梁靜濤 謝 利 田嶸榛 劉福友 成都中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合 2007級(jí)博士研究生(成都 610075）

缺血性腦卒中氣虛血瘀證動(dòng)物模型的研究展望

梁靜濤 謝 利 田嶸榛 劉福友△成都中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合 2007級(jí)博士研究生(成都 610075）

氣虛血瘀證是缺血性腦卒中臨床最常見(jiàn)的幾種中醫(yī)證型之一,多是由于年老體衰、勞累過(guò)度或先后天精氣不足等病因引起,再因“氣虛則血行無(wú)力而瘀滯”,最終導(dǎo)致人體內(nèi)血行不暢、壅阻血脈、停積為瘀的證候。近年來(lái),隨著中醫(yī)證候?qū)W逐漸成為中醫(yī)學(xué)研究的特色和重點(diǎn)以及中醫(yī)藥研發(fā)的理論需要,許多相應(yīng)的中醫(yī)證侯動(dòng)物模型也應(yīng)運(yùn)而生,并在證侯模型的基礎(chǔ)上建立了許多中醫(yī)疾病的證侯模型,其中缺血性卒中氣虛血瘀證動(dòng)物模型便是研究較深入的領(lǐng)域之一。

1氣虛血瘀證證候動(dòng)物模型的建立現(xiàn)有的中醫(yī)證候動(dòng)物模型制作方法主要有病因模擬、癥狀模擬和病理生理模擬三種。病因模擬是從導(dǎo)致“證候”發(fā)生的常見(jiàn)致病因素入手,采用物理、化學(xué)等方法,按此證侯的發(fā)病因素進(jìn)行模擬,使之從病因上符合傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論與思維方式;癥狀模擬以模擬“證候”的典型癥狀、體征為重點(diǎn),采用物理、化學(xué)、手術(shù)等方法,模擬證侯的臨床表現(xiàn),故其評(píng)價(jià)應(yīng)從“證候”的臨床辨證標(biāo)準(zhǔn)著眼,使之真正具有證候的特征與代表性[1]。病理生理模擬則是著眼于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)中醫(yī)證侯研究的理論基礎(chǔ),采用化學(xué)、手術(shù)等方法,模擬西醫(yī)學(xué)中與中醫(yī)證侯相似的某種病理生理狀態(tài),使其符合現(xiàn)代中西醫(yī)的病理生理研究理論。

目前,氣虛血瘀證動(dòng)物模型的制作主要還是采用病因模擬的方法為主,結(jié)合癥狀模擬的思路,對(duì)病因模擬的動(dòng)物模型進(jìn)行癥狀體征評(píng)價(jià),最終確定模型成功與否。而至今為止,還沒(méi)有依據(jù)單純癥狀模擬所建立的氣虛血瘀證動(dòng)物模型,主要是由于目前尚沒(méi)有各模型間對(duì)證侯統(tǒng)一的觀測(cè)指標(biāo)及評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)造成的。對(duì)于單純病理生理模擬的證侯模型,由于觀測(cè)指標(biāo)的寬泛性及現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的病理生理狀態(tài)是否與中醫(yī)證侯具有等同性等問(wèn)題,一部分模型還存在爭(zhēng)議,因此缺血性腦卒中的中醫(yī)證侯動(dòng)物模型中也較少使用。

現(xiàn)今常用的缺血性腦卒中的氣虛血瘀證侯的動(dòng)物模型主要有以下幾種[2]:“單純游泳”模擬氣虛血瘀證模型根據(jù)“勞則耗氣”的中醫(yī)理論,采用過(guò)度運(yùn)動(dòng)疲勞的方法,日久耗氣而致氣虛,“氣虛則血行無(wú)力而瘀滯”。故采用游泳的方法可制備氣虛證模型大鼠[3],并且此過(guò)程中觀察到模型大鼠血液流變學(xué)異常,故有人將此法用于制備氣虛血瘀證模型[4,5]。有關(guān)氣虛血瘀證研究認(rèn)為,模型動(dòng)物血流變、血小板等血瘀證相關(guān)指標(biāo)均達(dá)到血瘀證診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。

“游泳+饑餓+中年”模擬氣虛血瘀證模型“年四十,而陰氣自半”,中年是機(jī)體衰老過(guò)程的重要階段,強(qiáng)迫游泳可導(dǎo)致大鼠氣虛,并且氣主要依賴于水谷精微滋養(yǎng),《靈樞?五味篇》:“谷不入,半日則氣衰,一日則氣少矣”。故選取中年大鼠,配合游泳和饑餓制備氣虛血瘀證模型,研究發(fā)現(xiàn)模型大鼠耐疲勞時(shí)間縮短,細(xì)胞免疫功能顯著降低,血液流變性呈低黏狀態(tài)改變,認(rèn)為中年大鼠氣虛血瘀證動(dòng)物模型成立,并且認(rèn)為這種模型對(duì)中年保健及抗衰老研究有重大的意義[7]。

“游泳+饑餓+中年+高脂飲食”模擬氣虛血瘀證模型[8]主要根據(jù)中醫(yī)“饑則損氣”、“勞則耗氣”及“甘肥貴人,則高粱之疾”的理論,采用饑餓、勞累、高脂飲食誘導(dǎo)中年大鼠的氣虛血瘀證模型,并對(duì)所建立的氣虛血瘀證模型制定了較詳細(xì)的量表評(píng)價(jià)法進(jìn)行評(píng)價(jià)。是目前比較完善的從病因、癥狀、治療及相關(guān)指標(biāo)上進(jìn)行研究的證候動(dòng)物模型之一。

2病癥結(jié)合的缺血性腦卒中氣虛血瘀證動(dòng)物模型的建立目前,缺血性腦卒中模型的造模方法較多,如線栓法、電凝法等。其中依據(jù) ZeaLonga方法[9]制作局灶性腦缺血再灌注的 MCAO模型是最為常用的一種,不但能夠獲得穩(wěn)定的梗死灶,且可以進(jìn)行再灌注損傷的研究,是目前公認(rèn)的能夠觀察再灌注損傷的動(dòng)物模型。本方法的優(yōu)點(diǎn)是梗死范圍穩(wěn)定,重復(fù)性好。操作較簡(jiǎn)便,手術(shù)時(shí)間短,不需開(kāi)顱,對(duì)動(dòng)物全身的生理功能影響小,且缺血和再灌注時(shí)間可準(zhǔn)確控制,是研究局灶性腦缺血再灌注損傷的較好動(dòng)物模型。

在前述中醫(yī)氣虛血瘀證模型的基礎(chǔ)上,再根據(jù)西醫(yī)理論復(fù)制缺血性腦卒中的疾病模型,把兩者結(jié)合起來(lái),便形成了病證結(jié)合的中醫(yī)疾病證侯的動(dòng)物模型。然而,可以看出,這種病證結(jié)合的中醫(yī)動(dòng)物模型與實(shí)際的臨床中醫(yī)疾病證侯仍然有著明顯的差別。最主要的便是其缺乏中醫(yī)自然發(fā)病的延續(xù)性,其中的疾病過(guò)程是采用人為的方法觸發(fā),并且由于是將中西醫(yī)兩種模型結(jié)合在一起,所以它們之間可能互相影響,互相掩蓋,很難達(dá)到病證結(jié)合的理想狀態(tài)。一般而言,成功的模型建立必須滿足三個(gè)條件:①模型與原型之間有相似關(guān)系。②模型能夠代替原型。③對(duì)模型的研究,應(yīng)該能夠得出原型的信息。就中醫(yī)證候動(dòng)物模型而言,所謂原型就是指中醫(yī)證候以及具有中醫(yī)特色病證結(jié)合的病理反應(yīng)[10]。但就目前的技術(shù)水平及手段來(lái)看,理想的自然發(fā)病缺血性腦卒中病證結(jié)合模型仍無(wú)法完全達(dá)到。

3該領(lǐng)域內(nèi)存在和亟待解決的問(wèn)題我們可以看到,目前大多數(shù)中醫(yī)證侯的動(dòng)物模型尚不能達(dá)到完全的“病證結(jié)合”。現(xiàn)有的病證結(jié)合動(dòng)物模型多是根據(jù)西醫(yī)理論復(fù)制疾病模型,根據(jù)中醫(yī)理論復(fù)制證候模型,再把兩者結(jié)合起來(lái)。多數(shù)模型是在西醫(yī)疾病模型的基礎(chǔ)上利用人為干預(yù)手段或施加因素如用西藥處理,采用物理、化學(xué)等方法使動(dòng)物生活環(huán)境、條件改變(如進(jìn)食量、溫度、運(yùn)動(dòng)等）造成同時(shí)具備相應(yīng)證候的模型[5]。因此這與臨床自然發(fā)生的疾病證候是有明顯差別的,最重要的便是,其缺乏中醫(yī)證候及疾病自然發(fā)生的延續(xù)性。如缺血性腦卒中氣虛血瘀證模型的建立,目前主要采用將健康大鼠在勞累、高脂飲食等外界因素的誘導(dǎo)下,產(chǎn)生氣虛血瘀證候,在此基礎(chǔ)上,模擬線栓、開(kāi)顱電凝等缺血性腦卒中模型,最終獲得病證結(jié)合的動(dòng)物模型[8]。顯而易見(jiàn),目前采用的此類方法缺乏中醫(yī)證候和疾病發(fā)生之間的必然性,并且由于 MCAO等模型更類似于栓塞模型,故該證候模型體現(xiàn)的機(jī)體狀態(tài)更趨向于氣虛血瘀狀態(tài)合并血管栓塞形成后所導(dǎo)致的病理生理狀態(tài),這與臨床上氣虛血瘀證由氣虛到血瘀,最終形成卒中前狀態(tài)而發(fā)生卒中的過(guò)程還有很大的差異。因此,此類模型用于研究實(shí)際的缺血性腦卒中,特別是結(jié)合中醫(yī)證候的病證結(jié)合模型研究,還有許多不足。因此,我們思考要將疾病及證候的要素更和諧自然地體現(xiàn)在一種病證結(jié)合的模型上,就需要滿足以下兩個(gè)關(guān)鍵點(diǎn):①動(dòng)物本身便具有形成某種證候的傾向;②動(dòng)物本身也具備患某種疾病的傾向,或者說(shuō)具備形成發(fā)生此種疾病所對(duì)應(yīng)病理生理狀態(tài)的潛在趨勢(shì)。

滿足了這兩個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)的動(dòng)物模型,便能以更自然的方式誘導(dǎo)證候和疾病的產(chǎn)生,并能以更和諧的方式在機(jī)體功能、病理變化上達(dá)到證候與疾病的進(jìn)一步統(tǒng)一。

目前的研究已經(jīng)證實(shí),遺傳與缺血性腦血管病有關(guān)。 2002年,Gretarsdottir等[11]報(bào)道的冰島人群卒中基因的研究就明確地發(fā)現(xiàn),5q12中 D5S2080區(qū)段與卒中存在肯定的連鎖關(guān)系。此后的大量研究也證明缺血性腦血管病確實(shí)是遺傳因素和環(huán)境因素共同作用引起的一種臨床綜合征[12]。其與遺傳因素的關(guān)系在中間表型的研究中亦得到了證實(shí)[13]。除部分腦卒中為單基因遺傳病(如 CADASIL腦病、線粒體肌病 Melas型等）,符合 Mendel遺傳規(guī)律外,絕大多數(shù)常見(jiàn)的卒中應(yīng)該是多基因因素作用的結(jié)果。其起作用的往往是許多影響力較小的等位基因,靠其整體效能與環(huán)境因素相互作用而誘導(dǎo)疾病的產(chǎn)生。目前認(rèn)為高血壓、高脂血癥、糖尿病等作為腦血管病危險(xiǎn)因素,其發(fā)生同樣有遺傳因素參與,另有一些基因直接參與了腦血管病的形成,這樣在腦血管病的每一步病理過(guò)程中都可能存在遺傳的影響,相關(guān)動(dòng)物試驗(yàn)亦證實(shí)了這一觀點(diǎn)[14]。

目前對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、單基因綜合征的遺傳分析,以及遺傳同質(zhì)種群的應(yīng)用已經(jīng)有了重大突破。對(duì) SHRSP動(dòng)物模型的研究真實(shí)地反映了人類缺血性腦血管疾病的遺傳特質(zhì)。特別是通過(guò)在兩個(gè)不同的 F2雜交群體中使用遺傳連鎖的方法,已經(jīng)獲得了 SHRSP中風(fēng)基因存在的證據(jù):一個(gè)來(lái)源于 SHRSP和自發(fā)性高血壓抗中風(fēng)大鼠的(SHRSR）交配[15];第二個(gè)來(lái)源于SHRSP和 WistarKyoto大鼠異系雜交[16]。這兩項(xiàng)研究證明了大鼠對(duì)腦梗死的易感性具有遺傳性,確定了對(duì)染色體數(shù)量性狀遺傳位點(diǎn)的識(shí)別——含有對(duì)表型直接作用的基因。因此,該動(dòng)物模型中的中風(fēng)風(fēng)險(xiǎn)表明了復(fù)雜的基因和基因以及基因和環(huán)境之間相互作用的平衡。目前已發(fā)現(xiàn)與缺血性腦血管病相關(guān)的易感基因主要有[17]:(1）腎素血管緊張素系統(tǒng)相關(guān)基因;(2）內(nèi)皮型一氧化氮合酶基因;(3）脂代謝相關(guān)基因;(4）凝血 /纖溶相關(guān)基因;(5）半胱氨酸代謝相關(guān)基因;(6）其他相關(guān)基因,這些遺傳因素可能通過(guò)影響諸如高血壓等危險(xiǎn)因素誘發(fā)卒中,但也可能直接誘發(fā)卒中[18]。

另一方面,對(duì)基因突變的研究也認(rèn)為,多個(gè)基因突變的共同作用可能是病因不明性動(dòng)脈卒中的病因,至少構(gòu)成了疊加的病理因素[19]。如血栓形成傾向多數(shù)是遺傳性的,也可以是后天獲得性的,或者兩者同時(shí)存在,其始動(dòng)因素可能是父代因環(huán)境因素影響,獲得此種突變,遺傳所致[20]。另有研究也表明,采用外界因素(如冷刺激、高鹽飲食等）誘導(dǎo)大鼠腦卒中的發(fā)生,發(fā)現(xiàn)大鼠某些基因發(fā)生差異性的改變[21]。

綜合目前的研究結(jié)果,我們可以看到父代在一定外界因素或缺血性腦血管病危險(xiǎn)因素的干預(yù)影響下,自身能夠產(chǎn)生某種變化(可能是基因水平的,亦可能僅僅是基因表型的改變）,而此種變化有可能導(dǎo)致子代較之正常個(gè)體更具缺血性腦血管病的易感性。因此,我們提出假設(shè):是否能通過(guò)遺傳的方式建立更具缺血性腦卒中易感性,更易誘導(dǎo)其發(fā)生缺血性腦卒中前病理生理狀態(tài)的動(dòng)物模型?同時(shí),是否能在此基礎(chǔ)上,對(duì)于父代動(dòng)物采取干預(yù)手段,使其子代具有中醫(yī)“先天精氣不足”的特性?

如果此種假設(shè)成立,則此種子代模型可能因其具有缺血性腦卒中的易感性,更易在外界干預(yù)因素的作用下,誘導(dǎo)更為自然的缺血性腦卒中前的病理生理狀態(tài)。也因此,其較之以往的此類模型,便更接近于臨床實(shí)際缺血性腦卒中的發(fā)病機(jī)理和過(guò)程。同時(shí),具有“先天精氣不足”特性的子代動(dòng)物,從中醫(yī)理論來(lái)看,更易誘導(dǎo)氣虛證候的產(chǎn)生,更適合此類疾病證候的研究。

當(dāng)然此種模型思路仍然存在許多需要解決的問(wèn)題。如:1.施加的外界因素對(duì)于父代動(dòng)物的影響是否能引起該動(dòng)物產(chǎn)生機(jī)體的差異性改變(基因表型或者基因水平）;2.此種差異特性是否能夠通過(guò)遺傳的方式傳遞給子代;3.該種子代是否都能具備這種易感特性,若不是,模型的重復(fù)性高低便成為研究的前提和關(guān)鍵,反之,則模型的穩(wěn)定性便會(huì)是該模型后續(xù)研究的重點(diǎn);4.是否可以通過(guò)干預(yù)手段作用于父代,獲得具有“先天精氣不足”特性的子代動(dòng)物。以上均是該模型思路研究的關(guān)鍵。我們提出此種假設(shè),也正是希望能通過(guò)對(duì)于此類模型動(dòng)物遺傳方面的研究,找到一種更接近于臨床自然發(fā)病形式,更能反映發(fā)病后實(shí)際病理生理狀態(tài)的缺血性腦卒中中醫(yī)證候模型,并為研究腦卒中相關(guān)證候模型或研究與遺傳有關(guān)其他疾病的病證結(jié)合動(dòng)物模型拓展新的研究思路,進(jìn)一步推動(dòng)相關(guān)領(lǐng)域的中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究的發(fā)展。

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1000-7369(2010）03-0337-03

△成都中醫(yī)藥大學(xué)臨床醫(yī)學(xué)院(成都 610075）

(收稿 2009-09-28;修回 2009-11-02）

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