何欣蓉,劉 馨,黃一凡

(川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科,四川 南充 637000)

轉(zhuǎn)化生長因子 -β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)為具有多功能的細(xì)胞因子,能促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的形成,抑制免疫功能,調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長分化,并對多種腫瘤細(xì)胞具有抑制增殖及激活凋亡作用。而近年已經(jīng)在膽管癌,胃癌,胰腺癌,結(jié)直腸癌等多種惡性腫瘤中發(fā)現(xiàn) TGF-β1的表達(dá)異常[1-4]。本文應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測 TGF-β1蛋白在肺癌及肺良性疾病組織中的表達(dá)情況,探討其在肺癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病例:選取 2007年至 2008年川北醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院例肺癌根治術(shù)標(biāo)本 77例為實(shí)驗(yàn)組,另選取 20例良性肺疾病組織為對照組。全部病例均經(jīng)病理診斷證實(shí)。其中男性 58例,女性 19例。年齡為 39-73歲,平均年齡 64.7歲。組織學(xué)分類腺癌16例,鱗癌 54例,腺鱗癌 2例,肉瘤樣癌 3例,小細(xì)胞神經(jīng)內(nèi)分泌癌 2例。高分化 10例,中分化 14例,低分化 46例。其中有淋巴轉(zhuǎn)移 42例,無轉(zhuǎn)移 28例。同時(shí)收集肺大皰 10例,肺結(jié)核 6例,肺膿腫 4例,共計(jì) 20例作為對照。

1.1.2 試劑:兔抗人 TGF-β1多克隆抗體購自Santa cruz公司,使用濃度為 1:100。二抗、即用型二步法檢測試劑盒 PV-9000和 DAB染色試劑盒購自北京中山公司。

1.2 方法:以 TGF-β1蛋白表達(dá)為陽性的乳腺癌組織為陽性對照,PBS代替一抗為陰性對照,采用SP法進(jìn)行染色。具體步驟如下:石蠟標(biāo)本行 4μm厚連續(xù)切片,脫蠟,對切片進(jìn)行預(yù)處理。3%過氧化氫去離子水孵育 10分鐘,阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。PBS沖洗,2分鐘 ×3次。滴加一抗,4℃濕盒過夜。PBS沖洗 3次,2分鐘 ×3次。滴加 PV-9000工作液,37℃濕盒內(nèi)孵育 30分鐘,PBS沖洗,2分鐘 ×3次。選用 DAB顯色,自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明,封片。

1.3 結(jié)果判斷:DAB顯色法陽性染色為棕黃色顆粒,TGF-β1蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中,細(xì)胞核中偶見散在陽性物質(zhì)表達(dá)。參照 1996年 5月北京“全國免疫組織化學(xué)技術(shù)與診斷標(biāo)準(zhǔn)化專題研討會”標(biāo)準(zhǔn)[5],每張切片隨機(jī)觀察 5個(gè)高倍視野(×400),計(jì)數(shù)每個(gè)視野中染色陽性細(xì)胞數(shù),陽性細(xì)胞 ＜20%為(-),＞20%為(+)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:應(yīng)用 SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行卡方檢驗(yàn)。p＜0.05為統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 肺癌中 TGF-β1蛋白的表達(dá):本組 77例肺癌標(biāo)本中,TGF-β1的陽性率分為 44.2%,明顯高于良性肺疾病組(15%),兩者之間存在顯著性差異(p＜0.05),見圖 1、圖 2。

2.2 TGF-β1蛋白表達(dá)與肺癌癌主要病理特征的關(guān)系:77例肺癌標(biāo)本中,腺癌 16例,鱗癌 54例,腺鱗癌 2例,小細(xì)胞神經(jīng)內(nèi)分泌癌 2例,肉瘤樣癌 3例。因腺鱗癌、小細(xì)胞神經(jīng)內(nèi)分泌癌、肉瘤樣癌例數(shù)過少,沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。腺癌中有 9例 TGF-β1陽性,鱗癌中有 22例陽性,腺癌的陽性率(56.25%)和鱗癌的 TGF-β1陽性率(40.74%)之間相互比較,差異無顯著性意義(p＞0.05);組織學(xué)分級高分化 10例(其中陽性 1例,陽性率為 10%),中分化 14例(陽性 2例,陽性率為 14.3%),低分化 46例(陽性 28例,陽性率為 60.9%),低分化組的陽性率與高、中分化之間有顯著性差異(p＜0.05);淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移的 28例(陽性 7例,陽性率為 25%),淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移 42例(陽性 24例,陽性率為 57.1%),兩者之間 TGF-β1表達(dá)差異有顯著性意義(p＜0.05),見表1。

3 討 論

TGF-β1是 TGF-β家族的主要成員,廣泛參與細(xì)胞的分化、增殖及凋亡等多種病理生理過程,在不同的器官組織中有不同的功能。在胚胎時(shí)期,TGF-β1的表達(dá)比較高,與正常肺的形態(tài)發(fā)生密切相關(guān),而在成熟肺的支氣管上皮細(xì)胞中表達(dá)水平低?，F(xiàn)許多研究表明,在多種腫瘤細(xì)胞中 TGF-β1水平明顯增高,并與腫瘤的生長、浸潤和轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。

表1 TGF-β1蛋白表達(dá)與肺癌主要臨床病理特征的關(guān)系

TGF-β1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制非常復(fù)雜,目前研究表明其主要介導(dǎo)兩個(gè)效應(yīng)相反的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路:Smad和 MAPK通路,經(jīng)典的 MAPK通路是 ERK通路。TGF-β1/Smad通路被激活后,對上皮細(xì)胞而言,起抑制增殖作用。而 TGF-β1/ERK通路效應(yīng)是促使細(xì)胞增生。因此在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中,高表達(dá)的TGF-β1可能激活 ERK通路。Iglesias[6]等研究證實(shí),TGF-β1能激活 Ras/ERK通路,使腫瘤細(xì)胞表型從高分化向低分化過渡。

由于 TGF-β1作用的雙向性,其與腫瘤生物學(xué)行為間的關(guān)系,文獻(xiàn)報(bào)道不一。朱紅[7]等通過對TGF-β1mRNA水平的檢測表明,TGF-β1在肺腺癌組織中的表達(dá)明顯高于非腫瘤肺組織,并且隨著腫瘤分期的升高其表達(dá)也增加,淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的TGF-β1表達(dá)水平高于無轉(zhuǎn)移組。馬進(jìn)安[8]等研究表明 TGF-β1的陽性表達(dá)在腺癌中的表達(dá)高于鱗癌和小細(xì)胞癌,與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期明顯相關(guān)。HasegaWa[9]等研究中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的非小細(xì)胞肺癌患者,其 TGF-β1蛋白水平顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。

我們從蛋白水平檢測了 TGF-β1,結(jié)果表明肺癌組織中 TGF-β1表達(dá)水平明顯高于良性疾病組織,TGF-β1蛋白的高表達(dá)與臨床常見的肺癌組織類型無關(guān),而與組織分化及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),分化越低的陽性率越高,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的肺癌標(biāo)本中TGF-β1蛋白的陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的。由此提示 TGF-β1可能與肺癌的發(fā)生及進(jìn)展有關(guān),有可能作為判斷人肺癌細(xì)胞惡性程度的指標(biāo)之一。

肺癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)極其復(fù)雜的過程,涉及諸多因素,但可以看出,TGF-β1在其中起著非常重要的作用。至于高表達(dá)的 TGF-β1在細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化中所起的作用還有待于進(jìn)一步研究。

[1] 朱衛(wèi)東,湯恢煥,歐陽迪平,等 .Smad4蛋白和 TGF-β1及TβR II在膽管癌中表達(dá)的研究[J].中國普通外科雜志,2004,13(7):502-505

[2] 許春進(jìn),劉 華,陳玉龍,等.轉(zhuǎn)化生長因子 β1基因和細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶在胃癌中的表達(dá)和意義[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志,2002,11(3):245-248

[3] 董春燕,劉鐵夫,李兆申,等.TGF-β1和 ERK/ERK 2的相互作用及對人胰腺癌細(xì)胞生長的影響[J].第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2005,26(3):314-318

[4] Tsushima H,Kawata S.High levels of transforming growth factor beta-1 in patients with colorectal cancer:association with disease progression.Gastroenterology[J].1996,110(2):375-382

[5] 中華病理學(xué)會雜志編輯委員會.《全國免疫組織化學(xué)技術(shù)與診斷標(biāo)準(zhǔn)化專題研討會》會議紀(jì)要[J].中華病理學(xué)雜志,1996,25(6):326-328

[6] Iglesias M,Frontelo P,Gamallo C,et a1.Blockade of smad-4 in transformed keratinocytes containing a Ras oncogene leads to hyperactivation of the Ras-dependentErk signaling pathway associated witll progression to undiferentiated carcinomas[J].Oncogene,2000,19(36):4134-4145

[7] 朱 紅,項(xiàng)鋒鋼.TGF-β1 mRNA在肺腺癌組織中的表達(dá)[J].青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2007,43(5):419-423

[8] 馬進(jìn)安,張連部.肺癌轉(zhuǎn)化生長因子 β1的表達(dá)與預(yù)后的相關(guān)性研究[J].腫瘤研究與臨床,2000,12(2):75-77

[9] Hasegawa Y,Takanashi S,Kanehira Y,et a1.Transforming growth factor-β1 level corelates with angiogenesis,tumor progression,and prognosis in patientswith nonsmall cell lung carcinoma[J].Cancer,2001,91(5):964