物維生素C和維生素E 更加具有潛力[15]。中國(guó)蜂膠和巴西蜂膠有抑制大鼠體內(nèi)黃嘌呤氧化酶活性的作用,但是中國(guó)蜂膠作用更明顯[16]。在糖尿病大鼠模型中檢測(cè)咖啡酸苯乙酯對(duì)大腦氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)的影響，發(fā)現(xiàn)其能夠顯著降低一氧化氮和丙二醛的含量，以及過(guò)氧化氫酶和過(guò)氧化物酶黃嘌呤氧化酶在大腦的含量，升高谷胱甘肽的含量，降低腫瘤壞死因子-α和干擾素、一氧化氮的含量[17]。

5 調(diào)節(jié)血小板作用

近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生與血管內(nèi)皮損傷，血小板黏附、聚集和血栓形成密切相關(guān)。血小板在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)病過(guò)程中起重要作用[18]。張?jiān)葡愕萚19]采用體外灌注法,用纖維蛋白原和人Ⅱ型膠原蛋白包被蓋玻片,復(fù)制血管內(nèi)膜創(chuàng)傷模型,正常血液流經(jīng)纖維蛋白原和膠原膜表面后,測(cè)量血小板粘附率。濃度為0.1 g/L的24%乙醇蜂膠提取液作實(shí)驗(yàn)組,加入24%的乙醇作陰性對(duì)照組,同濃度的阿魏酸乙醇溶液作陽(yáng)性對(duì)照組，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蜂膠乙醇提取液能抑制血小板的活化,降低其在纖維蛋白原和膠原蛋白膜表面的粘附活性,對(duì)血小板與纖維蛋白原的作用更明顯?？Х人岜揭阴ヒ部梢砸种颇z原暴露引起血小板聚集，對(duì)血小板ATP釋放也有抑制作用[20]。蜂膠醇提物和蜂膠醚提物及其成分咖啡酸苯乙酯,在雞胚尿囊絨膜和肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞增生試驗(yàn)中的抗血管新生活性,三者抑制雞胚尿囊絨膜的血管新生和平滑肌細(xì)胞的增殖[21]。

6 對(duì)平滑肌細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的作用

血管平滑肌細(xì)胞向內(nèi)皮遷移,由收縮表型轉(zhuǎn)變?yōu)楹铣杀硇筒⒋罅吭鲋?，是高血壓、?dòng)脈粥樣硬化等心血管疾病的主要病理基礎(chǔ)。探討蜂膠水提液對(duì)血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖作用的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞的增殖,氯沙坦能阻滯該作用，一定濃度的蜂膠水提液可抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞的增殖,其機(jī)制可能與限制細(xì)胞由G1期向S期轉(zhuǎn)變及增殖細(xì)胞核抗原的表達(dá)有關(guān)[22]。蜂膠能使炎癥早期巨噬細(xì)胞的活性升高 ，活化的巨噬細(xì)胞又能清除血管內(nèi)氧化修飾的脂蛋白從而起到防御動(dòng)脈粥樣硬化功能。但巨噬細(xì)胞的過(guò)度活化會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞因子,進(jìn)而活化T淋巴細(xì)胞，激活補(bǔ)體系統(tǒng),誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞[23]。正常情況下巨噬細(xì)胞分泌很少的白細(xì)胞介素1和一氧化氮，但脂多糖可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素1和一氧化氮合成酶mRNA增多，蜂膠黃酮類物質(zhì)可以減少脂多糖導(dǎo)致的巨噬細(xì)胞合成分泌功能，降低炎癥反應(yīng)[24]。蜂膠中的黃酮類成分，也抑制核轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，從而引起致炎細(xì)胞因子降低,誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的凋亡。

許多學(xué)者已經(jīng)開始從分子基因水平來(lái)揭示蜂膠抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制,但蜂膠抗動(dòng)脈粥樣硬化的細(xì)胞分子學(xué)機(jī)制十分復(fù)雜,涉及到其調(diào)節(jié)血脂的作用；保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的完整性; 調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞吞噬和分泌，抑制血管平滑肌細(xì)胞異常增殖和遷移;影響生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子和細(xì)胞因子的合成和釋放等多個(gè)環(huán)節(jié)?，F(xiàn)在大量的研究表明蜂膠具有廣泛的生理及藥理活性 ,開發(fā)前景極為廣闊。隨著對(duì)蜂膠成分及功能研究的深入，其生物學(xué)作用將得到不斷的探索發(fā)現(xiàn)。

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