程 潔,朱 毅

(南京中醫(yī)藥大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院,江蘇南京 210046)

創(chuàng)傷愈合是一個復(fù)雜的生理生化以及分子生物學(xué)過程,炎癥和免疫反應(yīng)是創(chuàng)面愈合過程中重要的病理生理變化。燒傷創(chuàng)面早期存在進行損害,使創(chuàng)面加深,防止或減輕創(chuàng)面的早期進行性損害,將有利于創(chuàng)面愈合。已有實驗研究[1]顯示：針刺有促進燒傷創(chuàng)面的愈合作用,其作用機制可能是多方面的,其中與減輕燒傷創(chuàng)面早期水腫、改善創(chuàng)面微循環(huán)、進而減輕創(chuàng)面早期進行性損害有關(guān)。經(jīng)皮電刺激神經(jīng)療法(TENS)能改善局部血運,促進水腫吸收,緩解疼痛。

中性粒細胞(polymorphonuclear neutrophil,PMN)在失控性全身炎癥(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)反應(yīng)中的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸起著關(guān)鍵作用,且凋亡是清除 PMN的非炎癥方式,可以有效地避免周圍組織損傷[2]。本實驗旨在探討針刺、局部TENS治療對大鼠中性粒細胞影響及對燒傷 SIRS的干預(yù)防治作用。

1 材料與方法

1.1 材料

恒溫恒壓燙傷儀;Percoll淋巴細胞分離液;Pextran-75000(phaimacia);Annexin V-FITC試劑盒;戊巴比妥鈉及流式細胞儀分析。

1.2 方法

1.2.1 實驗動物分組與模型制備

清潔級 SD大鼠 40只,體重 230～250 g,由香港理工大學(xué)實驗動物中心提供,隨機分成 4組：針刺組(n=10),TENS組(n=10),燒傷組(n=10),空白組(n=10)。燒傷造模,以 100 ml/l水和氯醛液經(jīng)腹腔內(nèi)注射麻醉(30 mg/kg),背部脫毛,次日同法麻醉。用恒溫恒壓燙傷儀以直徑 2.5 cm,90℃,2.3 KPa壓力燙傷大鼠背部皮膚 15 s,制成 2.5 cm的深 II度創(chuàng)面 1個(經(jīng)病理驗證)。

1.2.2 治療

30只經(jīng)燒傷造模的實驗大鼠,予乳酸林格氏液(50 ml/kg)抗休克。針刺組在造模后立即取大鼠雙側(cè)“足三里”(李忠仁《實驗針灸學(xué)》)。常規(guī)消毒,針刺后接電針儀,頻率 20 Hz,強度 2～4 mA,電壓 1～3 V,斷續(xù)波。強度以保持針刺局部輕微抖動為度,治療時間30 min。

TENS組在造模后,在燒傷創(chuàng)面四周健康皮膚(距離創(chuàng)面邊緣約 0.5 cm)擺放雙通道 4個 TENS電極,電流強度 4 mA,治療時間 30 min。

空白組不做任何處理,大鼠自由飲水,進食。

1.2.3 標(biāo)本的取材和處理

燒傷組、針刺組、TENS組在建模成功后 24 h心臟取血 5 ml,之后放血處死。取其后肢雙側(cè)股骨,用肝素、生理鹽水 10 ml沖洗骨髓腔。收集 10 ml于玻璃瓶中反復(fù)抽打成單細胞懸液,以常規(guī)方式分離周圍血中和骨髓中中性粒細胞。以流式細胞儀檢測周圍血中和骨髓中性粒細胞的凋亡和壞死。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 燒傷造模 24 h后骨髓中性粒細胞的凋亡率

燒傷造模 24 h后骨髓中性粒細胞凋亡率針刺組較 TENS組、燒傷組有明顯增加。見表1。各組數(shù)據(jù)經(jīng)方差分析總體有顯著性差異(P＜0.05),兩兩比較亦有顯著性差異(P＜0.05)。

表1 各組在造模24 h后骨髓 PMN的凋亡率

2.2 燒傷造模 24 h后周圍血中中性粒細胞的凋亡率

燒傷造模 24 h后周圍血中性粒細胞凋亡率針刺組較 TENS組、燒傷組有明顯增加。見表 2。各組數(shù)據(jù)經(jīng)方差分析,總體上有顯著性差異(P＜0.05);兩兩比較,TENS組與燒傷組無顯著性差異(P＞0.05),針刺組與燒傷組比較、針刺組與 TENS組比較均有顯著性差異(P＜0.05)。

表2 各組 24 h后周圍血中PMN的凋亡率

3 討論

燒傷創(chuàng)口愈合是一種病理愈合,在病理情況下傷口愈合延緩,主要是炎癥過程和機體免疫功能失調(diào)。在傷后愈合的早期表現(xiàn)出機體炎癥反應(yīng)異?；?和免疫功能抑制。

燒傷早期重要的病理變化就是中性粒細胞(PMN)在失控性全身炎癥反應(yīng)(SIRS)中發(fā)展預(yù)后中起著重要作用。

燒傷后周圍血中中性粒細胞增多主要是由于燒傷后邊緣池中性粒細胞釋放入循環(huán)池和骨髓生成釋放中性粒細胞增多以及體液丟失血液濃縮所致。張丕紅等[3]發(fā)現(xiàn),燒傷早期中性粒細胞凋亡明顯減少。這可能是燒傷早期中性粒細胞數(shù)目增加的重要機制之一。燒傷后骨髓中中性粒細胞加快釋放入血且血漿抑制中性粒細胞凋亡[4],進而使周圍血中中性粒細胞數(shù)目增加。實驗觀察針刺可以促進燒傷大鼠周圍血中中性粒的凋亡,進而使周圍血中中性粒細胞數(shù)目相對減少,從而減輕炎癥反應(yīng)以及臟器損害。

總之,中性粒細胞是 SIRS的重要參與者,其凋亡延遲導(dǎo)致了組織損傷。本次實驗中,針刺“足三里”既能促進骨髓中性粒細胞的凋亡,減少其釋放入血,又能直接促進外周血的中性粒細胞凋亡,從而減輕炎癥反應(yīng)以及臟器損害。這有力證實了針刺這一外治療法在對于燒傷后全身免疫機制的調(diào)節(jié)。局部 TENS治療則能促進外周血中性粒細胞的凋亡,對骨髓中性粒細胞沒有顯著影響,但在一定程度上也對臨床治療有指導(dǎo)意義。

[1] 謝有富,葉慧貞,梁佩紅,等.針刺對深 II度燒傷創(chuàng)面愈合的影響[J].新中醫(yī),2000,32(10)：22

[2] 羅志剛,皇子通.中性粒細胞凋亡與多器官功能障礙綜合癥[J].嶺南急診醫(yī)學(xué)雜志,2007,12(6)：478-479

[3] 張丕紅,馬恩慶,黃曉元,等.家兔燙傷早期中性粒細胞凋亡變化[J].中華外科雜志,1999,37(12)：771-773

[4] Chitnis D,Dickerson C,Munster AM,el al.Inhibition of apoptosis in polymorphonuclear neutrophils from burn patients[J].J Leukoc Biol,1996,59(6)：835-839