研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞外的乙肝病毒DNA是一種松弛環(huán)狀的雙鏈DNA分子，其兩條鏈均不是閉合的，其中負(fù)鏈較長，有數(shù)個(gè)堿基的“缺刻”；正鏈較短，有較大的“缺口”。在乙肝病毒的復(fù)制過程中，病毒DNA進(jìn)入宿主細(xì)胞核，在DNA聚合酶的作用下，兩條鏈的缺口均被補(bǔ)齊，形成超螺旋的共價(jià)、閉合、環(huán)狀DNA分子(英文簡(jiǎn)稱cccDNA)。cccDNA是乙肝病毒前基因組RNA復(fù)制的原始模板，雖然其含量較少，每個(gè)肝細(xì)胞內(nèi)只有約5～50個(gè)拷貝，但對(duì)乙肝病毒的復(fù)制以及感染狀態(tài)的建立具有十分重要的意義。近年來，國內(nèi)一些大醫(yī)院已建立了可靠的檢測(cè)方法。

評(píng)價(jià)慢性乙肝抗病毒治療療效目前考核抗病毒藥物療效的標(biāo)準(zhǔn)，都是建立在乙肝病毒被抑制或可能被清除的間接評(píng)價(jià)指標(biāo)之上，比如，病毒DNA達(dá)到不可測(cè)水平、HBeAg消失或血清轉(zhuǎn)換、HBsAg消失或血清轉(zhuǎn)換等。只有徹底清除了細(xì)胞核內(nèi)的cccDNA，乙肝病毒復(fù)制的基礎(chǔ)不復(fù)存在了，才是真正治愈了乙肝?？梢?，考核抗病毒治療的最終療效標(biāo)準(zhǔn)，應(yīng)該是清除cccDNA，其他任何指標(biāo)與之相比只能是“次要”標(biāo)準(zhǔn)。有研究表明，在血清HBsAg被清除的乙肝病毒感染者中，肝細(xì)胞內(nèi)仍有cccDNA存在。但清除cccDNA的過程比較漫長，需要較高的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)成本，而且在現(xiàn)有條件下進(jìn)行長期治療，伴隨的必然是藥物不良反應(yīng)的增加以及病毒耐藥突變等。因此，是否把清除cccDNA作為治療終點(diǎn)，還需要進(jìn)行更多的研究。

篩選抗病毒藥物目前的抗病毒藥物均不能有效清除CCCDNA，因此，開發(fā)新的、能清除CCCDNA的藥物是患者和醫(yī)生共同的期待。遺憾的是，CCCDNA分子在細(xì)胞內(nèi)形成的一些關(guān)鍵環(huán)節(jié)，目前還不清楚或存在爭(zhēng)論。如果能闡明這些環(huán)節(jié)，將有助于指導(dǎo)開發(fā)新的、能夠清除eecDNA的抗病毒藥物。

評(píng)價(jià)乙肝病毒復(fù)制的模型一種細(xì)胞或動(dòng)物模型能否支持乙肝病毒復(fù)制，cccDNA可以作為一個(gè)較好的評(píng)價(jià)指標(biāo)。最典型的例子是乙肝病毒轉(zhuǎn)基因小鼠，盡管能檢測(cè)到rcDNA和各種病毒抗原蛋白，并且能合成大量的乙肝病毒，但在其肝細(xì)胞核內(nèi)未能檢測(cè)cccDNA，因此，轉(zhuǎn)基因鼠不能作為乙肝病毒感染的動(dòng)物模型。相反，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)用乙肝病毒去感染原代培養(yǎng)的樹鼠肝細(xì)胞，其細(xì)胞核內(nèi)存在乙肝病毒cccDNA，因此，樹鼠可能是支持乙肝病毒復(fù)制的小動(dòng)物模型。

評(píng)價(jià)肝組織損傷程度乙肝病毒cccDNA分子雖存在于肝細(xì)胞核內(nèi)，但從理論上推測(cè)，如果乙肝患者變性壞死的肝細(xì)胞較多，血清中是完全有可能檢測(cè)到cccDNA的。如肝衰竭大面積肝壞死時(shí)，外周血中檢測(cè)到cccDNA的機(jī)會(huì)就比較大。

應(yīng)用于肝移植乙肝病毒cccDNA檢測(cè)技術(shù)在肝移植中的應(yīng)用至少包括2個(gè)方面，即肝臟移植供者的篩查，和受者乙肝病毒感染或再感染的早期發(fā)現(xiàn)。由于不能排除抗HBc陽性供體肝臟中存在乙肝病毒可能，有學(xué)者主張對(duì)受者進(jìn)行預(yù)防性抗病毒治療，以防止受體感染或再感染乙肝病毒。筆者認(rèn)為，完全可以對(duì)此類供體進(jìn)行cccDNA檢測(cè)，如陰性則沒有必要進(jìn)行過度的預(yù)防性抗病毒治療。同樣，如受者原為乙肝病毒感染者，也可以定期對(duì)其肝組織進(jìn)行乙肝病毒cccDNA檢測(cè)，判斷肝細(xì)胞內(nèi)有無乙肝病毒復(fù)制，以便早期發(fā)現(xiàn)乙肝病毒感染或再感染，甚至用于指導(dǎo)抗病毒藥物的使用療程和乙肝免疫球蛋白劑量的調(diào)整。關(guān)于cccDNA檢測(cè)技術(shù)在肝移植中的應(yīng)用，還有待于進(jìn)一步臨床研究。