王官成,白桂芝,袁江永

(1唐山市玉田縣醫(yī)院 ,河北玉田 064100;2邯鄲市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院; 3河北工程大學(xué)附屬醫(yī)院)

研究發(fā)現(xiàn)[1,2],在肝細(xì)胞肝癌(HCC)的侵襲轉(zhuǎn)移中,血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)為代表的促進(jìn)微血管生成的因子及蛋白水解酶系統(tǒng)起著重要作用。2008年 2月 ～2009年 10月,我們對(duì) 60例 HCC組織中VEGF、MMP-9進(jìn)行檢測(cè),觀察其在癌組織中的表達(dá)情況,探討其與HCC臨床分期的關(guān)系。

1 資料與方法HCC

1.1 臨床資料 本組60例HCC組織標(biāo)本均經(jīng)病理證實(shí)。60例患者中,男 45例,女 15例;年齡32～71(54.6±11.7)歲。隨訪資料完整,術(shù)前均未行任何形式的放化療和其他抗腫瘤治療。TNM分期：Ⅰ期4例、Ⅱ期25例、Ⅲ期21例、Ⅳ期 10例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 28例,無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 32例。另取對(duì)應(yīng)癌旁肝組織(距腫瘤邊緣2 cm)和25例正常肝組織(肝外傷切除)為對(duì)照。

1.2 免疫組化染色 所有標(biāo)本均用 10%甲醛固定,石蠟包埋,5μm厚連續(xù)切片,行免疫組化 SP染色。PBS液代替一抗作為陰性對(duì)照。操作及結(jié)果判定參照試劑盒說(shuō)明書(shū)。在高倍鏡下(×200)隨機(jī)計(jì)數(shù) 8～10個(gè)視野,計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)[3]。MMP-9、VEGF陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)相同,細(xì)胞質(zhì)中有棕黃色顆粒者為陽(yáng)性細(xì)胞,陽(yáng)性細(xì)胞 ＜10%為陰性、≥10%為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS12.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。率的比較用χ2檢驗(yàn),等級(jí)資料比較用Spearman等級(jí)相關(guān)檢驗(yàn)法。P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

HCC組織中 VEGF陽(yáng)性表達(dá)率為 80% (48/60),MMP-9為75%(45/60),均顯著高于癌旁組織的 11.6%、10%和正常肝組織中的 3.3%、1.6%(P均＜0.05)。VEGF、MMP-9與HCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有關(guān)(P均＜0.05)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的HCC組織中MMP-9、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率分別為78.6%(22/28)及89.3%(25/28),無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者分別為15.6%(5/32)及56.3%(18/32),兩者比較,P均＜0.05;Ⅲ～Ⅳ期HCC組織中MMP-9、VEGF陽(yáng)性表達(dá)率分別為72.4%(21/29)、86.2% (25/29),明顯高于Ⅰ～Ⅱ期的 16.1%(5/31)及61.3%(19/31),P＜0.05。

MMP-9呈陽(yáng)性表達(dá)的45例HCC組織中,VEGF表達(dá)均呈陽(yáng)性,MMP-9與VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)(r =0.526,P＜0.05)。

3 討論

在惡性腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中血管生成起著非常重要的作用,HCC是典型的富血管腫瘤,VEGF在其生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中起著極其重要的調(diào)節(jié)作用[4]。VEGF的生物學(xué)功能包括增強(qiáng)血管內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂,促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖、刺激新血管生成并增加血管通透性[5],同時(shí)還促進(jìn)腫瘤淋巴管生長(zhǎng),維持血管正常狀態(tài)和結(jié)構(gòu)的完整性。本研究結(jié)果顯示HCC組織中VEGF表達(dá)顯著高于癌旁組織和正常肝組織(P均＜0.05)。說(shuō)明VEGF在HCC生長(zhǎng)侵襲中起著重要作用。

近年來(lái)研究認(rèn)為局部基質(zhì)微環(huán)境在腫瘤形成上也起重要作用。腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移須完成 3個(gè)過(guò)程即降解細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的蛋白質(zhì),黏附ECM生長(zhǎng),離開(kāi)ECM向別處轉(zhuǎn)移[6]。表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞突破基底膜,侵入局部毛細(xì)血管和淋巴管,轉(zhuǎn)移至臨近組織器官。在此過(guò)程中,MMPs起到關(guān)鍵作用[7]。MMPs既參與ECM降解,也對(duì)腫瘤細(xì)胞的黏附及運(yùn)動(dòng)起重要作用。本研究結(jié)果顯示HCC組織中MMP-9表達(dá)顯著高于癌旁組織和正常肝組織(P均 ＜0.05)。說(shuō)明MMP-9在HCC生長(zhǎng)侵襲及轉(zhuǎn)移中起著重要作用。其作用機(jī)制可能為破壞局部組織結(jié)構(gòu),促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng);破壞基底膜屏障,促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移;促進(jìn)腫瘤新生血管的形成,誘導(dǎo)惡性腫瘤生長(zhǎng)、浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移。

本觀察結(jié)果還顯示,HCC組織中MMP-9、VEGF的陽(yáng)性表達(dá)率與HCC臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān), MMP-9與VEGF的表達(dá)存在正相關(guān),說(shuō)明MMP-9及VEGF表達(dá)上調(diào)促進(jìn)了HCC的發(fā)生發(fā)展,MMP-9和 VEGF在HCC的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中起著重要作用,兩者在HCC的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移中起著協(xié)同作用。

[1]彭利,王順祥,張風(fēng)瑞,等.基質(zhì)金屬蛋白酶-9和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子與原發(fā)性肝癌侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系研究[J].中華肝膽外科雜志, 2003,9(1)：42-43.

[2]朱軍華,陶凱雄,王國(guó)斌,等.TNF-α對(duì)肝癌細(xì)胞VEGF和MMP-9表達(dá)的影響[J].中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志,2005,12(4)：384-387.

[3]余昶,熊永炎.肝細(xì)胞性肝癌中MIF、CD147和MMP-9蛋白的表達(dá)及意義[J].武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2009,30(3)：358-359.

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[5]葉義標(biāo),陳濤.肝癌血管生成與抗血管生成治療的研究進(jìn)展[J].中國(guó)普外基礎(chǔ)與臨床雜志,2009,16(10)：861-862.

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