楊旭夫，彭 凌，朱必鳳

（韶關學院英東生物工程學院，廣東韶關 512005）

一、概述

副豬嗜血桿菌病又稱革拉瑟氏病，是由副豬嗜血桿菌引起的豬的多發(fā)性漿膜炎、漿液纖維素性心包炎、關節(jié)炎和腦炎。此病于1910年由Gl sser首次報道，歷經(jīng)多年后于1943年才命名為豬嗜血桿菌。最初認為本菌的感染與幼豬的關節(jié)炎有關，到1962年才通過動物試驗證明本病原菌可以引起豬的多發(fā)性漿膜炎、關節(jié)炎、心包炎及腦炎。而1960年，曾認為它與豬的流感有關，故命名為豬流感嗜血桿菌。1969年和1976年國際上有兩個研究小組，分別證明本菌在培養(yǎng)生長過程中不需要X因子，僅依賴V因子，因此把它更名為副豬嗜血桿菌，也就是現(xiàn)在一直沿用的名稱。實際上，豬嗜血桿菌是一個很稀有的種。目前，國際上把分離到的副豬嗜血桿菌菌株鑒定為15個血清型，研究還發(fā)現(xiàn)各個國家和地區(qū)存在和流行的病原菌血清型不相同，而且每年有大約20%～40%的新分離株不能用現(xiàn)有的血清分型鑒定，說明不斷有新的血清型變異株出現(xiàn)。研究發(fā)現(xiàn)，不同血清型菌株之間的交叉免疫保護性不強，或者無交叉保護作用，因此在免疫防治上，要使用病原菌血清型針對性強的疫苗才能奏效。

本病的臨床癥狀出現(xiàn)的往往很突然，先在一頭豬或幾頭豬發(fā)病，幾天后，才大批出現(xiàn)癥狀。病程分為過急性型或急性型，常常是體重最重的仔豬受感染。臨床癥狀取決于病變發(fā)生的部位。發(fā)病初期體溫增高至40.5℃～42℃，沉郁，食欲不振，最終食欲廢絕。外周循環(huán)障礙，皮膚發(fā)紺。有時見到眼瞼和耳部皮下水腫，結膜潮紅。呼吸也可能正常，也可能出現(xiàn)呼吸困難。有的病豬表現(xiàn)出痛苦的叫聲，由于跛行而行走緩慢或呈犬坐式。一個或幾個關節(jié)腫大，腕關節(jié)和跗關節(jié)多發(fā)。有很多病例表現(xiàn)出腦膜腦炎癥狀，肌肉振顫，行動遲緩，后肢共濟失調。有的病豬向一側傾斜，勉強能站立。國外有報道認為，1～2周齡仔豬感染，易出現(xiàn)敗血癥。

剖檢病變主要是纖維素性或漿液纖維素性腦膜炎，胸膜炎，心包炎，腹膜炎和關節(jié)炎，特別是在慢性病例往往心包積有大量的黃色或淡黃色、有時混有血色的漿液，心臟外膜有大量纖維素附著，即所謂“絨毛心”。有時心包與心外膜粘連成一體，甚至不能夠剝離。關節(jié)腫大，關節(jié)積液呈淡黃色，通常情況下不混濁，只有混感或感染其它細菌時表現(xiàn)混濁。這些病變在一頭豬并不同時出現(xiàn)，多見不同病變的組合，偶爾出現(xiàn)單一癥狀。國外報道SPF豬群發(fā)病以神經(jīng)癥狀為主，發(fā)病率高達62.2%。

過去認為，雖然豬多發(fā)性漿膜炎、關節(jié)炎是一種世界性疾病，但一般情況下發(fā)病率和死亡率不是很高，多為散發(fā)，往往有不同比例的死亡。通常是2周至4月齡豬發(fā)生，主要發(fā)生在5～8周齡斷奶豬，發(fā)病率高達50%。而SPF豬群老齡豬感染也會有高的死亡率。

副豬嗜血桿菌存在于豬的鼻腔，在正常的健康豬肺極少或不存在。有報道在45.5%的地方性肺炎病變中分離到副豬嗜血桿菌，表明它是機會性病原菌。

由于本病的病原菌副豬嗜血桿菌血清型比較多，各國各地區(qū)存在的血清型也不盡相同，毒力菌株也不相同，各自研制推廣應用的疫苗針對的病原菌血清型也不相同。如在我國使用的兩種進口副豬嗜血桿菌疫苗所含的抗原血清型完全不同，豬場在使用疫苗免疫預防時一定要注意血清型的針對性。副豬嗜血桿菌的毒力也不一致，報道在北美地區(qū)，腹腔接種6 kg SPF豬，每頭豬5 億個菌，1、5、10、12、13、14 型在接種后4 d內死亡和發(fā)病；2、4和15型引起多發(fā)性漿膜炎，8型株輕度發(fā)??；3、6、7、9、11型不發(fā)病無癥狀。另有報道，1和5型致病力強，能引起典型的革拉瑟氏病病變；2、3、4、6、7型無致病力。

二、副豬嗜血桿菌病的流行現(xiàn)狀

副豬嗜血桿菌引起的豬革拉瑟氏病，近年來已經(jīng)成為危害養(yǎng)豬業(yè)生產其經(jīng)濟意義比較大的一種豬傳染病。廣泛存在和發(fā)生于全世界所有養(yǎng)豬國家，特別是對現(xiàn)代工廠化高度衛(wèi)生標準的豬群，往往呈暴發(fā)的形式出現(xiàn)，突然死亡，發(fā)病率和死亡率均高于普通豬群。在國際上，在建立SPF豬群時要考慮本病的清除。事實上，沒有做到清除仍然構成危害。國外學者把這個病當成現(xiàn)代高度健康豬群新出現(xiàn)的經(jīng)濟意義和科學意義最大的一種豬的新傳染病。實際上，它不應該算作新的豬病，只不過是流行病學發(fā)生了一些變化而已。由過去的散發(fā)變成了現(xiàn)在的群發(fā)，由過去的仔豬多發(fā)變?yōu)橹胸i也發(fā)生，甚至各種年齡的豬都有發(fā)生。這種流行病學的變化與近年來新出現(xiàn)的免疫抑制性疾病如繁殖與呼吸道綜合征和Ⅱ型圓環(huán)病毒的感染有關，就是說免疫抑制性疾病出現(xiàn)，致使豬群的整體抵抗力下降，將這種過去不構成危害的疾病變成危害較大的傳染病。本病除了與上述兩種疾病存在因果關系與混感外，還與其它細菌性疾病如胸膜肺炎、多殺性巴氏桿菌性肺炎及支原體肺炎等的混合感染，可致使豬只的死亡率更高，損失更大。

由于副豬嗜血桿菌難以分離培養(yǎng)與保存，這是國際上公認的事實。無論是免疫預防研究，還是尋找敏感有效的治療或預防藥物，都需要做病原菌的分離或分型鑒定。因此，由于副豬嗜血桿菌難以分離，給本病的防治研究造成嚴重影響?，F(xiàn)代的分子生物學技術，僅能作為診斷和流行病學調查使用的工具。

在我國，2001年5月開始在華東地區(qū)大面積流行，造成了嚴重的經(jīng)濟損失，個別豬場由于本病的發(fā)生不能及時控制，出現(xiàn)嚴重虧損，甚至倒閉。在這次流行過程中，新發(fā)病豬群的發(fā)病率幾乎達到100%，哺乳仔豬死亡率高達100%，保育豬死亡率高達80%以上，育肥豬死亡率不高，但豬群整體健康水平較差。發(fā)病較久的豬群，哺乳期間發(fā)病率較低，40日齡之前發(fā)病率較低，45日齡后的保育豬幾乎100%發(fā)病，而且死亡率高達85%以上。當時在廣東省，據(jù)我們對省內部分地區(qū)豬場的調查，革拉瑟氏病的危害也比較嚴重，占斷乳豬死亡率的30%以上，嚴重豬群高達80%～100%。近幾年，我們對廣東省的四會市、順德、開平、新會、江門、佛山、云浮、韶關、樂昌、龍川、廣州蘿崗、汕尾，江西省的南昌市、東鄉(xiāng)、樟樹、定南、潘陽地區(qū)，湖南省的衡陽，福建南平，上海等地豬場，進行病原菌的分離鑒定與疾病調查。被調查豬場普遍存在副豬嗜血桿菌感染，而且相當嚴重，剖檢保育階段的病死豬，90%以上都有典型的副豬嗜血桿菌感染所引起的病變。本病是斷乳后保育豬死亡的主要原因。在近幾年出現(xiàn)的所謂“高熱病”發(fā)生豬群，均存在著副豬嗜血桿菌的混合感染。

據(jù)所有發(fā)病豬群的防疫人員反映，藥物治療效果不理想，容易出現(xiàn)反復發(fā)作，可能是由于病原菌出現(xiàn)了抗藥性的原因。在近幾年的全國機械化養(yǎng)豬協(xié)會的年會上，據(jù)現(xiàn)場防疫人員報告革拉瑟氏病在我國豬群普遍存在，而且危害相當嚴重，仍然是目前非常重要的經(jīng)濟意義比較大的細菌性傳染病。

三、防制對策

副豬嗜血桿菌病已經(jīng)成為危害我國養(yǎng)豬生產的一種常見且經(jīng)濟意義比較大的傳染病，由于病原菌的血清型比較多，國際上已經(jīng)鑒定為15個血清型，而且每年還有20%～40%的分離株不能用現(xiàn)有的15種血清進行分型鑒定?，F(xiàn)在正在我國豬群推廣應用的兩種進口副豬嗜血桿菌疫苗，其所含有的抗原血清型完全不同，其中一種為1和6型，另一種據(jù)說是4、5和13型。我國某生物制品公司生產的為4和5型。我們國家地域遼闊，所涵蓋的地理地貌氣候多樣，養(yǎng)豬場分布在全國各地，究竟在我國豬群存在哪些或哪種副豬嗜血桿菌血清型，不完全清楚。調查發(fā)現(xiàn)，各地對疫苗使用效果的評價也不一致，有的豬場認為使用某種疫苗后效果很好，而另外的疫苗效果不好；有的豬場認為的結果恰恰相反；有的豬場反映，使用某種疫苗效果好，而用過一段時間后效果又不好；還有的認為現(xiàn)有的疫苗效果都不理想，等等。說明了我國各地豬場存在的副豬嗜血桿菌血清型不完全相同，而且很復雜。

由于抗菌素的不合理使用，細菌性疾病病原的耐藥性已經(jīng)成為比較嚴重的問題，已經(jīng)危害到人類的公共衛(wèi)生。副豬嗜血桿菌的感染也是這樣，各地頻繁發(fā)生副豬嗜血桿菌感染治療效果不理想的問題，導致豬群出現(xiàn)大批死亡損失。藥物預防和治療，由于盲目用藥除了使細菌產生抗藥性而防治無效外，還造成了較大的浪費。我們通過分離病原菌做藥物敏感性試驗，發(fā)現(xiàn)不同豬群的副豬嗜血桿菌對抗菌素敏感性的差異很大，同一豬群不同時間采樣分離的副豬嗜血桿菌也存在著抗菌素敏感性的差異。通過多年來的研究和在生產實際中應用總結，我們提出了副豬嗜血桿菌病的防治對策。

（一）發(fā)病豬群的防治對策對正在發(fā)生副豬嗜血桿菌病的豬場，可對病豬采取病料及發(fā)病豬只的同群豬采取鼻腔分泌物進行細菌分離?，F(xiàn)場采取病料后，接種自制的專門培養(yǎng)基，在含有10%CO2氣體的蠟燭罐中培養(yǎng)16～20 h，帶回實驗室，取可疑菌落進行純培養(yǎng)，將純培養(yǎng)物進行生化鑒定。對已經(jīng)鑒定為副豬嗜血桿菌的分離物進行藥物敏感性試驗，由于副豬嗜血桿菌不能在對一般細菌推薦的水解酪蛋白瓊脂上生長，藥敏試驗仍然用同一專門培養(yǎng)基，采用藥敏紙片擴散法。培養(yǎng)16～20 h，觀察結果。一般情況下，4日內即可明確分離菌株的敏感藥物種類，將藥敏試驗結果通知當?shù)刎i場。對發(fā)病早期豬和與發(fā)病豬同群豬進行投藥，很快就能阻止新病例發(fā)生，效果明顯。在用現(xiàn)有的國外進口疫苗和國產商品化疫苗無效時，可能是發(fā)病豬群的副豬嗜血桿菌血清型與疫苗抗原的血清型不吻合，建議用所分離菌株制備自家細菌培養(yǎng)的滅活疫苗。在制備自家疫苗前，首先要明確豬群存在副豬嗜血桿菌的種類。在沒有標準分型血清的情況下，可采用分子生物學方法，對病原菌經(jīng)ERIC—PCR快速分型和遺傳差異分析，并通過接種實驗動物進行毒力測定后，制備病原菌血清型針對性強的自家分離菌株滅活疫苗，進行免疫預防，可大大提高免疫預防的有效性。要引起注意的是，副豬嗜血桿菌病絕不能用自家組織滅活苗，因為自家組織滅活疫苗中有效抗原含量太低，不會引起免疫，而且還存在著傳播其它疾病的風險。

（二）未發(fā)病豬群的預防對策對尚未發(fā)生副豬嗜血桿菌病的豬場，由于副豬嗜血桿菌是一種機會性病原菌，存在于正常豬的上呼吸道中，可對正常保育豬和哺乳仔豬的鼻腔采取鼻腔分泌物作為細菌分離材料，接種培養(yǎng)基進行細菌分離，生化特性鑒定及分子生物學鑒定等。對確定為副豬嗜血桿菌的分離菌株進行藥物敏感性試驗，篩選敏感有效的治療和保健用藥。一旦豬群有副豬嗜血桿菌病例出現(xiàn)，可對易感群進行投藥防治。

四、結束語

副豬嗜血桿菌病在我國豬群普遍存在，已經(jīng)是引起豬場保育豬死亡的主要細菌性疾病，控制本病的方法是用疫苗免疫接種和藥物保健預防。由于本病病原菌血清型比較多，使用疫苗一定要有血清型的針對性。在使用現(xiàn)有的商品化疫苗免疫無效的情況下，可用自家細菌分離物制備滅活疫苗，其血清型的針對性更強，目前國外報道也持這種觀點。對已經(jīng)發(fā)病的豬進行藥物個體治療意義不大，特別是已經(jīng)產生器質性病變的豬，治療不會使已經(jīng)產生的病變消失，而且臨床治愈康復豬變成生長遲滯的僵豬，也易復發(fā)或感染其它疾病導致死亡。疾病發(fā)生早期治療或保健性預防用藥效果明顯，但一定要選擇敏感的抗菌素藥物。在體外藥敏試驗篩選出的敏感藥物中，注意選擇能在目標器官組織有良好分布的抗菌素。通過對大量的副豬嗜血桿菌分離株進行敏感藥物監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)不同地域的分離菌株對抗菌素的敏感程度存在著差異，同一豬群間隔不同時間的分離菌株對抗菌素的敏感性也存在著差異。所以說，要對副豬嗜血桿菌進行定期的敏感性藥物監(jiān)測。在沒有合適的疫苗可應用的情況下，敏感性抗菌素篩選試驗的研究結果，用于養(yǎng)豬場的副豬嗜血桿菌感染的早期治療及保健性預防用藥效果比較明顯，對于及時控制副豬嗜血桿菌感染與流行起到了減少經(jīng)濟損失的作用。但是長期用同種藥物可能出現(xiàn)副豬嗜血桿菌的抗藥性問題，因此，實時監(jiān)測副豬嗜血桿菌對抗菌素的藥物敏感性，篩選敏感有效的價格低廉的抗菌素，對于指導養(yǎng)豬生產過程的副豬嗜血桿菌病的早期治療與預防保健合理用藥有著十分重要的實踐意義。我們研究還發(fā)現(xiàn)，所分離的菌株幾乎全部對阿莫西林、林可霉素、復方新諾明有抗藥性，絕大多數(shù)菌株對卡那霉素、慶大霉素抗藥或不敏感，幾乎所有菌株都對頭孢噻呋鈉、頭孢噻肟、施美芬、菌必治、氟苯尼考及替米考星高度敏感，僅供在選擇用藥時參考。